Aurora kinases在宮頸癌發病機制中的探索

肖晉軍

Aurora kinases在宮頸癌發病機制中的探索

肖晉軍

目的 通過分析Aurora激酶A、B在正常宮頸組織，CIN及宮頸癌組織中的表達，探討Aurora激酶A、B在宮頸癌發生、發展中的作用。方法 （1）選取深圳市30例宮頸癌患者，我院CIN患者30例，宮頸健康者30例，并取組織標本作研究。（2）采用熒光定量法測定Aurora激酶A、B在不同宮頸組織的表達及與HPV16、、HPV18感染關系。（3）采用細胞儀分析30例宮頸癌患者組織標本中Aurora激酶A、B在表達與不表達時細胞的增殖率，凋亡率，并對患者采用化療藥物順鉑治療后觀察癌細胞的增殖率，凋亡率。結果 HPV16、HPV18及Aurora激酶在正常宮頸組織中的表達情況較低，HPV16、HPV18在宮頸癌中表達情況極高，表達率分別為96．67%、100．00%，CIN中表達其次，表達率分別為66．67%、70．00%，約占致癌型別的70%左右，差異具有統計學意義（P＜0．05）。Aurora激酶A在宮頸癌組織標本存在高表達，Aurora激酶B高表達與腫瘤的惡性侵襲相關，差異具有統計學意義（P＜0．05）。觀察組宮頸癌細胞中Aurora激酶A、Aurora激酶B表達情況低于對照組，差異均具有統計學意義（P＜0．05）。對宮頸癌患者采用Aurora激酶抑制劑VX-680或化療藥物順鉑治療后，癌細胞的增殖率顯著下降、凋亡率顯著升高，Aurora激酶未表達組癌細胞增殖率低于表達組、凋亡率高于表達組，差異具有統計學意義（P＜0．05）。結論 Aurora激酶在女性宮頸癌細胞中存在顯著高表達的現象,通過對宮頸癌患者采用Aurora激酶抑制劑VX-680或化療藥物順鉑治療后，宮頸癌細胞的增殖率顯著下降、凋亡率顯著升高。

Aurora激酶；HPV；宮頸癌

宮頸癌作為常見婦科惡性腫瘤疾病的一種，由宮頸病變進一步發展所致，分為宮頸上皮內瘤變和浸潤癌，嚴重危及患者的生命[1]。有研究表明[2]，高危型人乳頭瘤病毒（HPV）感染時誘發宮頸癌及宮頸癌前病變的主要原因。Aurora kinases（Aurora激酶）家族是一種絲/蘇氨酸蛋白激酶，有研究表明宮頸癌變患者的Aurora激酶存在明顯DNA擴增，RNA基因蛋白水平也顯著增高[3-4]。本研究為進一步探索分析Aurora kinases在宮頸癌中發病機制，選取宮頸癌標本、CIN組織及正常宮頸組織納入本次研究，分析后現報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

1.2 方法

采用熒光定量FQ-PCR法檢測HPV16、HPV18在不同宮頸組織（宮頸癌、CIN及正常宮頸）的表達，應用杭州Linegene熒光定量PCR檢測儀對組織標本進行HPVDNA定性檢測，HPV-16、HPV-18型檢測按照試劑盒（S20040032，深圳匹配生物技術開發有限公司）說明書進行操作，比較宮頸癌、CIN及正常宮頸之間表達的差異。另采用免疫組化檢測Aurora激酶A、Aurora激酶B在不同宮頸組織的表達，觀察分析Aurora激酶A、Aurora激酶B在不同宮頸組織的表達及與HPV16、HPV18感染的關系。

將選取的30例宮頸癌患者中分為觀察組、對照組，每組各15例，采用Aurora激酶抑制劑VX-680進行治療的設為觀察組，未采用Aurora激酶抑制劑VX-680進行治療的設為對照組，采用Western-blot檢測兩組中宮頸癌細胞中Aurora激酶A和Aurora激酶B表達的差異，通過流式細胞儀，采用流式細胞儀分析宮頸癌細胞中Aurora激酶A、B在表達與不表達時細胞的增殖率，凋亡率，采用宮頸癌Elisa試劑盒（Human nasopharyngeal carcinoma，NPC ELISA試劑盒）說明書進行操作。再將兩組宮頸癌標本用化療藥物順鉑處理后，通過流式細胞儀觀察Aurora激酶表達與不表達情況下宮頸癌細胞的增殖率，凋亡率，對比分析Aurora激酶受抑制后癌細胞對順鉑敏感性的不同。

1.3 評價指標

（1）比較宮頸癌、CIN及正常宮頸組織標本HPV16、HPV18的表達情況之間的差異，同時觀察分析Aurora激酶A、Aurora激酶B在不同宮頸組織的表達及與HPV16、HPV18感染的關系。

（2）觀察比較加入Aurora激酶抑制劑VX-680及未加入Aurora激酶抑制劑VX-680兩種情況下，宮頸癌細胞中Aurora激酶A和Aurora激酶B的表達情況。

