桂枝湯預處理對急性心肌缺血兔血清TNF-α、IL-6含量的影響

范曉飛，劉貴京，王穎穎

桂枝湯預處理對急性心肌缺血兔血清TNF-α、IL-6含量的影響

范曉飛，劉貴京，王穎穎

目的 觀察桂枝湯預處理對急性心肌缺血兔血清腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、白細胞介素-6(IL-6)含量的影響，探討其對缺血心肌的保護作用。方法 將36只新西蘭大白兔隨機分為假手術組、模型組、藥物組。藥物組用桂枝湯灌胃2周，假手術組和模型組給予等量蒸餾水灌胃2周。采用結扎左冠狀動脈前降支法復制心肌缺血模型(藥物組和模型組)，假手術組只穿線不結扎。采用ELISA法檢測血清TNF-α和IL-6水平，彩色多普勒超聲心動圖檢測心臟射血分數(EF)。結果 與假手術組比較，模型組結扎后各時間點TNF-α、IL-6表達均升高(P<0.05)，分別于結扎2 h、4 h達到高峰；與模型組各時間點比較，桂枝湯組結扎后各時間點TNF-α和IL-6表達均下降，結扎后6 h心臟射血分數增高(P<0.05)。結論 心肌缺血后炎性介質TNF-α、IL-6水平明顯升高，桂枝湯復合方劑可能通過減少其釋放，改善缺血損傷，從而保護心肌。

心肌缺血；桂枝湯；腫瘤壞死因子-α；白細胞介素-6

急性心肌缺血是由于心肌供血不足和(或)心肌耗氧增加，引起心肌血氧供需失衡。近年來，大量研究[1-3]表明，缺血性心肌損傷是一種炎癥反應。心肌缺血后，受損的心肌組織啟動固有性免疫應答和適應性免疫應答，介導炎癥細胞活化、炎癥介質釋放，誘導缺血區炎癥反應發生[4-6]。因此，減少炎癥介質釋放可保護缺血心肌。

桂枝湯是由桂枝、白芍、炙甘草、生姜和大棗組成的中藥復方制劑。研究表明，桂枝湯可抑制氧化應激反應、降低血脂及血管內皮活性因子[7-9]，對高脂血癥、冠心病等有重要防治意義。本實驗擬通過結扎兔冠狀動脈前降支法建立心肌缺血模型，觀察桂枝湯預處理對急性心肌缺血兔血漿腫瘤壞死因子α(TNF-α)和白細胞介素-6(IL-6)的影響，為桂枝湯防治心肌缺血提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 藥物及試劑 桂枝湯由河北工程大學附屬醫院提供，桂枝、白芍、炙甘草、生姜、大棗按原方比例10∶10∶7∶10∶10院內煎藥室統一加工配置，濃度為2 g/mL。TNF-α、IL-6 ELISA試劑盒購置于北京鼎國昌盛生物技術有限公司。

1.2 動物及分組 健康清潔級新西蘭大白兔36只，體重0.9 kg～1.2 kg，雌雄各半，由河北醫科大學實驗動物研究中心提供。適應性飼養1周后，按隨機數字表法分為3組：假手術組、模型組、藥物組，每組12只。藥物組術前給予桂枝湯6 g/(kg·d)，換算成容積3 mL/(kg·d)灌胃2周；假手術組和模型組給予等量蒸餾水灌胃2周。

1.3 動物模型制備 采用結扎左冠狀動脈前降支方法復制兔急性心肌缺血模型。將兔以2%戊巴比妥鈉(50 mg/kg)耳緣靜脈注射麻醉，待其呼吸平穩，角膜反射消失和肌張力減弱后固定于手術臺上。RM6200型多導生理記錄儀(日本島津公司)同步監視標準Ⅱ導聯心電圖。判斷合適切口(胸骨左緣切口)并畫線。75%酒精消毒切口部分，于胸骨左側0.5 cm～1.0 cm處做與胸骨平行的縱形切口，各層肌肉分層打開，剪斷第3、4肋骨及肋間肌，盡量撐開，剪開心包，暴露心臟，用圓形無創縫合針于左心耳下前降支上1/3處穿3/0號線備用，假手術組只穿線不結扎，模型組和藥物組將結扎左冠狀動脈前降支，造成急性心肌缺血模型(以ST段明顯抬高作為冠狀動脈結扎成功標志)，造模成功后關閉胸腔，縫合刀口，預防感染。

