膝骨痹康袋泡熏洗劑的抗炎鎮痛藥效學研究

黃露露，張藝強，蔡唐彥，賴興泉，盛錄，張英杰，詹正烜，鄭乃熙，蘇友新（福建中醫藥大學，福建福州350122）

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膝骨痹康袋泡熏洗劑的抗炎鎮痛藥效學研究

黃露露，張藝強，蔡唐彥，賴興泉，盛錄，張英杰，詹正烜，鄭乃熙，蘇友新（福建中醫藥大學，福建福州350122）

目的探討膝骨痹康袋泡熏洗劑的抗炎和鎮痛效果，為該制劑在治療膝骨關節炎的臨床應用提供藥效學實驗依據。方法采用二甲苯致小鼠耳廓腫脹實驗和小鼠腹腔毛細血管通透性實驗，觀察膝骨痹康袋泡熏洗劑對急性炎癥的影響；通過大鼠棉球肉芽腫實驗，探討其對慢性炎癥的抑制效果；通過冰醋酸致小鼠扭體實驗和小鼠熱板法實驗，探討其鎮痛效果。結果膝骨痹康袋泡熏洗劑可抑制小鼠耳廓腫脹度、毛細血管通透性及大鼠棉球肉芽組織生長，可明顯減少小鼠扭體次數，提高小鼠的痛閾值。結論膝骨痹康袋泡熏洗劑有顯著的抗炎和鎮痛效果。

膝骨痹康袋泡熏洗劑；抗炎；鎮痛；藥效學

膝骨關節炎（knee osteoarthritis，KOA）是中老年人常見病，中醫學認為其屬“膝骨痹”范疇。傳統醫學對此有良好的療效［1-2］，中藥熏洗療法具有藥物與溫熱理療的雙重作用，其療效在KOA臨床治療中得到肯定［3-4］。“骨關節炎洗方”為導師蘇友新教授外用熏洗治療KOA的經驗方，由骨碎補、制川烏、紅花等中藥組成，具有祛風濕、止痹痛、通經絡、強筋骨之功效，適用于肝腎氣血虛損、風寒濕瘀痹阻為基本病機的KOA患者，對緩解關節疼痛、腫脹，關節功能障礙等療效確切［5］。鑒于原方在臨床應用過程中存在煎煮費時、繁瑣等不便因素，課題組前期已進行“骨關節炎洗方”的劑型改良并制成袋泡劑，命名為“膝骨痹康袋泡熏洗劑”［5］。本研究針對膝骨痹康袋泡熏洗劑抗炎鎮痛效應進行相關實驗，旨在為其臨床推廣應用提供藥效學實驗依據。

1 材料與方法

1.1 實驗動物1月齡昆明種小鼠，雄性120只，雌性40只，體質量18～22 g；3月齡Wistar大鼠，雄性40只，體質量200～220 g。所有實驗動物均為SPF級，由上海斯萊克實驗動物有限責任公司提供，實驗動物許可證號：SCXK（滬）2012-0002。

1.2 實驗藥品與試劑雙氯芬酸二乙胺乳膠劑（扶他林，北京諾華制藥有限公司，批號：X4290）；骨關節炎洗方藥液：按照臨床用法煎煮而得，將每劑骨關節炎洗方173 g原藥材用布包好，先加水3 000 mL，浸泡30 min，煎煮30 min，最后濃縮得藥液2 000 mL，制成每毫升含86.5 mg生藥材的水煎液；膝骨痹康袋泡熏洗劑：由福建中醫藥大學中藥制劑研究室制備，每劑173 g原藥材制得74.5 g袋泡劑顆粒，使用時用2 000 mL的90℃左右熱水沖泡，攪拌5 min，制成每毫升含37.3 mg顆粒劑的袋泡劑藥液（其生藥材濃度同洗方藥液）；冰醋酸（國藥集團化學試劑有限公司，批號：20140422）；伊文思藍（國藥集團化學試劑有限公司，批號：W20141201）；二甲苯（國藥集團化學試劑有限公司，批號：201504 09）；水合氯醛（國藥集團化學試劑有限公司，批號：20140509）；注射用青霉素鈉（80萬U/支，上海新先鋒藥業有限公司，批號：140902）。