（3）分析宮頸癌細胞中Aurora激酶A、B在表達與不表達時細胞的增殖率，凋亡率，對比分析Aurora激酶受抑制后癌細胞對順鉑敏感性的差異。

1.4 統計學方法

落實建筑行業項目管理機制，綜合考慮項目登記的建筑業工程，能夠準確掌握建筑項目的進度，并對項目本身的申報納稅狀況以及開具發票的情況進行有效監控。但是，增值稅管理模式是將納稅人作為主體，綜合考慮機構所在區域的納稅基本原則，而所在區域的國稅機關要負責構建相應的監控機制。但這種方式已經遠遠超出了現階段增值稅管理的范圍，直接增加了稅務機關的工作難度，很難對異地工程項目信息進行有效掌握，進而引發了虛開發票或增加了稅源流失風險，直接制約了建筑行業稅收征管工作的開展。

所收集數據采用SPSS 18.00進行數據處理。計數資料以率表示，采用χ2檢驗及Fisher精確概率法。檢驗水準α=0.05。

2 結果

2.1 宮頸癌、CIN及正常宮頸組織標本HPV16、HPV18的表達情況之間的差異

HPV16、HPV18及Aurora激酶在正常宮頸組織中的表達情況較低，HPV16、HPV18在宮頸癌中表達情況最高，CIN中表達其次，差異具有統計學意義（P＜0.05）。Aurora激酶A在宮頸癌組織標本存在高表達，Aurora激酶 B 高表達與腫瘤的惡性侵襲相關，差異具有統計學意義（P＜0.05）。見表1。

2.2 宮頸癌細胞中Aurora激酶的表達情況

觀察組宮頸癌細胞中Aurora激酶A表達率（40.00%）、Aurora激酶B表達率（33.33%）明顯低于對照組（86.67%、93.33%），差異具有統計學意義（χ2=5.167 5、9.186 6，P=0.023 0、0.002 4）。

2.3 宮頸癌細胞在Aurora激酶的表達與否情況下的增殖率、凋亡率

對宮頸癌患者采取Aurora激酶抑制劑VX-680或采用標本用化療藥物順鉑進行治療后，癌細胞的增殖率顯著下降、凋亡率顯著升高，Aurora激酶未表達組癌細胞增殖率低于表達組、凋亡率高于表達組，差異具有統計學意義（P＜0.05）。見表2。

3 討論

3.1 宮頸癌、CIN及正常宮頸組織標本HPV16、HPV18的表達情況之間的差異

我市女性人口比例很大，宮頸癌是女性生殖系統第二大惡性腫瘤，近年來其發病呈年輕化趨勢。每年有近50萬新發病例，宮頸癌的發生發展是一個復雜的過程，癌變發展的危險性隨著CIN的發展而升高[5]。有研究顯示[6]，宮頸癌變患者的Aurora激酶存在明顯DNA擴增，Aurora激酶與宮頸癌發病機制具有一定聯系。

研究結果顯示，HPV16、HPV18及Aurora激酶在正常宮頸組織中的表達情況較低，HPV16、HPV18在宮頸癌中表達情況最高，CIN中表達其次，差異具有統計學意義（P＜0.05）。Aurora激酶A在宮頸癌組織標本存在高表達，Aurora激酶B高表達與腫瘤的惡性侵襲相關，差異具有統計學意義（P＜0.05）。Aurora激酶A、Aurora激酶B作為Aurora激酶家的成員，在不同的模式生物中，結構和功能高度保守。近年來，隨著極光激酶相關研究的不斷深入，人們逐漸認識到極光激酶在細胞有絲分裂以及腫瘤形成中的重要功能[7]。在細胞有絲分裂中, 極光激酶參與了諸如中心體成熟分離、紡錘體組裝和維持、染色體分離以及胞質分裂等多個事件[8]。通過本次研究，用數據證明Aurora激酶A、B在宮頸癌組織中高表達情況，這將成為宮頸癌早期診斷的生物學指標。通過Aurora激酶A、B在宮頸癌組織中表達情況，結合目前現有HPV檢測，這不但有效提高了宮頸癌的早期診斷率，還可產生檢驗收益[9]。

3.2 宮頸癌細胞在Aurora激酶的表達與否情況下的增殖率、凋亡率

本研究對宮頸癌患者采用Aurora激酶抑制劑VX-680或化療藥物順鉑治療后，流式細胞儀分析結果顯示癌細胞的增殖率顯著下降、凋亡率顯著升高，其中Aurora激酶的表達與否對癌細胞的增殖與凋亡情況有所影響，顯示通過抑制Aurora激酶表達與順鉑治療，可以加速宮頸癌細胞的凋亡，這為臨床開發新的宮頸癌治療手段提供新的思路[10]。

