仙靈骨葆對大鼠正畸保持階段成骨細胞和破骨細胞的影響

陸廷茂 張軍梅

(1.貴州省人民醫院口腔科，貴州 貴陽 550002；2.貴州醫科大學附屬口腔醫院，貴州 貴陽 550004)

·實驗研究·

仙靈骨葆對大鼠正畸保持階段成骨細胞和破骨細胞的影響

陸廷茂1張軍梅2△

(1.貴州省人民醫院口腔科，貴州 貴陽 550002；2.貴州醫科大學附屬口腔醫院，貴州 貴陽 550004)

目的 觀察仙靈骨葆對成年大鼠正畸保持階段牙槽骨改建的影響。方法 20只3月齡雄性大鼠，隨機分為治療組和對照組各10只。將上頜前牙作為支抗牙近中牽引上頜第一磨牙，持續加力21 d后安裝保持裝置。治療組每只以3 mL劑量的仙靈骨葆灌胃4周至處死大鼠取上頜弓標本，對照組僅給予同等劑量雙蒸餾水。HE染色病理切片，分別觀察計數成骨細胞、破骨細胞。結果 保持結束時，仙靈骨葆組壓力側、張力側成骨細胞數量均高于對照組壓力側、張力側成骨細胞數量，P<0.05；壓力側、張力側破骨細胞數量均低于對照組壓力側、張力側破骨細胞數量，P<0.05；HE染色示，仙靈骨葆組壓力側及張力側見大量成骨細胞和少量破骨細胞，對照組壓力側及張力側見少量成骨細胞和大量破骨細胞。結論 仙靈骨葆可以抑制成年大鼠牙移動保持階段破骨細胞生成，促進成骨細胞的生成，提示仙靈骨葆可能對成年大鼠正畸保持階段新骨形成、使過渡性牙槽骨向正常牙槽骨轉化具有促進作用。

正畸； 仙靈骨葆； 成骨細胞； 破骨細胞； 大鼠

穩定是正畸治療的一個重要目標，復發是正畸中棘手的問題。正畸保持階段牙周組織形成新的結構及達到功能平衡，是一個慢長的過程。而牙槽骨改建未完成是正畸復發的主要原因。若在正畸治療的保持期應用藥物促進牙周組織修復與骨改進，將會有利于矯治后的牙齒的穩定，降低復發的可能。國內外對于這類的報道并不多見，中藥在正畸保持階段的研究尚未見報道。仙林骨葆是由黔嶺淫羊藿、丹參、補骨酯、地黃等組成的一種純中藥制劑，具有溫腎壯陽，接骨續筋，強身健骨之功效，臨床上常被用于治療骨質疏松癥(osteoporosis,OP)，治療效果得到學術界的廣泛認可。本課題通過建立成年大鼠牙移動保持期模型，對保持期大鼠灌服仙靈骨葆懸液，觀察其對成年大鼠正畸保持階段成骨、破骨細胞表達的影響，探索仙靈骨葆對成年大鼠保持期牙周組織改建的影響作用。

1 材料與方法

1.1 動物來源、儀器與試劑 Wistar大鼠(第四軍醫大實驗動物中心提供)、正畸用鎳鈦螺旋拉簧(北京圣瑪特科技有限公司)、0.25mm結扎絲(杭州奧索醫療器械有限公司)、正畸測力計(長沙天美醫療器械有限公司)、廣陸電子數顯卡尺(桂林廣陸數字測控股份有限公司)、MOF-392F型超低溫冰箱(日本SANYO)、LONYPAS HB51型光學顯微鏡(日本索尼)、仙靈骨葆膠囊 (貴州同濟堂制藥有限公司)。

1.2 動物分組及正畸牙移動模型的建立與維持[1]選擇3月齡雄性Wistar大鼠20只，體質量200～220 g。將右側上頜第一磨牙為實驗牙，鎳鈦拉簧放置在上頜切牙和同側的第一磨牙之間，初始力值為40 g。用慢速手機在大鼠上頜雙側切牙頸緣處磨出一條深約0.5 mm的固位溝。0.02 mm正畸不銹鋼結扎絲將螺旋拉簧結扎在上頜第一磨牙和上頜切牙之間。用測力計使螺旋拉簧產生40 g的拉力，灌藥組和對照組在加力21 d后，去除鎳鈦螺旋拉簧加力裝置。建立保持期模型：用0.02 mm不銹鋼結扎絲于上頜第一磨牙和切牙之間用鋼絲被動結扎，光固化樹脂固定切牙處結扎點，不施加任何正畸力，僅維持第一磨牙的位置。將大鼠隨機分為對照組、仙靈骨葆組，仙靈骨葆組以灌胃針灌胃250 mg/(kg·d)[2]4周，對照組給予等量雙蒸餾水灌胃4周。