1.3 實驗儀器智能熱板儀（成都泰盟軟件有限公司，型號：RB-200），萬分之一電子分析天平（上海精天電子儀器有限公司，型號：FA604A）；足趾容積測量儀（安徽正華生物儀器設備有限公司，型號：ZH-YLS-7B）；雙光束紫外可見分光光度計（北京普析通用儀器有限責任公司，型號：TU-1901）；高速低溫離心機（美國BECKMAN公司，型號：64R）；直徑8 mm打孔器（福建中醫藥大學實驗動物中心自制）。

1.4 實驗方法

1.4.1 二甲苯致小鼠耳廓腫脹實驗取昆明種雄性小鼠40只，采用隨機數字表法分為空白對照組（簡稱空白組）、骨關節炎洗方組（簡稱洗方組）、膝骨痹康袋泡熏洗劑組（簡稱袋泡劑組）、扶他林乳膠劑組（簡稱扶他林組），每組10只。空白組予（39± 1）℃的溫水濕敷右耳廓30 min；洗方組予（39±1）℃中藥水煎液濕敷右耳廓30 min；袋泡劑組予（39± 1）℃的袋泡熏洗劑濕敷右耳廓30 min；扶他林組用棉簽取扶他林乳膠劑涂擦右耳廓，每次0.05 g/20 g。以上各組均分別于每日9時與15時各干預1次，連續3 d。于末次干預30 min后，用二甲苯0.05 mL涂抹小鼠右耳廓致炎，左耳廓不涂做對照。致炎后30 min，將小鼠脫頸處死，沿耳廓基線剪下兩耳，用直徑為8 mm的打孔器在兩耳廓相同部位打下圓形耳片，隨即稱重，計算兩耳片差值作為腫脹度，以此衡量藥物的抗炎效應。

腫脹度/mg＝致炎后小鼠右耳平均重量－小鼠左耳平均重量。

1.4.2 小鼠毛細血管通透性實驗取昆明種雄性小鼠40只，分組及干預方法同1.4.1，給藥部位為小鼠腹部皮膚。各組小鼠末次干預后1 h，以0.1 mL/10 g的劑量尾靜脈注射1%伊文思藍生理鹽水溶液后，立即腹腔注射0.6%醋酸溶液0.2 mL/只；30 min后脫頸處死小鼠，剪開腹腔，用5 mL生理鹽水沖洗腹腔3次，收集洗滌液；3 000 r/min離心15 min，在紫外分光光度計590 nm處測定吸收度（OD值），比較各組平均OD值以評估藥物對小鼠毛細血管通透性增高的影響。

1.4.3 大鼠棉球肉芽腫實驗取Wistar雄性大鼠40只，隨機分成模型組、洗方組、袋泡劑組、扶他林組，每組10只。各組大鼠在無菌環境下用10%水合氯醛麻醉，背部右側肩胛區靠腋下備皮后用碘酒消毒，75%酒精脫碘后，切開1 cm長的小口，用眼科鑷子將已稱重為20 mg的高壓滅菌棉球，從小切口植入皮下，隨即縫合皮膚后，覆蓋以一次性創可貼。并從手術當日開始，每只大鼠每日腹腔注射8萬單位青霉素，連續3 d。各組于術后第2天開始干預，模型組予以（39±1）℃的溫水濕敷30 min；洗方組予（39±1）℃的中藥水煎液濕敷30 min；袋泡劑組予（39±1）℃的袋泡熏洗劑濕敷30 min；扶他林組用扶他林乳膠劑涂擦，每次0.05 g/20 g。以上各組給藥部位均為離手術切口周圍1 cm的范圍（避開手術切口），于每日9時與15時各干預1次，從手術第2天開始連續給藥12 d。第13 d脫頸處死各組大鼠，打開原切口，將棉球連同周圍結締組織一起取出，剔除脂肪組織，放入60℃烘箱中烘干12 h稱重。將稱得的重量減去棉球原重量即得肉芽腫的重量，比較各組平均肉芽腫重量并計算抑制率以分析各組藥物對肉芽腫的抑制作用。

