Foxp3在老年Ⅰ/Ⅱ期非小細胞肺癌中的表達及臨床意義

張舸 薛雷 趙曉龍 杜海榮

(秦皇島市第一醫院胸外科，河北 秦皇島 066000)

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Foxp3在老年Ⅰ/Ⅱ期非小細胞肺癌中的表達及臨床意義

張舸 薛雷 趙曉龍 杜海榮

(秦皇島市第一醫院胸外科，河北 秦皇島 066000)

目的 通過免疫組化法實驗觀察Foxp3在老年Ⅰ/Ⅱ期非小細胞肺癌中的表達，探討其在表達的意義及其與臨床特點的相關性。方法 采用S-P免疫組化法檢測160例有完整資料的非小細胞肺癌術后腫瘤標本和100例距離腫瘤5 cm以上的正常肺組織中Foxp3蛋白的表達情況。分析Foxp3在老年Ⅰ/Ⅱ期非小細胞肺癌組織中的表達差異；分析其與不同病理類型原發腫瘤直徑、淋巴結轉移等病理特征相關性。并且通過Kaplan-Meier生存曲線法比較陽性組和陰性組患者的預后情況。結果 在非小細胞肺癌中Foxp3陽性表達率為51.8%顯著高于癌旁組織中的37.0%；Foxp3在老年Ⅰ/Ⅱ期非小細胞肺癌組織中的陽性表達與腫瘤的原發腫瘤大小，淋巴結轉移情況有顯著的相關性(P<0.05)。 Kaplan-Meier生存曲線分析顯示患者術后5年無瘤生存率隨Foxp3陽性表達呈現下降趨勢。結論 Foxp3在非小細胞肺癌組織中的表達明顯增加，提示 Foxp3表達增加促使肺癌細胞發生腫瘤逃逸、對促進肺癌的形成發揮重要作用。Foxp3陽性表達5年無瘤生存率低。

Foxp3； 老年非小細胞肺癌； 早期肺癌； 預后

隨著老齡人口比例逐漸增加，呼吸系統疾病也相應增多，約1/3的非小細胞癌發生于65歲以上的老年人群中。調節性T細胞(Treg)為免疫抑制中重要的T細胞亞群之一。叉頭樣轉錄因子3(Foxp3)是Treg細胞中目前明確的標志性轉錄因子，其功能包括促進Treg發育以及幫助Treg發揮免疫抑制作用[1]。Treg細胞在自身免疫反應中具有抑制免疫性炎癥損害的中藥作用，而Treg在腫瘤免疫中被發現能對機體抗腫瘤免疫應答機制起到阻礙作用，幫助腫瘤在機體發展。本文通過免疫組化法檢測并分析Foxp3在老年Ⅰ/Ⅱ期非小細胞肺癌中的表達與病理特征及腫瘤預后的相關性，探討其在癌組織中的增殖活性，為評估老年非小細胞癌的生物學行為，預后以及直到術后治療方案的選擇提供參考依據。

1 材料和方法

1.1 一般資料 患者標本均來自2006年1月至2010年1月期間秦皇島市第一醫院病理科，實驗組均為非小細胞癌石蠟標本，共收集160例，對照組為腫瘤5 cm以外的正常肺組織，共收集100例。實驗組標本中，來自男性96例，女性64例，年齡65～78歲，中位年齡69歲，平均年齡(71.15±15.75)歲，患者資料顯示術前均未接受放、化療。按照WHO肺癌分型及UICC(2014年)肺癌分期標準判斷，有腺癌標本97例，鱗癌標本63例；Ⅰ期標本70例，Ⅱ期標本90例。

1.2 材料 標本均來源我院病理科，Foxp3兔抗人單克隆抗體(美國e Bioscience)，S-P超敏免疫組織化學試劑盒(福州邁新生物技術公司)和二氨基聯苯胺(DAB)顯色試劑盒(福州邁新生物技術公司)，倒置顯微鏡(Olympus，日本)。

1.3 方法 對實驗組患者進行電話隨訪，均獲得較完整符合研究進行的資料。本研究中復發患者定義為手術日至出現復發或轉移日，無復發或轉移患者為手術日至隨訪當日(具體記錄形式為2015年1月)；總生存期(OS)為：死亡患者為手術日至死亡日，未死亡患者為手術日至隨訪日(具體記錄形式為2015年1月)。所有隨訪結束后，160例中隨訪137例(85.6%)，失訪(14.3%)，存活89例，復發53例。FoxP3的表達采用免疫組化S-P法。

1.4 結果判定 Foxp3的陽性染色標準為細胞核著色，鏡下可見細胞核表達棕黃色或棕褐色顆粒物。在顯微鏡高倍鏡下隨機10個視野，共100×10個腫瘤細胞。根據染色程度和染色細胞比例綜合評分：染色情況0分，基本不著色為：1分，淡棕色；2分，較明顯棕黃色或棕褐色；3分，深棕黃色或棕褐色；著色比例：0分，計數細胞中顯色細胞比例≤5%；1分，6%～25%；2分，26%～50%；3分，>50%。將每個視野著色程度和比例相乘，計算每個標本情歌視野平均得分：1分，陰性(-)；2～3分，著色(+)；4～6分，著色(++)；>6分，著色(+++)。本研究中陰性表達為(-)和(+)，陽性表達為(++)和(+++)。

1.5 統計學處理方法 應用 SPSS 19.0統計軟件，計數資料采用率表示，不同組間比較χ2檢驗，生存率的組間比較采用Kaplan-Meier生存曲線法及Log-rank檢驗，以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 免疫組織化學檢測結果 Foxp3在癌旁正常肺組織中陽性表達為37.0%(37/100)；在非小細胞肺癌組織中其性表達率是51.8%(83/160)，陽性著色部位均為細胞核，Foxp3蛋白在非小細胞肺癌組織和癌旁正常肺組織中的表達差異有統計學意義(P<0.05)。

