寒痹方離子導(dǎo)入液的皮膚刺激性及抗炎鎮(zhèn)痛實驗研究

鄭燕芳，南麗紅，黃枚，賈銣，謝晴晴，陳喆鳴，林羽

（1.福建中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，福建福州350122；2.福建中醫(yī)藥大學(xué)，福建福州350122）

寒痹方離子導(dǎo)入液的皮膚刺激性及抗炎鎮(zhèn)痛實驗研究

鄭燕芳1，南麗紅1，黃枚1，賈銣1，謝晴晴1，陳喆鳴1，林羽2

（1.福建中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，福建福州350122；2.福建中醫(yī)藥大學(xué)，福建福州350122）

目的觀察寒痹方離子導(dǎo)入液的皮膚刺激性和抗炎鎮(zhèn)痛作用。方法采用家兔同體左右側(cè)自身比較法研究皮膚刺激性；采用二甲苯致小鼠耳腫脹實驗、熱板致小鼠疼痛和醋酸致小鼠疼痛實驗，比較寒痹方離子導(dǎo)入液經(jīng)皮外用和直流電離子導(dǎo)入后的抗炎鎮(zhèn)痛作用。結(jié)果寒痹方離子導(dǎo)入液對家兔的正常皮膚無刺激性，僅1只家兔的破損皮膚處出現(xiàn)輕度紅斑，但在停藥24 h后恢復(fù)正常；離子導(dǎo)入組較空白對照組和未導(dǎo)入組的耳腫脹度明顯減輕、痛閾值明顯提高、扭體次數(shù)明顯減少（P＜0.05或0.01）；離子導(dǎo)入組的痛閾提高百分率（97.57%）和鎮(zhèn)痛百分率（56.02%）均高于未導(dǎo)入組（50.48%、33.77%）。結(jié)論寒痹方離子導(dǎo)入液對家兔皮膚無明顯刺激性，具有較好的抗炎鎮(zhèn)痛作用，其作用優(yōu)于未導(dǎo)入組。

寒痹方離子導(dǎo)入液；離子導(dǎo)入；皮膚；刺激性；抗炎；鎮(zhèn)痛

類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（rheumatoid arthritis，RA）是一種常見的關(guān)節(jié)慢性炎癥的自身免疫性疾病，由于病因和發(fā)病機制尚未明了，目前尚無特效的治療藥物，臨床主要以對癥治療為主。傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)對此有良好的療效［1-2］，中藥可通過多層次、多途徑、多靶點發(fā)揮作用，且毒副作用小，具有廣闊的應(yīng)用前景。

RA屬于中醫(yī)學(xué)“痹證”范疇。寒痹方依據(jù)“痹癥”的病因病機進行辨證論治而設(shè)立，由川烏、鹿角膠、肉桂、芍藥、姜炭、甘草6味中藥組成，具有溫陽散寒、緩急止痛之功效，主治寒痹證。

中藥離子導(dǎo)入療法是以中醫(yī)藥基礎(chǔ)理論為指導(dǎo)，通過直流電將中藥離子經(jīng)皮膚或黏膜引入病變部位從而發(fā)揮作用的治療方法。該方法既能發(fā)揮中藥多成分、多靶點、多效應(yīng)的優(yōu)勢，起到祛除病邪，恢復(fù)抗病能力的雙向調(diào)節(jié)作用，又有利于促進藥物經(jīng)皮吸收［3］。故本實驗將寒痹方制成離子導(dǎo)入液，觀察家兔皮膚接觸寒痹方離子導(dǎo)入液后有無皮膚刺激反應(yīng)，為臨床安全用藥提供依據(jù)；并通過急性炎癥模型和疼痛模型，比較寒痹方離子導(dǎo)入液經(jīng)皮外用和直流電導(dǎo)入后的抗炎鎮(zhèn)痛作用，為其臨床應(yīng)用提供實驗依據(jù)。