肉芽腫抑制率/%＝［（模型組平均肉芽組織重量－給藥組平均肉芽組織重量）/模型組平均肉芽組織重量］×100%。

1.4.4 小鼠熱板法實驗取昆明種雌性小鼠40只，分組及干預方法同1.4.1，干預部位為小鼠雙后足。先將智能熱板儀接通電源，溫度至（55±0.5）℃后，將小鼠依次放入儀器內，小鼠從放在熱板上至出現舔后足所需時間（s）作為該鼠藥前痛閾值（痛覺反應時間），剔除舔后足時間＜5 s或＞30 s或跳躍的小鼠，以確保各組小鼠藥前痛閾值具有可比性。各組小鼠分別在末次干預后0.5、1、2 h測量藥后痛閾值，痛閾值超過60 s者按60 s計算，再統計藥后以上3個時間點各組痛閾提高率的平均值（藥后痛閾值－藥前痛閾值）。

1.4.5 冰醋酸致小鼠扭體實驗取昆明種雄性小鼠40只，分組、干預方法及給藥部位同1.4.2。各組小鼠末次干預30 min后腹腔注射0.6%冰醋酸溶液0.2 mL/只。觀察并計算各組小鼠注射冰醋酸溶液后20 min內出現的平均扭體次數，再計算各組的鎮痛率以評價各組藥物對化學致痛的抑制效應。鎮痛率/%＝［（空白組平均扭體次數－給藥組平均扭體次數）/空白組平均扭體次數］×100%。

1.5 統計學處理使用SPSS 18.0統計軟件進行數據分析。計量資料屬正態分布均以x±s表示，采用t檢驗或非參數檢驗法。

2 實驗結果

2.1 抗炎實驗結果

2.1.1 各組耳廓腫脹度比較見表1。

表1 各組耳廓腫脹度比較

表1 各組耳廓腫脹度比較

注：與空白組比較，1）P＜0.01，2）P＜0.05。

組別空白組扶他林組洗方組袋泡劑組n 10 10 10 10左耳片13.9±1.55 13.2±2.08 12.5±0.99 12.6±11.63右耳片25.97±3.67 19.53±3.63 17.87±3.23 21.05±3.48腫脹度12.03±3.03 6.29±4.511）5.35±3.271）8.36±3.812）

2.1.2 各組吸收度比較見表2。

表2 各組吸收度比較

表2 各組吸收度比較

注：與空白組比較，1）P＜0.01，2）P＜0.05。

組別空白組扶他林組洗方組袋泡劑組n 10 10 10 10吸收度0.745±0.160 0.509±0.1151）0.501±0.1751）0.420±0.1052）

2.1.3各組肉芽腫抑制率比較見表3。

表3 各組肉芽腫抑制率比較

表3 各組肉芽腫抑制率比較

注：與模型組比較，1）P＜0.01；與扶他林組比較，2）P＜0.05；與洗方組比較，3）P＜0.05。

組別模型組扶他林組洗方組袋泡劑組n 10 10 10 10肉芽腫干重量/mg 55.95±7.504 32.71±4.621）36.47±6.661）22.06±1.901）2）3）抑制率/%—41.54 34.82 60.57

