人嗜血支原體瑞士染色光鏡下的形態(tài)特點

劉寰宇 陳 瑤 邰秀珍 楊殿相

內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院病理生理學(xué)教研室 內(nèi)蒙古自治區(qū)呼和浩特市 010000

人嗜血支原體瑞士染色光鏡下的形態(tài)特點

劉寰宇 陳 瑤 邰秀珍 楊殿相

內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院病理生理學(xué)教研室 內(nèi)蒙古自治區(qū)呼和浩特市 010000

目的：觀察人嗜血支原體光學(xué)顯微鏡下的的形態(tài)特點，從而快速、準(zhǔn)確的初步診斷人嗜血支原體病。方法：人血涂片、瑞士染色、自然干燥，光學(xué)顯微鏡1000x油鏡下觀察。結(jié)果：見大小不一、形態(tài)多樣、顏色多色的人嗜血支原體。結(jié)論：人嗜血支原體具有多色性、多形性、折光性等特點。

人嗜血支原體；形態(tài)；光鏡；瑞士染色

人嗜血支原體又稱人附紅細(xì)胞體是寄生于人或多種動物的紅細(xì)胞表面、血漿、組織液及腦脊髓液中的的一群血液寄生微生物[1-2]，其大小波動較大[3]，生物學(xué)分類尚且存在爭議。能引起以貧血、黃疸、發(fā)熱為主要臨床特征的人嗜血支原體病[3]。自1986年人嗜血支原體病首次被報道至今，有很多關(guān)于光鏡下人嗜血支原體瑞士染色特點的描述，但關(guān)于人嗜血支原體形態(tài)的相關(guān)圖像資料較少，本文描述了在篩選人嗜血支原體重度感染患者過程中見到的6張光鏡下瑞士染色的人嗜血支原體圖片。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 研究對象

人嗜血支原體感染患者血液來源于內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)第二附屬醫(yī)院入院的患者，不區(qū)分年齡、性別。

1.1.2 主要試劑和藥品

瑞氏染粉，磷酸二氫鉀，磷酸氫二鈉，甘油，KCl，NaCl，Na2HP04，KH2P04，EDTA。

1.1.3 主要試劑的配制

瑞氏染液配制：

（1）瑞氏染液

瑞氏染粉1.2g，甘油80ml，甲醇600ml，瑞氏染粉加入研缽，研細(xì)（一般5～10min），緩慢加入甘油，最后再加入甲醇600ml（存放3個月），放置4度冰箱中備用。

（2）緩沖液（放置于4度冰箱保存可同時用封口膜封住）

1%磷酸二氫鉀（KH2PO4）30ml，1%磷酸氫二鈉（Na2HPO4）20ml，加蒸餾水加至1000ml，PH:6.4-6.8。

1.4 主要實驗儀器

分析天平，電子顯微鏡，圖像輸出軟件，電熱恒溫鼓風(fēng)培養(yǎng)箱，4℃冰箱，微量移液器，全自動高壓滅菌鍋，載玻片，洗耳球，染色架，計時器

1.2 實驗方法

瑞氏染色

血涂片平置于染色架上，根據(jù)血膜大小滴加適量瑞氏染液，一般3～5滴，使其迅速蓋滿血膜，再加染液一倍量的緩沖液，用洗耳球?qū)?zhǔn)血涂片，使染液與緩沖液充分混合，染色10min，以固定血片。水洗30秒，待自然干燥后鏡檢。

2 結(jié)果

取人嗜血支原體瑞士染色血涂片，在1000x油鏡下觀察結(jié)果如下。

圖1顯示：

圖1.圖2.圖3.圖4.圖5.圖6.-人嗜血支原體瑞士染色（1000x 油鏡）

（1）血漿中可見大小不一的、點狀、有較強(qiáng)折光性的人嗜血支原體。

（2）被人嗜血支原體附著的紅細(xì)胞邊緣破碎呈齒輪狀、缺口狀。

（3）圖中左側(cè)一紅細(xì)胞被成熟人嗜血支原體感染后變型成S形，寄生的人嗜血支原體表現(xiàn)出明顯的折光性。

圖2顯示：

（1）圖中血漿中、紅細(xì)胞上均可見到人嗜血支原體附著，大小均一的人嗜血支原體寄生在同一紅細(xì)胞邊緣后使紅細(xì)胞變成向日葵狀，具有弱折光。

（2）圖片左側(cè)血漿中有一較大的圓形、強(qiáng)折光性的人嗜血支原體。

（3）圖中可見一個深藍(lán)色、一個棕褐色人嗜血支原體分別寄生在不同的紅細(xì)胞表面。

圖3顯示：

（1）多個人嗜血支原體同時寄生在部分紅細(xì)胞表面，使紅細(xì)胞變型成星芒狀。

（2）血漿中可見聚集成鏈狀的人嗜血支原體。

圖4顯示：

（1）多個棕褐色的人嗜血支原體分別寄生在不同紅細(xì)胞表面。圖的右上角有一個藍(lán)色的人嗜血支原體寄生在紅細(xì)胞表面。也可見兩個嗜血支原體附著在同一個紅細(xì)胞表面。