1 實驗材料

1.1 實驗動物清潔級ICR小鼠90只，雌雄各半，體質(zhì)量（20±2）g；新西蘭白色家兔4只，雌雄各半，體質(zhì)量（2.5±0.25）kg。福建醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心提供，許可證號：SCXK（閩）2012-0001。

1.2 藥物及試劑寒痹方離子導(dǎo)入液（北京康仁堂藥業(yè)有限公司，3.16 g生藥/mL，生產(chǎn)批號：20151104）；Na2S（西隴化工股份有限公司，生產(chǎn)批號：1403042）；二甲苯（國藥集團試劑有限公司，生產(chǎn)批號：20141020）；冰醋酸（國藥集團試劑有限公司，生產(chǎn)批號：20150204）。

1.3 儀器YLS-25A電動耳腫打耳器（濟南益延科技發(fā)展有限公司）；BT224S電子天平（賽多利斯稱重設(shè)備有限公司）；RB-200智能熱板儀（成都泰盟軟件有限公司）；離子導(dǎo)入儀（福州鑫諾醫(yī)療器械公司）。

2 實驗方法

2.1 家兔皮膚刺激性實驗取家兔4只，采用同體左右側(cè)自身比較法［4］。實驗前24 h將受試家兔背部兩側(cè)4塊給藥區(qū)用8%Na2S進行脫毛處理，脫毛面積大約為7 cm×7 cm。給藥前檢查去毛皮膚是否受損傷，有損傷的皮膚不宜進行試驗。左側(cè)為受試區(qū)，右側(cè)為對照區(qū)，左右兩側(cè)各有一塊皮膚作為正常皮膚，另外兩塊皮膚用手術(shù)刀片在其上劃“十”字形至滲血為度，作為破損皮膚。左側(cè)正常皮膚及破損皮膚脫毛區(qū)均涂以寒痹方離子導(dǎo)入液0.5 mL，右側(cè)均涂以生理鹽水0.5 mL，用一層保鮮膜覆蓋保濕，再加二層紗布覆蓋保護，以膠布適當(dāng)固定。持續(xù)6 h后，除去覆蓋物并用溫水清潔給藥部位，連續(xù)7 d。在每次去除藥物后1 h以及再次貼敷前觀察及記錄紅斑及水腫、涂敷部位是否有色素沉著、出血點、皮膚粗糙或皮膚菲薄等情況。末次貼敷后，在去除藥物后1、24、48、72 h肉眼觀察，按照評分標(biāo)準(zhǔn)記錄出現(xiàn)紅斑和水腫分值，并進行刺激強度評價［5］。計算每一觀察時間點各組原發(fā)性刺激積分均值及觀察期內(nèi)每天每只動物刺激積分均值即累積刺激指數(shù)，如有中度以上皮膚刺激須進行病理學(xué)檢查。

原發(fā)性刺激積分均值＝（受試物皮膚反應(yīng)積分－生理鹽水皮膚反應(yīng)積分）/動物數(shù)

2.2 二甲苯致小鼠耳腫脹實驗雄性小鼠30只，隨機分為空白對照組、未導(dǎo)入組和離子導(dǎo)入組，每組10只小鼠。空白對照組和未導(dǎo)入組于小鼠右耳正反兩面分別外涂生理鹽水、寒痹方離子導(dǎo)入液0.05 mL，2次/d，連續(xù)3 d。離子導(dǎo)入組將0.05 mL寒痹方離子導(dǎo)入液浸濕的紗布置于右耳，將離子導(dǎo)入儀的正極置于紗布上以膠布固定；背部事先脫毛，負極置于背部生理鹽水浸濕的紗布上以膠布固定；將離子導(dǎo)入儀電壓設(shè)置為2.5V，通電30 min，2次/ d，連續(xù)3 d。末次給藥后30 min，用生理鹽水擦凈右耳后，用干藥棉擦干，10 min后將0.05 mL二甲苯均勻涂抹于各組小鼠右耳兩側(cè)面，左耳不涂作為對照。30 min后將小鼠處死，沿耳廓基線剪下兩耳，用電動打耳器分別在左右耳廓部位取直徑為7 mm的耳片，稱其重量，以左右耳片質(zhì)量之差計算各組耳腫脹度。