2.2 組織表達與臨床病理特征關系 老年Ⅰ/Ⅱ期非小細胞肺癌組織中Foxp3表達與臨床分期，分化程度及家族史均無明顯相關性(P>0.05)。與原發腫瘤大小、淋巴結轉移情況及無瘤生存時間均具有相關性(P<0.05)，與淋巴結轉移成正相關(r=0.423，P=0.000) ，見表1。

表1 非小細胞肺癌中Foxp3的表達與病理參數的關系

2.3 組織中表達與術后5年無瘤生存的關系 對160例患者進行Kaplan-Meier生存曲線分析，本組患者有23例失訪，2例術后出現意外死亡，結果顯示在非小細胞肺癌組織中Foxp3表達(-)組5年無瘤生存率為41.7%；Foxp3表達(+)組患者5年無瘤生存率為26.3%，陰性組中位無瘤生存時間為38個月，陽性組中位無瘤生存時間為28個月，提示患者術后無瘤生存期隨Foxp3的陽性表達顯著下降，Log-rank檢驗結果顯示兩者差異有統計學意義(χ2=7.160，P=0.007)。結果顯示在非小細胞肺癌組織中Foxp3表達(-)組總生存率為71.4%；Foxp3表達(+)組患者總生存率為48.7%，陰性組中位總生存時間未達及，原因考慮為樣本量較小，及隨訪時間較短造成，陽性組中位總生存時間為35個月，提示患者術后總生存期隨Foxp3的陽性表達顯著下降，Log-rank檢驗結果顯示兩者差異有統計學意義(χ2=7.594，P=0.006)。

3 討 論

非小細胞肺癌(NSCLC)約占肺癌的80%～85%。既使患者的臨床分期相同，術后生存率也不一樣，說明有影響NSCLC預后的其他因素，需要通過研究找到判斷、預示NSCLC發生、發展的新標志物。Foxp3屬于脊椎動物叉頭樣轉錄因子家族，人類Foxp3基因定位在Xp11.23，有11個外顯子和10個內含子，cDNA長度1869 bp，可編碼2類mRNA亞型，包括全長和缺少第3外顯子(Δ3亞型)型[2]。同時，編碼中可產生Scurfin蛋白，其含有431個氨基酸，N端為一個鋅指結構和亮氨酸拉鏈，為轉錄抑制區域，C端為叉頭螺旋樣結構。Scurfin蛋白經Rorkhead區域同DNA結合，發揮基因活化和表達作用[3]。本研究發現，Foxp3在癌旁正常肺組織中陽性表達為17.5%(7/40)；在非小細胞肺癌組織中其性表達率是51.8%(83/160)，經統計分析其在非小細胞肺癌組織中的陽性表達明顯高于癌旁正常肺組織。Foxp3不僅在肺癌中過表達，其在胃癌、宮頸癌、淋巴瘤等多種惡性腫瘤組織及轉移灶中過表達[4-5]。

Foxp3在乳腺癌新輔助化療有效率評估發面，是獨立影響因素，因化療在降低Treg細胞水平同時抑制Foxp3 mRNA表達，達到腫瘤治療的目的。F.Liu等[6]發現在乳腺癌中對化療敏感性高的患者體內可測得陽性Foxp3，可見Foxp3在乳腺癌患者中的表達可預測化療敏感性，幫助乳腺癌患者制定有效治療方案。以上研究證明，Foxp3對乳腺癌的治療方案選擇有指導意義，但它是否對其他腫瘤的治療方案的選擇同樣有指導意義。有學者[7]通過對肺癌患者外周血Foxp3的測定，研究其在化療前后的變化，發現，化療后CD4+Foxp3+T細胞占CD4+T細胞比例較化療前顯著降低。本研究發現，Foxp3陽性組的5年無瘤生存率及總生存率均較陰性組顯著降低，并且其陽性表達與原發腫瘤大小、淋巴結轉移情況及無瘤生存時間均具有相關性，與淋巴結轉移成正相關，表明Foxp3陽性率越高，淋巴結轉移越多，發生遠端轉移的幾率越大。

[1] Kryczek I, Liu R, Wang G, et al. Foxp3 defines regulatory T cells in human tumor and autoimmune disease [J]. Cancer Res, 2009, 69 (9):3995-4000.

[2] 陸威,李永翔,張尚鑫,等. 胃癌患者外周血及癌組織中CD4+CD25+調節性T細胞轉錄因子Foxp3的表達及臨床意義 [J] 安徽醫科大學學報,2013,48(7):790-793.

[3] Mahmoud SM, Paish EC, Powe DG, et al. An evaluation of the clinical significance of Foxp3+infiltrating cells in human breast cancer [J]. Breast Cancer Res Treat, 2012, 127(1):99-108.

[4] Li C, Yang W, Gai X, et al. Foxp3 overexpression decreases sensitivity to chemotherapy in mouse Lewis lung cancer cells [J]. Mol Med Rep, 2012, 6(5):977-982.

[5] 馬寧耶,張瑤,張淑蘭. FOXP3在宮頸癌組織中的表達及意義[J].現代腫瘤醫學,2014,22(5):1146-1149.

[6] Liu F, Li Y, Ren M, et al. Peritumoral FOXP3+regulatory T cell is sensitive to chemotherapy while intratumoral FOXP3+regulatory T cell is prognostic predictor of breast cancer patients[J]. Breast Cancer Res Treat, 2012, 135(2):459-467.

[7] 孫來林,馬金棟,王煥信,等. 肺癌患者外周血Foxp3檢測及臨床意義 [J]. 中華實用醫刊,2013,40(23):28-29.

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