2.2 鎮痛實驗結果

2.2.1 各組干預前后痛閾值比較見表4。

2.2.2 各組鎮痛率比較見表5。

3 討論

本研究抗炎藥效實驗結果表明：膝骨痹康袋泡熏洗劑在抑制二甲苯所致小鼠耳廓腫脹、醋酸所致毛細血管通透性相關表現的急性炎癥反應方面，療效與扶他林和骨關節炎洗方相當；在抑制大鼠棉球肉芽組織生長相關表現的慢性炎癥反應方面，療效優于扶他林和骨關節炎洗方。鎮痛藥效實驗結果表明：在提高小鼠痛閾值及小鼠鎮痛率方面，療效與扶他林相當，但優于骨關節炎洗方。因此，本研究證實膝骨痹康袋泡熏洗劑抗炎鎮痛療效確切，其劑型改良后效果沒有下降。

表4 各組干預前后痛閾值比較（

表4 各組干預前后痛閾值比較（

注：與空白組比較，1）P＜0.05。

干預后n組別空白組扶他林組洗方組袋泡劑組10 10 10 10干預前15.98±6.54 16.65±4.56 14.74±5.96 14.26±2.67 0.5 h 15.69±3.63 24.79±3.411）21.05±5.381）21.57±3.661）1 h 16.15±3.52 31.26±2.41）33.46±17.761）28.95±4.01）2 h 13.8±5.28 26.64±2.991）25.53±5.061）26.42±3.461）

表5 各組鎮痛率比較

表5 各組鎮痛率比較

注：與空白組比較，1）P＜0.05；與洗方組比較，2）P＜0.01。

組別空白組扶他林組洗方組袋泡劑組n 10 10 10 10扭體次數/（次·20 min-1）76.4±9.67 34.5±4.371）57.6±3.651）43.2±12.311）2）鎮痛率/%—54.97 24.87 43.46

分析膝骨痹康袋泡熏洗劑的療效可知，該制劑由骨碎補、續斷、伸筋草、川椒、制川烏、制草烏、威靈仙、紅花等14味中藥組方制成，多為辛溫散寒、祛風除濕之品，能針對由肝腎氣血虛損、風寒濕瘀痹阻引發的“膝骨痹”，發揮祛風濕、通經絡、強筋骨而止痹痛之功效。現代藥理學研究［6-11］表明：骨碎補［6］主要成分柚皮苷可抑制炎癥反應；伸筋草［7］中生物堿和三萜類、川椒［8］中辣椒堿等成分抗炎鎮痛療效確切；川烏和草烏［9］中均含有多種生物堿，鎮痛作用明顯，可用于多種痛癥的治療；威靈仙［10］可抑制COX-1、COX-2合成；紅花［11］能抑制IL-1、IL-6的升高等。諸藥合用，共同發揮抗炎鎮痛的功效。同時，膝骨痹康袋泡熏洗劑在制備過程中，將復方中一部分藥材進行提取，更有利于藥物的有效成分溶出，并在短時間內發揮作用，直達病所，更加快速而有效地達到抗炎、鎮痛的目的，故袋泡熏洗劑在鎮痛及抑制慢性炎癥方面療效優于臨床洗方。

總之，膝骨痹康袋泡熏洗劑較傳統臨床洗方具有體積小、使用攜帶更方便等優勢，極大地提高了患者的依從性；且劑型改良后更節約燃料及中藥材，降低了費用，保質期長，更有利于在KOA康復中的推廣使用。本研究通過一般藥效學實驗方法初步證實了經過劑型改良的膝骨痹康袋泡熏洗劑在鎮痛及抑制慢性炎癥方面療效優于骨關節炎臨床洗方，為其應用于臨床提供了實驗依據。在此基礎上今后課題組還將從特殊藥效學方面進一步探討袋泡熏洗劑治療KOA的療效及機制。

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R285.5

：A

：1000-338X（2016）06-0052-03

2016-09-20

福建省衛生廳中醫藥科研課題（WZSY201301）

黃露露（1990—），女，2015級碩士研究生，主要從事骨關節疾病防治與康復的基礎及臨床研究。

蘇友新（1969—），男，博士，教授，博士生導師。E-mail：suyouxin777@hotmail.com