2.3 熱板致小鼠疼痛實驗實驗前先在熱板儀上（55±0.5）℃挑選痛閾值大于5 s、小于30 s的雌性小鼠30只，隨機分為空白對照組、未導(dǎo)入組和離子導(dǎo)入組，每組10只小鼠。空白對照組和未導(dǎo)入組分別于小鼠后足外涂生理鹽水、寒痹方離子導(dǎo)入液0.1 mL，給藥后均以保鮮膜覆蓋，膠布固定30 min，2次/d，連續(xù)3 d。離子導(dǎo)入組將0.1 mL寒痹方離子導(dǎo)入液浸濕的紗布置于小鼠后足，將離子導(dǎo)入儀的正極置于紗布上以膠布固定；背部事先脫毛，負極置于背部生理鹽水浸濕的紗布上以膠布固定。將離子導(dǎo)入儀電壓設(shè)置為2.5 V，通電30 min，2次/d，連續(xù)3 d。末次給藥后30 min，以生理鹽水洗凈藥物，再用干藥棉擦干后足，將小鼠分別放入熱板儀，記錄小鼠第一次舔后足的時間（痛閾值）。小鼠在熱板上停留60 s后仍無疼痛反應(yīng)，按60 s計算，并計算痛閾提高率。痛閾提高率/%＝［（給藥組痛閾值－空白對照組痛閾值）/空白對照組痛閾值］× 100%。

2.4 醋酸致小鼠疼痛實驗小鼠30只，雌雄各半，隨機分為空白對照組、未導(dǎo)入組和離子導(dǎo)入組，每組10只小鼠。給藥前每組小鼠腹部均以8%Na2S進行脫毛處理，24 h后開始給藥。空白對照組和未導(dǎo)入組分別于小鼠腹部外涂生理鹽水、寒痹方離子導(dǎo)入液0.1 mL，給藥后均以保鮮膜覆蓋，膠布固定30 min，2次/d，連續(xù)3 d。離子導(dǎo)入組將0.1 mL寒痹方離子導(dǎo)入液浸濕的紗布置于小鼠腹部，將離子導(dǎo)入儀的正極置于紗布上以膠布固定，背部事先脫毛，負極置于背部生理鹽水浸濕的紗布上以膠布固定。將離子導(dǎo)入儀電壓設(shè)置為2.5V，通電30 min，2次/d，連續(xù)3 d。末次給藥后30 min，各組小鼠均腹腔注射0.6%冰醋酸0.2 mL，記錄第一次出現(xiàn)扭體反應(yīng)的時間（潛伏期）及15 min內(nèi)小鼠的扭體次數(shù)，并計算藥物鎮(zhèn)痛率。藥物鎮(zhèn)痛百分率/%＝［（空白對照組扭體次數(shù)－給藥組扭體次數(shù)）/空白對照組扭體次數(shù)］×100%。

2.5 統(tǒng)計學(xué)處理用SPSS 15.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計分析。計量資料屬正態(tài)分布用x±s表示，采用單因素方差分析，計數(shù)資料采用χ2檢驗。

3 實驗結(jié)果

3.1 離子導(dǎo)入組皮膚刺激性實驗見表1。

表1 離子導(dǎo)入組對家兔皮膚累積刺激指數(shù)分

3.2 各組小鼠耳腫脹度比較見表2。

表2 各組小鼠耳腫脹度比較

表2 各組小鼠耳腫脹度比較

注：與空白對照組比較，1）P＜0.05；與未導(dǎo)入組比較，2）P＜0.05。

組別空白對照組未導(dǎo)入組離子導(dǎo)入組耳腫脹度/mg 13.47±5.74 11.40±4.21 7.62±3.481）2）n 10 10 10

表1 各組小鼠痛閾值比較

表1 各組小鼠痛閾值比較

注：與空白對照組比較，1）P＜0.05，2）P＜0.01；與未導(dǎo)入組比較，3）P＜0.05。

組別空白對照組未導(dǎo)入組離子導(dǎo)入組痛閾值/s 20.6±4.76 31.0±10.821）40.7±9.452）3）n 10 10 10痛閾提高率/%—50.48 97.57