（2）人嗜血支原體感染后紅細(xì)胞淡染區(qū)空泡化。

（3）一個異型淋巴細(xì)胞上未見人嗜血支原體附著。

（4）圖片右側(cè)有一體積較大的雜質(zhì)，調(diào)焦后無折光性。

圖5顯示：

（1）圖為一人嗜血支原體嚴(yán)重感染圖片，多個嗜血支原體同時寄生在一個紅細(xì)胞表面且表現(xiàn)出較強(qiáng)的折光性。

（2）人嗜血支原體感染嚴(yán)重紅細(xì)胞出現(xiàn)黏連、重疊。

（3）部分紅細(xì)胞淡染區(qū)空泡化。

圖6顯示：

（1）圖中可見多個被人嗜血支原體感染后縮小的紅細(xì)胞。

（2）圖中可見多個深染的紅細(xì)胞。

3 結(jié)論

人嗜血支原體血涂片經(jīng)瑞氏染色在1000x油鏡下觀察，可見人嗜血支原體大小不一，直徑一般在0.3-1.2μm。呈圓、卵圓、短桿、拉鏈、線團(tuán)、x、y、w形等不規(guī)則的多形性。其著色可見紫紅色 、褐黃色、褐綠色、深褐色、藍(lán)色、綠色等多色性,與邰秀珍[3]、石全貴等的報道一致。被寄生的紅細(xì)胞大小發(fā)生變化，差距懸殊，感染嚴(yán)重時變形呈星芒狀，甚至溶解破碎。顏色深淺不一可見多染性、高色性紅細(xì)胞。

人嗜血支原體大小的不同、可能與它們處在不同生活史、不同階段有關(guān)。形態(tài)的不同與人的免疫狀態(tài)有關(guān)。著色的不同，可能與染色時給與的條件如室內(nèi)溫度、室內(nèi)濕度、染液的質(zhì)量、涂好血片后染色是否及時、所用圖像輸軟件的設(shè)置有關(guān)。折光性是辨別人嗜血支原體與其它微生物以及易混雜因素的主要特征。現(xiàn)階段感染率的高低主要根據(jù)被人嗜血支原體寄生的紅細(xì)胞的數(shù)目來確定而本文認(rèn)為感染的嚴(yán)重程度應(yīng)同時考慮每個紅細(xì)胞上寄生的人嗜血支原體的個數(shù),血漿中附紅細(xì)胞體的個數(shù)，如果每個紅細(xì)胞上寄生的人嗜血支原體的個數(shù)越多，其感染情況越嚴(yán)重這與本文中報道的嚴(yán)重感染的人嗜血支原體患者的血片相符。圖片中見到的兩個或多個紅細(xì)胞聚集的現(xiàn)象可能是由于人嗜血支原體分泌粘附因子引起的。紅細(xì)胞淡染區(qū)的空泡化可能是由于巨形人嗜血支原體附著引起。除此之外，圖片中性粒細(xì)胞和淋巴細(xì)胞偶有人嗜血支原體寄生與邰秀珍、石全貴[4]等的報道不一致。由于人嗜血支原體形態(tài)的多形性和顏色的多樣性、折光性的特點給人嗜血支原體的客觀診斷帶來障礙，因此人嗜血支原體的分子生物學(xué)診斷尤為重要，將在以后的實驗過程予以關(guān)注。

（通訊作者：陳瑤）

[1]邰秀珍.人類附紅細(xì)胞體病[J].內(nèi)蒙古醫(yī)學(xué)雜志,1991(01)(增刊):122.

[2]馮立明，路英杰．人類附紅細(xì)胞體病[J].中華血液學(xué)雜志,1992,13(10): 520-522．

[3]邰秀珍,楊殿相,秦林金,金麗萍,托婭,齊國良.人類附紅細(xì)胞體形態(tài)學(xué)特點[J].中國人獸共患病雜志,1998(05):83-84+86.

[4]石泉貴,李素芝,陳洪章.高原人附紅細(xì)胞體病的診斷與防治[J].華南國防醫(yī)學(xué)雜志,2011,25(06):466-468.

劉寰宇（1990-），女，在讀碩士。

陳瑤（1957-）女，現(xiàn)為內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院病理生理學(xué)教研室教授，主要從事心血管病理生理學(xué)研究。

地區(qū)科學(xué)基金資助項目“人附紅細(xì)胞體病發(fā)病機(jī)制及蒙藥治療的實驗研究”（81260414）。