綜上所述，Aurora激酶在女性宮頸癌細胞中存在顯著高表達的現象,屬于一種新的癌基因。通過對宮頸癌患者采用Aurora激酶抑制劑VX-680或化療藥物順鉑治療后，宮頸癌的增殖率顯著下降、凋亡率顯著升高，這為臨床開發新的宮頸癌治療手段提供新的思路。

[1] 蘇青，楊瑾，許璐潔，等． 宮頸上皮內瘤變427例臨床病理分析[J]．陜西醫學雜志，2016，45（10）：1402-1403，1406．

[2] Elit LM，Hirte H． Management of advanced or recurrent cervical cancer: chemotherapy and beyond[J]． Expert Rev Anticancer Ther，2014，14（3）：319-332．

[3] 劉晶，黃照權． Aurora 激酶在腫瘤中的作用研究進展[J]． 華夏醫學，2016，29（5）：118-121．

[4] 梁指榮，楊潔飛，蘇錫康． 多種腫瘤標記物檢測在宮頸癌診治中的意義[J]． 國際檢驗醫學雜志，2016，37（1）：21-23．

[5] Takagi M，Sakatmoto T，Suzuki R，et al． Plant aurora kinases interact with and phosphorylate transcrition factors[J]． J Plant Res，2016，129（6）：1165-1178．

[6] 滑芳，李琴，宋菲菲，等． Aurora A激酶抑制劑VX-680對人宮頸癌細胞化療敏感性的影響[J]． 山東醫藥，2014，54（41）：11-13．

[7] Gavriilidis P，Giakoustidis A，Giakoustidis D． Aurora kinases and potential medical applications of aurora kinase inhibitors：a review[J]．J Clin Med Res，2015，7（10）：742-751．

[8] 滑芳，謝磊，李義飛，等． 宮頸癌和癌前病變中 Aurora A 表達及與 HPV16 感染的關系[J]． 中國現代醫學雜志，2013，23（35）：38-41．

[9] 閆潔，付敏，梁慧，等． Aurora-A、MCM7及HPV16E7在子宮頸上皮內瘤變和子宮頸鱗癌中的表達及意義[J]． 徐州醫學院學報，2015，35（2）：85-89．

[10] D'Assoro AB，Liu T，Quatraro C，et al． The mitotic kinase Aurora--a promotes distant metastases by inducing epitihelial-tomesenchymal transition in ERα(+) breast cancer cells[J]． Oncogene，2014，33（5）：599-610．

Study on the Pathogenesis of Aurora Kinases in Cervical Cancer

XIAO Jinjun Shenzhen Xili People's Hospital of Nanshan District, ShenzhenGuangdong 518000, China

Objective To investigate the expression of Aurora kinase A and B in normal cervical tissues, CIN and cervical cancer tissues, and to explore the role of Aurora kinase A and B in the genesis and development of cervical carcinoma. Methods A total of 30 patients with cervical cancer in Shenzhen were selected, and a total of CIN patients in our hospital in were selected, and a total of 30 patients with cervical cancer were enrolled in this study. Fluorescence quantitative method was used to detect the expression of Aurora kinase A and B in different cervical tissues and the relationship with HPV16, HPV18 infection. The FCM analysis of 30 cases of patients with cervical cancer tissue specimens of Aurora kinase A, B expression and the expression of cell proliferation rate, apoptosis rate, and for patients with cisplatin was observed after treatment of cancer cell proliferation rate, apoptosis rate. Results The expression of HPV16, HPV18 and Aurora kinase in normal cervical tissues. The low expression of high HPV16 and HPV18 in cervical cancer, the expression rates were 96.67%, 100.00%, followed by the expression of CIN, expression rates were 66.67%, 70.00%, accounting for about 70% of the left and right type of cancer, the difference was statistically significant (P＜ 0.05). Aurora kinase A was highly expressed in cervical cancer tissues, and the high expression of Aurora kinase B was associated with malignant invasion of tumor. The difference was statistically significant (P ＜ 0.05). The expression of Aurora kinase A and Aurora kinase B in cervical cancer cells in the observation group was significantly lower than that in the control group, the difference was statistically significant (P＜ 0.05). For patients with cervical cancer by Aurora kinase inhibitor VX-680 or cisplatin treatment, cancer cell proliferation rate decreased significantly, the apoptosis rate was significantly increased, Aurora kinase expression group not cancer cell proliferation rate is lower than the expression group, apoptosis rate was higher than that of group, the differences were statisticallysignificant (P＜ 0.05). Conclusion Aurora kinase significantly high expression of the phenomenon in women cervical cancer cells, the cervical cancer patients with Aurora kinase inhibitor VX-680 or cisplatin treatment, cervical cancer cell proliferation rate decreased significantly, the apoptosis rate was significantly increased.

aurora kinase; HPV; cervical cancer

R361

A

1674-9316（2017）08-0122-03

10．3969/j．issn．1674-9316．2017．08．075

廣東省深圳市南山區資助科技計劃區屬事業單位研發項目（2015055）

深圳市南山區西麗人民醫院婦產科，廣東 深圳 518000