實驗獼猴感染弓形蟲及衣原體血清學檢測

黃翠琴 ， 陳仁鋒 ， 王 琨 ， 溫福利 ， 王壽昆 ， 楊小燕

(1.龍巖學院生命科學學院 福建省家畜傳染病防治與生物技術重點實驗室 ， 福建 龍巖 364012 ； 2.福建農林大學動物科學學院 福建省動物藥物工程實驗室 ， 福建 福州 350002 ; 3.福建龍巖閩雄生物科技有限公司 ， 福建 龍巖 364000)

弓形蟲(Toxoplasmagondii)是感染包括鳥類、人類及海洋獸類在內的幾乎所有溫血動物的機會致病性原蟲。該病呈全球范圍流行，全世界約有1/3的人感染，嚴重危害人類健康。衣原體(Chlamydia)是一類專性胞內寄生的革蘭陰性菌，能夠引起動物包括腸炎、肺炎、關節炎、腦炎、結膜炎、不孕不育甚至流產等多種臨床病癥，人類感染也可導致失明及呼吸道和泌尿生殖道的多種病癥，鸚鵡熱衣原體感染也可導致人死亡。福建省計劃生育科學技術研究所擁有全省最大的獼猴養殖及實驗基地，定期對獼猴病原體的調查及凈化工作，將有利于獼猴物種的保存及今后科學實驗工作。弓形蟲病和衣原體病均缺乏明顯的臨床癥狀且危害極大，給患病動物的診斷帶來極大的挑戰，因此，弓形蟲及衣原體感染的調查顯得尤其重要。本試驗采用改良凝集試驗(MAT)和正向間接血凝試驗(IHA)，分別對福建省計劃生育科學技術研究所123只實驗獼猴血清進行弓形蟲抗體(IgG)和衣原體抗體(IgG)檢測，為綜合防治獼猴衣原體病及弓形蟲病提供依據。

1 材料與方法

1.1 檢測動物血樣 采集福建省計劃生育科學技術研究所實驗獼猴血液123份。無菌采集動物的靜脈血，分離血清后-20 ℃保存。

1.2 檢測試劑 弓形蟲改良凝集試驗(MAT)試劑盒(由中國農業科學院蘭州獸醫研究所朱興全教授惠贈)，衣原體(IHA)抗體檢測試劑盒，購自中國農業科學院蘭州獸醫研究所。

1.3 主要儀器 臺式離心機(上海安亭公司生產)，37 ℃恒溫培養箱、96孔U型有機玻璃反應板、96孔V型(110°)有機玻璃反應板、移液槍一套(德國Eppendorf公司)；漩渦混勻器、掌上離心機、超凈工作臺。

1.4 方法

1.4.1 弓形蟲改良凝集試驗(MAT) 分別設置陰性和陽性對照，陽性抗體滴度大于1∶200說明本試驗有效，被檢血清抗體效價達到或大于1∶20者判為陽性，無藍色沉淀為陽性，有藍色沉淀為陰性。

1.4.2 衣原體正向間接血凝試驗(IHA) 在96孔V型(110°)有機玻璃反應板上進行血清中的衣原體抗體的檢測。操作步驟和結果判定嚴格按照衣原體IHA抗體檢測試劑盒說明書進行。在陰、陽性及空白對照、對照各孔均成立的條件下，對待檢血清進行判定：待檢血清1∶4孔出現“+”以下者為陰性；1∶4孔“++”至1∶16孔“+”以下者為可疑；1∶16孔出現“++”以上者為陽性。

1.4.3 數據分析 弓形蟲抗體和衣原體抗體滴度分布采用Excel 2010分析。

2 結果

實驗獼猴弓形蟲與衣原體抗體陽性率分別為4.88%(6/123)和3.25%(4/123)。弓形蟲與衣原體抗體總陽性率差異不顯著(P>0.05)。

弓形蟲抗體滴度在1∶20～1∶40之間，衣原體抗體滴度均在1∶16。弓形蟲與衣原體抗體的平均滴度(幾何平均數)分別為23.47和17.00，方差值分別為5.16和1.00，弓形蟲與衣原體抗體滴度的方差值均小于平均值，其滴度分布為均勻分布。

3 討論

本試驗采用MAT方法調査了福建省計劃生育科學技術研究所獼猴弓形蟲抗體陽性率為4.88%，抗體滴度在1∶20～1∶40之間，該結果高于廣西和廣東非人靈長類實驗中心獼猴陽性率0%(0/120)和2.1%(5/240)[1]。野生動物弓形蟲陽性率不僅與動物種屬有關，主要還在于飼養管理，獼猴主要通過食入含有弓形蟲包囊的肉類而感染弓形蟲病[2]。

衣原體是一種可在人和多種動物間廣泛傳播的病原體，并引起人的健康危害及對多數瀕臨滅絕的野生動物造成巨大的威脅。正向間接血凝實驗(IHA)是常用的衣原體檢測方法之一。國內對野生動物感染衣原體的報道較少，本研究運用IHA方法對獼猴感染衣原體進行了血清學調查，結果發現，獼猴衣原體陽性率達3.25%，衣原體抗體滴度均在1∶16。

弓形蟲與衣原體抗體滴度的方差值均小于平均值，其滴度分布為均勻分布，說明實驗獼猴體內感染弓形蟲與衣原體相對穩定。定期對獼猴弓形蟲與衣原體的調查及凈化工作，將有利于獼猴物種的保存及今后科學實驗工作。總之，本次血清學調查結果表明，福建省計劃生育科學技術研究所實驗獼猴存在一定程度的弓形蟲和衣原體感染，需采取措施進行預防或治療；該結果也豐富了國內實驗獼猴弓形蟲病和衣原體病的流行病學數據。

[1] Li H, Yan C, Li J,etal. Seroprevalence ofToxoplasmagondiiin Bred Cynomolgus Monkeys (Macaca fascicularis) in China[J]. Journal of parasitology, 2010, 96(4): 807-808.

[2] Zarnke R L, Dubey J P, Kwok O C,etal. Serologic survey forToxoplasmagondiiin selected wildlife species from Alaska[J]. Journal of wildlife diseases, 2000, 36(2): 219-224.