不同方法與技術(shù)在中藥材鑒定中的應(yīng)用

張 訓(xùn)

（四川大學(xué)華西藥學(xué)院，成都 610041）

不同方法與技術(shù)在中藥材鑒定中的應(yīng)用

張 訓(xùn)

（四川大學(xué)華西藥學(xué)院，成都 610041）

我國(guó)中藥材資源豐富，來源廣泛。但是，由于受到自然條件或人工干預(yù)的影響，中藥材的質(zhì)量有著較大的差別。文章分別介紹中藥材的傳統(tǒng)鑒定法、生物鑒定法和圖譜鑒定法，以及在中藥材鑒定中的應(yīng)用，以期為我國(guó)中藥材鑒定體系的完善發(fā)展提供理論依據(jù)。

中藥材 鑒定 方法 技術(shù)

1 傳統(tǒng)鑒定

1.1 基原鑒定

中藥材的基原鑒定是中藥材鑒定的基礎(chǔ)，屬于礦物學(xué)和生物學(xué)的范疇。此方法是根據(jù)礦物、植物或動(dòng)物的形態(tài)、分類學(xué)的知識(shí)，對(duì)中藥材進(jìn)行系統(tǒng)分類鑒定，并予以命名。目的是確定其來源，并將其劃分為種類的分類單位，以便確保中藥材品種的準(zhǔn)確。例如，金銀花是我國(guó)一種較為常見的中藥材，不同學(xué)者對(duì)其來源有著很大的分歧。為了鑒定其基原，我國(guó)一些學(xué)者通過查閱大量的文獻(xiàn)，對(duì)金銀花原植物形態(tài)描述進(jìn)行了系統(tǒng)性的研究，并對(duì)文獻(xiàn)中金銀花的特點(diǎn)進(jìn)行了總結(jié)，通過查閱古藥圖，從中找出描述金銀花特征的有力證據(jù)。經(jīng)過對(duì)古代文獻(xiàn)中金銀花特點(diǎn)的分析，最終確定金銀花的基原為忍冬科忍冬屬金銀花。

1.2 性狀鑒定

中藥材的性狀鑒定是鑒定者通過眼、鼻、喉、耳、手等感官，從中藥材的外觀鑒定其真?zhèn)蔚囊环N方法。由于性狀鑒定主要通過鑒定者的經(jīng)驗(yàn)進(jìn)行的，因此，性狀鑒定也稱為經(jīng)驗(yàn)鑒定。一般而言，某種藥材的外形是比較固定的，則通過眼睛觀察藥材的形狀、顏色、質(zhì)地、大小等外觀特征，可以快速的對(duì)其進(jìn)行鑒定。例如，黃連的形狀和雞爪相似；玄參的形狀與羊角相似，從外形上就可以分辨他們。對(duì)于帶有特殊氣味的中藥材，可以通過鼻聞的方式進(jìn)行鑒定。例如，用鼻聞?wù)繁『蓵r(shí)，能感受到一種特別辛涼的味道，若沒有，則為非正品。通過口嘗藥材的味道，作為鑒定藥材優(yōu)劣的方法，是人們?cè)趯?shí)踐中不斷積累得來的，也是一種主要的鑒定方法。例如，山楂味酸，且以酸為佳。對(duì)于一些有劇毒的藥材，則應(yīng)避免用口嘗的方式進(jìn)行鑒別，可以通過聽覺與觸覺進(jìn)行鑒定。如，搖晃羅漢果會(huì)出現(xiàn)響聲，用手摸蛤蟆油則有蠟的感覺。

1.3 顯微鑒定

一些藥材經(jīng)過研磨或搗碎后，原有的外觀特性所剩無幾，很難通過性狀鑒定的方式對(duì)其進(jìn)行鑒定。而細(xì)胞是構(gòu)成物體的基本單位，通過顯微設(shè)備對(duì)其顯微特性進(jìn)行觀察，已經(jīng)成為中藥材鑒定中不可缺少的部分。以數(shù)字圖像處理技術(shù)在中藥材纖維鑒定中的應(yīng)用為例。該技術(shù)可以對(duì)不同的中藥材的組織細(xì)胞進(jìn)行參數(shù)分析，確定數(shù)密度、體密度、直徑、球化度等參數(shù)，最終建立起顯微鑒定模式的識(shí)別系統(tǒng)，為中草藥的鑒定提供三維定量資料與技術(shù)。例如，對(duì)山麥冬、杭麥冬和川麥冬等3種中藥材的形態(tài)特征進(jìn)行分析時(shí)，圖像分析結(jié)果表明3種中藥材在重要的組織細(xì)胞大小、形態(tài)和密度上，都存在著一定的差異，可利用他們木栓細(xì)胞的特征差異作為鑒定的指標(biāo)，除了數(shù)字圖像處理技術(shù)外，像原子力顯微鏡等顯微觀察新技術(shù)、激光共聚焦掃描顯微鏡等多種方法及分析技術(shù)，也為顯微鑒定提供了有力的支持。