1.3 HE染色及組織學觀察 在保持期第28天頸椎脫臼處死大鼠，取上頜右側第一磨牙及其牙槽骨制作HE切片，采用Biomias 2001圖像分析系統分析，對破骨細胞、成骨細胞數量計數。

1.4 統計學處理 采用SPSS18.0統計軟件對所得數據進行統計處理。平均數±標準差采用t檢驗，檢驗水準P<0.05示差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 成骨細胞、破骨細胞數比較 仙靈骨葆組壓力側、張力側成骨細胞數量均明顯高于對照組壓力側、張力側成骨細胞數量，差異有統計學意義(P<0.05)；仙靈骨葆組壓力側、張力側破骨細胞數量均顯著低于對照組壓力側、張力側破骨細胞數量，差異有統計學意義(P<0.05)。見表1。

表1 對照組與仙靈骨葆組成骨細胞、破骨細胞數比較

注：與對照組相比，★P<0.05。

2.2 HE染色結果 HE染色示，仙靈骨葆組壓力側及張力側見大量成骨細胞和少量破骨細胞，對照組壓力側及張力側見少量成骨細胞和大量破骨細胞。見圖1～4。

3 討 論

仙靈骨葆是由淫羊藿、丹參、補骨脂等組成的一種純中藥制劑。研究證實仙靈骨葆不僅促進成骨細胞增殖分化，促進新骨生成；還可以明顯抑制破骨細胞的分化及骨吸收，減少炎性因子的分泌[3]，減輕由破骨細胞導致的骨量下降和骨組織形態結構的改變[4]；同時，仙靈骨葆具有提高成骨細胞分泌堿性磷酸酶(ALP)的活性，促進成骨細胞成熟和鈣化的作用，能很好地恢復骨小梁的形態結構并提升骨密度和生物力學的性能，對OP的治療效果得到學術界的廣泛認可[5]。臨床研究[6]發現仙靈骨葆膠囊具有促進骨折患者骨痂生長的功效，仙靈骨葆治療組患者骨折愈合時間明顯短于對照組，且隨著時間的延長，治療組患者骨痂生長情況明顯優于對照組，亦有研究[7]結果顯示，仙靈骨葆可以縮短骨質疏松大鼠骨折愈合時間。牙移動的生物學原理是基于矯治力打破骨轉化平衡，一定程度上認為是骨組織損傷與改建過程，與骨損、骨折修復的重建機理變化是相同的。有研究證實患者服用仙靈骨葆膠囊可使整體骨量、骨礦物質含量增加，成骨細胞和破骨細胞的功能得以恢復且調節正常，骨生成能力提高；并能使骨鈣和骨有機質的構成比向正常水平接近，從而更好地調節機體的代謝紊亂，刺激骨痂形成．最終使整體骨量和骨的質量得到恢復，促進骨折愈合[8]。仙靈骨葆的主要成分淫羊藿在口腔領域的研究顯示，給予實驗大鼠淫羊藿注射液，可明顯預防拔牙后的剩余牙槽嵴吸收。體外實驗研究淫羊藿能有效抑制破骨細胞在下頜骨片上形成的吸收陷窩的數量和面積，可以抑制頜骨骨吸收[9]。

本實驗發現，成年大鼠正畸保持階段灌服仙靈骨葆組相比較對照組成骨細胞數量明顯增多，破骨細胞顯著減少。而骨代謝的平衡是靠這兩類細胞功能間的動態平衡維持[10]，當成骨細胞數量和活性增加時，牙槽骨的改建為骨的生成為主，而破骨細胞的減少表明骨吸收可能減少。本實驗提示仙靈骨葆有可能促進牙移動后保持階段新骨形成，減少牙槽骨骨量丟失，有可能縮短過渡性新骨恢復到正常骨結構的時間。這對臨床上縮短佩戴保持器的時間，維持臨床上成人正畸牙移動到新位置的長期穩定，具有重要的理論意義。

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