注：a結扎前；b結扎后。

1.4 指標檢測方法 假手術組、模型組和藥物組(見圖1)分別在結扎前，結扎后0.5 h、1 h、2 h、4 h、6 h開腹進行腹主動脈采血，肝素抗凝。以3 000 r/min離心10 min后，取上清，-20 ℃保存待用。采用ELISA法測血清TNF-α和IL-6含量。

1.5 心功能測定 于結扎前和結扎后立即行無創心功能檢測，即彩色多普勒超聲心動圖。觀察心臟射血分數(EF)變化。

2 結 果

2.1 3組血清TNF-α水平比較 假手術組各時間點比較，差異無統計學意義(P>0.05)。與假手術組比較，模型組結扎后各時間點TNF-α表達均升高，差異有統計學意義(P<0.05)。模型組各時間點比較，TNF-α含量于結扎后0.5 h開始升高，結扎后2 h達到高峰，結扎后4 h開始下降。與模型組比較，藥物組結扎后各時間點TNF-α表達均下降，差異有統計學意義(P<0.05)。詳見表1。

表1 3組血清TNF-α水平比較 pg/mL

2.2 3組血清IL-6表達比較 假手術組各時間點比較，差異無統計學意義(P>0.05)。與假手術組比較，模型組結扎后各時間點IL-6表達均升高，差異有統計學意義(P<0.05)。模型組各時間點比較，IL-6含量于結扎后0.5 h開始升高，結扎后4 h達到高峰，結扎后6 h開始下降。與模型組比較，藥物組結扎后各時間點IL-6表達均下降，差異有統計學意義(P<0.05)。詳見表2。

表2 3組血清IL-6表達比較 pg/mL

2.3 3組結扎6 h后心臟射血分數比較 結扎前各組兔心臟射血分數比較，差異無統計學意義(P>0.05)。結扎6 h后，與假手術組比較，模型組心臟射血分數降低，差異有統計學意義(P<0.05)；與模型組比較，藥物組心臟射血分數升高，差異有統計學意義(P<0.05)。詳見表3。

表3 3組結扎6 h后心臟射血分數比較±s) %

3 討 論

研究表明，缺血性心肌損傷是一個多環節級聯反應過程，主要涉及氧化應激、鈣離子超載、免疫炎癥反應和心肌細胞凋亡等，炎癥反應是急性心肌缺血損傷和心肌細胞凋亡的主要原因[10]。本研究證實，急性心肌缺血后血清TNF-α、IL-6含量增加，而桂枝湯可減少血清TNF-α、IL-6含量，減少炎癥反應發生，從而保護心肌。