1.4 理化鑒定

中藥材的理化鑒定是通過對(duì)其所含有的有效或?qū)Ｓ谐煞诌M(jìn)行定量或定性分析，并評(píng)價(jià)其真?zhèn)位騼?yōu)劣的一種方法。一般在中藥材的外觀或者顯微特征無明顯差別時(shí)使用。以裂解-氣相色譜法為例。不同的中藥材有著不同組成的揮發(fā)性油，因此，氣相色譜也不同。此方法通過高溫作用，將中藥材的非揮發(fā)物質(zhì)裂解成小分子，裂解成的小分子進(jìn)入氣相色譜系統(tǒng)，從而得到可以區(qū)別不同藥材有效成分的裂解圖譜，或者根據(jù)圖譜中的圖譜特征峰的強(qiáng)度，判斷藥材的質(zhì)量好壞。相比于氣相色譜，由于液相色譜對(duì)流動(dòng)相的選擇性較大，因此，還能鑒定出結(jié)構(gòu)相似或組分更加復(fù)雜的中藥材。隨著科技的不斷進(jìn)步，理化鑒定中的色譜、光譜等技術(shù)也在不斷的發(fā)展與更新，對(duì)推動(dòng)中藥材的鑒定，起到了至關(guān)重要的作用。

2 生物鑒定

2.1 分子鑒定法

顯微鑒定需要有很強(qiáng)的科學(xué)依據(jù)，且還需要鑒定人員有很高水平的鑒定能力，因此，對(duì)中藥材鑒定有一定的局限性。而通過理化鑒定方法鑒別中藥材的真?zhèn)危m然準(zhǔn)確，但卻費(fèi)時(shí)費(fèi)力。相比之下，通過分子鑒定法對(duì)中藥材進(jìn)行鑒定，具有準(zhǔn)確性高，且省時(shí)省力的優(yōu)點(diǎn)。中藥材的分子鑒定一般以DNA序列的鑒定為主，包括分子雜交技術(shù)、以重復(fù)序列為基礎(chǔ)的分子標(biāo)記技術(shù)、以PCR擴(kuò)增為基礎(chǔ)的分子標(biāo)記技術(shù)、DNA條形碼技術(shù)、DNA序列分析技術(shù)等。這些分子鑒定技術(shù)不僅可以對(duì)中藥材的真?zhèn)巍⒍嗷⒄放c替代品進(jìn)行鑒定，而且還能夠?qū)χ兴幉牡哪晗夼c產(chǎn)地進(jìn)行鑒別。以中藥材的真?zhèn)舞b定為例。采用分子鑒定法對(duì)當(dāng)歸及其混偽品進(jìn)行鑒定時(shí)，將它們的trnl-F序列進(jìn)行擴(kuò)增并測(cè)序，通過對(duì)它們序列之間的對(duì)比發(fā)現(xiàn)，當(dāng)歸和其混偽品在1個(gè)SNP位點(diǎn)上和1個(gè)A堿基重復(fù)序列上，均存在著顯著的差異，因此能夠有效的將當(dāng)歸與其混偽品區(qū)分開。