3.3 各組小鼠痛閾值比較見表3。

3.4 各組小鼠潛伏期和鎮(zhèn)痛率比較見表4。

表4 各組小鼠潛伏期和鎮(zhèn)痛率比較

表4 各組小鼠潛伏期和鎮(zhèn)痛率比較

注：與空白對照組比較，1）P＜0.05，2）P＜0.01；與未導(dǎo)入組比較，3）P＜0.05。

組別空白對照組未導(dǎo)入組離子導(dǎo)入組潛伏期/s 176.2±46.92 224.6±58.65 239.9±52.811）n 10 10 10扭體次數(shù)/次38.2±7.35 25.3±7.132）16.8±5.962）3）鎮(zhèn)痛率/%—33.77 56.02

4 討論

4.1 傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)對痹證的最早認識始于《內(nèi)經(jīng)》，《素問痹論》曰“風(fēng)寒濕三氣雜至，合而為痹也。”認為如該病久病不愈、正虛邪戀或反復(fù)感受外邪，則可內(nèi)傳臟腑產(chǎn)生五臟六腑痹，這是對痹證本虛標(biāo)實、虛實夾雜特點的最早認識。此后歷代醫(yī)家，又補充了熱、痰、瘀、暑等病理因素，同時認識到了內(nèi)傷虛損（陰陽氣血不足和肝腎脾之虧虛）、體質(zhì)因素在疾病形成過程中的作用。當(dāng)代對痹證的病機特點逐漸形成共識：痹證總以本虛標(biāo)實，虛實夾雜，風(fēng)寒濕夾雜、痰瘀互結(jié)為主，治療以扶正祛邪，溫陽散寒，兼顧痰瘀為原則。

故本方選用烏頭為君，烏頭為散寒止痛要藥。肉桂擅長溫腎助陽，通利血脈，化氣行水，血得此而溫和流暢，津得此而氣化蒸騰，不致血郁津凝；姜炭溫運脾陽，可溫煦肌肉；鹿角膠補血益精，溫腎助陽，并具上升特性；三藥合用為臣，加強烏頭散寒止痛之效，使血脈、肌肉均有溫藥助運，溫化宣通，最終陽氣布達，陰血環(huán)流，水津無阻，則痹證自愈也。芍藥甘草為佐。全方以扶正祛邪，溫陽散寒，兼顧痰瘀為原則，溫而不燥，補而不滯，相輔相成，相得益彰。