TNF-α是一種單核因子主要由活性巨噬細胞產生，是炎癥、免疫反應的重要介質。研究表明，TNF-α在動脈粥樣硬化發生、發展過程中起著重要作用。TNF-α可作用于血管壁引起血管壁損傷，促進血管內皮細胞和血管平滑肌細胞增生[11]。IL-6是一種具有多種生物活性的細胞炎癥介質，是炎癥急性期細胞因子基因表達的主要調節因子，主要由T淋巴細胞、單核細胞、內皮細胞等產生。大量炎性細胞浸潤至缺血或壞死的心肌組織，使其產生抗原并刺激免疫系統，引起強烈免疫應答，致使T淋巴細胞、B淋巴細胞、單核巨噬細胞等激活，從而產生大量IL-6[12]，IL-6可刺激血管活性物質釋放、促進血管內皮細胞和平滑肌細胞增殖、激活凝血酶原，促使血小板釋放聚集，進而引起級聯性炎癥反應發生。本實驗結果顯示，與假手術組比較，模型組結扎后各時間點TNF-α、IL-6含量顯著升高(P<0.05)，說明TNF-α、IL-6參與心肌缺血發生、發展過程。桂枝湯出自漢代張仲景的《傷寒論》，被譽為“群方之冠”，由桂枝、白芍、炙甘草、生姜和大棗組成，具有解肌發表，調和營衛的功能[13]。方中桂枝散寒解肌、溫通經脈、助陽化氣為君藥；白芍斂陰合營、利血、益氣為臣藥；生姜散寒以消痞滿助桂枝解肌祛邪；大棗助芍藥合營里，并為佐藥；炙甘草補氣以助陽氣、益氣和中調和諸藥為使。諸藥配伍具有活血化瘀、益氣通脈作用。近年來臨床研究表明，桂枝湯在防治冠心病方面發揮重要作用。焦宏等[14]研究表明，桂枝湯可降低低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)，升高高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)，減少動脈粥樣硬化形成，對冠心病的防治起到一定作用。牛鶴麗等[15]證實，聯合使用桂枝湯治療冠心病穩定型心絞痛比單純使用西藥療效顯著。本研究結果表明，急性心肌缺血時炎癥介質TNF-α、IL-6表達增加，心臟射血分數減少，而桂枝湯預處理可降低急性心肌缺血時血清TNF-α、IL-6含量，提高心臟射血分數，改善心臟功能。

綜上所述，桂枝湯可能通過減少炎癥介質TNF-α和IL-6釋放，降低炎癥反應發生，從而改善缺血心肌，起到保護心臟的作用，其詳細作用機制仍需進一步深入研究。

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(本文編輯薛妮)

The Influence of Guizhi Decoction Pretreatment on Serum TNF-α and IL-6 in Rabbit with Acute Myocardial Ischemia

Fan Xiaofei,Liu Guijing,Wang Yingying

Chengde Medical College,Chengde 067000,Hebei,China

Liu Guijing

Objective To investigate the protective effect of Guizhi decoction (GZD) pretreatment on serum tumor necrosis factor-α(TNF-α) and interleukin-6(IL-6) in rabbit with acute myocardial ischemia (AMI).Methods Tirty-six New Zealand white rabbits were randomLy divided into sham group， model group and drug group.Drug group was given GZD two weeks before ligation， the other two groups were given equal amount of distilled water.The rabbit model was established by ligaturing the left anterior descending coronary artery(drug group and model group)， control group only thread ligation.TNF-α and IL-6 expressions were detected by ELISA.Color Doppler Echocardiography was performed to measure ejection fraction(EF).Results Compared to sham group，The expression of TNF-α and IL-6 increased in the model group at different time points after myocardial ischemia(P<0.05)， reached their peak at the time point of ligation on 2th， 4th hour respectively.Compared to model group， the expression levels of TNF-α and IL-6 were decreased to varying degrees at each time point in drug group(P<0.05).Conclusion The serum levels of TNF-α and IL-6 increased after myocardial ischemia.The cardioprotective effect of GZD may be related to the decreasing of inflammation cytokines TNF-α and IL-6.

myocardial ischemia；Guizhi decoction；tumor necros factor-α；interleukin-6

河北省衛生廳省級重大醫學科研項目(No.zd2013094)

承德醫學院(河北承德 067000)

劉貴京，E-mail：13333006956@163.com

R542.2 R285.5

A

10.3969/j.issn.1672-1349.2016.23.011

1672-1349(2016)23-2754-04

2016-05-10)

引用信息：范曉飛，劉貴京，王穎穎.桂枝湯預處理對急性心肌缺血兔血清TNF-α、IL-6含量的影響[J].中西醫結合心腦血管病雜志，2016，14(23)：2754-2757.