2.2 免疫鑒定法

由于不同動(dòng)物藥材含有不同的特異性蛋白，因此，免疫鑒定法根據(jù)藥材的這個(gè)特性，將動(dòng)物來源藥材中的特異性蛋白作為抗原，制備出相應(yīng)的特異性抗體。抗體只有與相應(yīng)的抗原相對(duì)應(yīng)時(shí)，才會(huì)形成抗原-抗體的復(fù)合物，以達(dá)到鑒定的目的。抗原-抗體的復(fù)合物反應(yīng)結(jié)果，要通過反應(yīng)系統(tǒng)中所添加的一些標(biāo)記物進(jìn)行顯示分析，并根據(jù)標(biāo)記方法和標(biāo)記物的不同，可以將其分為酶免疫分析、放射免疫分析、熒光免疫分析等。以酶免疫分析為例。用酶對(duì)抗原或者抗體進(jìn)行標(biāo)記，通過對(duì)酶活性的測(cè)定，確定抗原與抗體之間的結(jié)合情況，從而檢測(cè)到供試藥材與標(biāo)記藥材之間的關(guān)系。免疫分析技術(shù)由于具有靈敏度高、樣品消耗少、操作簡(jiǎn)便等特點(diǎn)，對(duì)于鑒定藥材中的微量組分或者鑒定親緣關(guān)系較近的動(dòng)物藥材都有著十分重要的意義。

3 圖譜鑒定

3.1 指紋圖譜鑒定

中藥材的指紋圖譜鑒定是利用現(xiàn)代分析技術(shù)，以圖像的方式將中藥材中的化學(xué)信息表達(dá)并描述出來的一種鑒定方法。主要運(yùn)用的分析技術(shù)，包括X射線染色技術(shù)、氣相色譜技術(shù)、液相色譜技術(shù)、光譜技術(shù)、波普技術(shù)、核磁共振技術(shù)及這些技術(shù)的聯(lián)用技術(shù)等。藥材中的化學(xué)信息是由多種化學(xué)成分所構(gòu)成的，并且中藥的療效是由多種化合成分通過協(xié)同或者相克作用而發(fā)生的，因此，在指紋圖譜中，只需表征出一部分化學(xué)信息。目前，指紋圖譜鑒定已經(jīng)在國(guó)際上得到了認(rèn)可。通過建立指紋圖譜，可以反應(yīng)出中藥材中的化學(xué)成分的組成種類與數(shù)量，從而有效地反應(yīng)出中藥材的質(zhì)量。中藥材指紋圖譜的建立，應(yīng)遵循系統(tǒng)性、特征性和重現(xiàn)性三大基本原則。系統(tǒng)性是指中藥材中的全部指標(biāo)成分或有效部位中的大部分成分的種類都應(yīng)該反應(yīng)在指紋圖譜中。例如，皂苷類化合物是人參中的有效成分，因此，其中所有的皂苷類成分應(yīng)盡量的反應(yīng)在圖譜中。特征性是指圖譜中的化學(xué)成分應(yīng)有高度的選擇性，能夠成為中藥材特有的化學(xué)條碼。重現(xiàn)性指的是不同的試驗(yàn)人員所建立的指紋圖譜應(yīng)具有通用性，確保指紋圖譜的統(tǒng)一規(guī)范。

3.2 近紅外光譜鑒定

近紅外光的光譜是在紅外光譜中，波長(zhǎng)為780～2 526 nm之間的一段電磁波。由于近紅外光譜技術(shù)具有操作簡(jiǎn)便、測(cè)試速度快、結(jié)果準(zhǔn)確、應(yīng)用范圍廣、不消耗樣品等優(yōu)點(diǎn)，因此也被廣泛用在中藥材鑒定中。近紅外光譜技術(shù)通常用于中藥材的定量與定性分析，光譜主要的解析技術(shù)方法有主成分分析法（PCA）、偏最小二乘法（PLS）、二維相關(guān)光譜法（2D-COS）法及密度泛函理論法（DET）等。例如，在利用近紅外光譜進(jìn)行白芷偽劣鑒定時(shí)，首先確定出白芷樣品的近紅外反射光譜，隨后通過相關(guān)的分析方法來表征樣品光譜在不同波長(zhǎng)下的相似度，從中篩選出白芷的特征、波長(zhǎng)、范圍，再通過分析主成分，得到二維空間樣品分布圖，以此鑒別白芷樣品的偽劣。又如，用高校液相色譜法測(cè)定連翹酯苷含量時(shí)，用偏最小二乘法建立其近紅外光譜與連翹酯苷含量直接的校正模型，結(jié)果預(yù)測(cè)值與測(cè)定值相關(guān)系數(shù)高達(dá)0.961，因此，可作為大量快速檢測(cè)連翹質(zhì)量鑒定的重要方法。

[1] 施曉龍．顯微鑒定在中藥材鑒定中的研究進(jìn)展．甘肅中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2014，（6）：84～87

[2] 時(shí)圣明．分子鑒定技術(shù)在中藥中的應(yīng)用．中草藥，2016，47（17）：3121～3126