4.2 雖然透皮給藥具有很多優(yōu)點，但由于皮膚（特別是角質(zhì)層厚達10～15 mm）對藥物透皮吸收起屏障作用，大多數(shù)藥物，即便是劑量低、療效高的一些藥物，透皮滲透速度也難以滿足治療的需要，成為開發(fā)透皮給藥制劑的重大障礙。近年來，離子導(dǎo)入技術(shù)促進藥物經(jīng)皮吸收越來越受到關(guān)注，該技術(shù)有效地擴大了經(jīng)皮給藥化合物的范圍，特別是蛋白質(zhì)類和肽類藥物。根據(jù)直流電電場內(nèi)同性電荷相斥、異性電荷相吸的原理，在電場作用下，帶電荷的藥物微粒就向異性化電性方向移動。經(jīng)皮離子導(dǎo)入就是利用本原理使藥物離子或帶電膠體微粒進入人體。當(dāng)直流電作用于機體時，組織中正負離子在電場的作用下產(chǎn)生定向移動，組織興奮性、細胞膜結(jié)構(gòu)與通透性發(fā)生改變［6］。中藥離子導(dǎo)入療法在1958年首創(chuàng)于我國，是中醫(yī)辨證施治與局部對癥處理的有機結(jié)合，可以發(fā)揮中藥、直流電及穴位刺激的多重作用，廣泛應(yīng)用于臨床各科，適用于局部和全身性治療［7］。其主要特點為［8-9］：①直流電離子導(dǎo)入的藥物在體內(nèi)停留時間比其他給藥方法停留時間較長，藥物導(dǎo)入法所形成的藥物儲存庫，能逐漸消散而進入血液和淋巴液，產(chǎn)生全身性作用。②可以將藥物直接導(dǎo)入需要治療的部位，使局部藥物濃度保持較高水平，特別對表層的病灶，對于較深層的組織也可用體內(nèi)導(dǎo)入法。③能避免口服、注射等給藥途徑引起的藥物毒副反應(yīng)和肝臟的首過效應(yīng)。④直流電藥物導(dǎo)入時，直流電和藥物離子作用于內(nèi)、外感受器，然后通過反射途徑而產(chǎn)生局部和全身的治療作用。⑤離子導(dǎo)入對皮膚損傷小，不引起疼痛。4.3本實驗結(jié)果顯示：寒痹方離子導(dǎo)入液對家兔完整皮膚無刺激性，有1只家兔破損皮膚處出現(xiàn)輕度紅斑，停藥24 h后恢復(fù)正常，提示該藥無明顯皮膚刺激性，是一種安全性較好的外用藥，可供外用給藥。

4.4 本實驗結(jié)果也顯示：寒痹方離子導(dǎo)入液較未導(dǎo)入組的耳腫脹度明顯減輕，扭體次數(shù)明顯減少，痛閾值和鎮(zhèn)痛百分率均顯著提高，提示離子導(dǎo)入法可以增強寒痹方的抗炎鎮(zhèn)痛作用。

［1］林木南，李西海，林艷紅，等.溫?zé)崾杳懿ú煌ǘ螌嶒炐韵ス切躁P(guān)節(jié)炎軟骨病理變化的影響［J］.康復(fù)學(xué)報，2016，26（1）：38-42.

［2］林潔，付長龍，李俐，等.電針治療膝骨性關(guān)節(jié)炎療效的系統(tǒng)評價［J］.康復(fù)學(xué)報，2016，26（4）：52-58.

［3］李樹祝，李冉，白嵐.中藥離子導(dǎo)入技術(shù)應(yīng)用進展［J］.中國療養(yǎng)醫(yī)學(xué)，2012，21（11）：996-997.

［4］陳立江，張勝，孟凡瑞，等.骨質(zhì)寧凝膠的皮膚刺激性及皮膚致敏性實驗研究［J］.天津中醫(yī)藥，2008，25（4）：322-323.

［5］李儀奎.中藥藥理實驗方法學(xué)［M］.2版.上海：上海科學(xué)技術(shù)出版社，2006：1020-1021.

［6］林巧平，許向陽，劉春暉，等.離子導(dǎo)入經(jīng)皮給藥系統(tǒng)［J］.藥學(xué)進展，2006，30（6）：256-260.

［7］許景峰.藥物經(jīng)皮離子導(dǎo)入技術(shù)與皮膚電化學(xué)的研究概述［J］.中國藥業(yè)，2002，11（8）：23-24.

［8］林巧平，許向陽，劉春暉，等.離子導(dǎo)入經(jīng)皮給藥系統(tǒng)［J］.藥學(xué)進展，2006，30（6）：256-260.

［9］吳閔楓.直流電離子導(dǎo)入的治療技術(shù)和方法簡介［J］.醫(yī)療與點在技術(shù)，2014（5）：86.

R285.6

：A

：1000-338X（2016）06-0043-03

2016-09-08

福建省康復(fù)技術(shù)協(xié)同創(chuàng)新中心資助項目（X2014012）；校管重點學(xué)科專項資助項目（X2014127-學(xué)科）

鄭燕芳（1978—），女，講師，主要從事中藥藥理研究。

林羽（1966—），男，教授。E-mail：yulam@163.com