栝樓組織培養(yǎng)研究進(jìn)展

●陳燕文 季冬青 呂姝靜 張強(qiáng)

栝樓組織培養(yǎng)研究進(jìn)展

●陳燕文 季冬青 呂姝靜 張強(qiáng)

栝樓是我國(guó)傳統(tǒng)中藥材，為了進(jìn)一步促進(jìn)栝樓的研究和利用，本文對(duì)栝樓組織培養(yǎng)技術(shù)進(jìn)行綜述，以期為栝樓的綜合利用提供參考。

栝樓；組織培養(yǎng)；研究進(jìn)展

栝樓（Trichosanthes kirilowii Maxim）屬葫蘆科栝樓屬，為多年生攀援植物，主要分布在安徽、河南、山東等地[1]，具有解熱止渴、利尿、鎮(zhèn)咳祛痰等作用。種子含脂肪油，營(yíng)養(yǎng)豐富，入藥能化痰散結(jié)，滑腸通便[2]；果實(shí)含三萜皂苷、有機(jī)酸、糖類(lèi)；根富含蛋白質(zhì)天，花粉蛋白是主要有效成分，對(duì)早中期妊娠引產(chǎn)有效率高，并對(duì)葡萄胎、死胎及宮外孕有獨(dú)特療效[3]。現(xiàn)代研究表明栝樓具有調(diào)節(jié)免疫功能的活性，能夠抑制病毒的增殖和腫瘤的生長(zhǎng)[4]。栝樓經(jīng)濟(jì)價(jià)值很高，藥用栝樓多為野生采集，而野生資源破壞嚴(yán)重，已經(jīng)無(wú)法滿(mǎn)足市場(chǎng)的需要，因此，栝樓的人工栽培勢(shì)在必行[5]。為促進(jìn)栝樓栽培生產(chǎn)發(fā)展及綜合開(kāi)發(fā)利用的深入，本文對(duì)其組織培養(yǎng)研究進(jìn)展情況概述如下：

1 栝樓的組織培養(yǎng)

栝樓是雌雄異株植物，生產(chǎn)上有種子和分根兩種繁殖方式。用種子繁殖，幼苗雌雄難辨，從而影響籽用栝樓生產(chǎn)。據(jù)統(tǒng)計(jì)，用種子繁殖的雌株僅為10%～30%[6]。分根繁殖雖可解決種苗問(wèn)題，但繁殖周期長(zhǎng)、效益差，也不能滿(mǎn)足生產(chǎn)需要。因此，需要建立快速繁殖技術(shù)體系。

組織培養(yǎng)快速繁殖具有材料來(lái)源廣泛、不受生產(chǎn)季節(jié)限制、繁殖快速等優(yōu)點(diǎn)。集約化培養(yǎng)，一年可繁殖8～10代，不受季節(jié)和環(huán)境的限制，試管苗適于工廠(chǎng)化生產(chǎn)，規(guī)模較大，成本低[7]。栝樓的組織培養(yǎng)始于20世紀(jì)90年代，前人以帶腋芽莖段為外植體，MS 為基本培養(yǎng)基添加外源激素實(shí)現(xiàn)植株的再生。

1.1 栝樓莖段快速繁殖

郭曉亮等[8]以栝樓莖為材料作為外植體誘導(dǎo)愈傷組織時(shí)，發(fā)現(xiàn)所用栝樓外植體的性別不同，對(duì)培養(yǎng)基的要求也不同。廖華俊等[9]應(yīng)用莖尖組織培養(yǎng)結(jié)果顯示，不同激素濃度對(duì)芽叢形成、分化及根形成有影響，莖尖組培的最佳誘導(dǎo)、增殖和生根培養(yǎng)基分別是MS＋6-BA 1.5mg/L＋I(xiàn)BA 0.3mg/L＋NAA0.05mg/L、MS＋ 6-BA 1.0mg/L＋I(xiàn)BA 0.3mg/L＋NAA0.05 mg/L和l/2MS＋I(xiàn)BA0.5mg/L。用栝樓組培苗抽出的匍匐莖進(jìn)行非試管快繁育苗，種苗質(zhì)優(yōu)，其中以9～10月份繁出的種苗在當(dāng)年假植中形成的地下塊莖最大，坐果率、產(chǎn)量最高。錢(qián)驊等[10]得出，適宜栝樓微莖尖叢生芽誘導(dǎo)的培養(yǎng)基為：MS+1mg/L6-BA+0.3mg/LNAA；栝樓組培苗誘導(dǎo)生根以MS+0.1mg/LIBA最好，其次是 MS+0.1 mg/L NAA。暗培養(yǎng)對(duì)栝樓根長(zhǎng)度和側(cè)根生長(zhǎng)有促進(jìn)作用。

1.2 栝樓腋芽快速繁殖

尹藝林等[11]通過(guò)將腋芽接種于MS+3%蔗糖+0.8%瓊脂(pH5.8)，添加不同濃度激素組合的培養(yǎng)基上，25℃持續(xù)光照培養(yǎng)，誘導(dǎo)芽生長(zhǎng)成無(wú)根苗。將長(zhǎng)出的無(wú)根苗切下，接種在MS+3%蔗糖+0.8%瓊脂(pH5.8)，添加不同濃度NAA的培養(yǎng)基上，誘導(dǎo)生根。結(jié)果表明：將腋芽接種到不同激素的MS配養(yǎng)基上生長(zhǎng)20d后，發(fā)現(xiàn)在添加0.1 mg／LNAA、0.3 mg／L6-BA、0.5 mg／L6-BA、0.8 mg／L6-BA的培養(yǎng)基上均可以誘導(dǎo)出芽。佟宏霞等[12]通過(guò)對(duì)文獻(xiàn)方法的改進(jìn)，建立了由栝樓腋芽→叢生芽→無(wú)根試管苗→再生根→再生完整植株→試管苗移栽成活的一整套栝樓試管苗快速繁殖體系。該繁育體系建立不僅可以保護(hù)栝樓物種免遭自然界細(xì)菌和病毒的侵染，還可以在短時(shí)間內(nèi)大量繁殖栝樓試管苗，可為栝樓種植業(yè)生產(chǎn)提供優(yōu)質(zhì)種苗。

1.3 栝樓葉片快速繁殖

楊曉伶等[13]用莖尖、帶芽莖段、莖段和葉片誘導(dǎo)叢生芽及愈傷組織，發(fā)現(xiàn)2 年生塊莖幼苗莖尖和帶芽莖段在MS＋BA 2 mg/L＋NAA 0.5～0.05 mg/L培養(yǎng)基上可誘導(dǎo)叢生芽，并在生根培養(yǎng)基MS＋NAA 0.1 mg/L＋I(xiàn)BA 0.2 mg/L中生根，經(jīng)馴化移栽可實(shí)現(xiàn)快速繁殖。無(wú)芽莖段和葉片用含BA4 mg/L和NAA0.5 mg/L的MS 培養(yǎng)基可誘導(dǎo)愈傷組織，由莖段來(lái)的愈傷組織經(jīng)6周后分化為無(wú)根苗。

2 討論

以栝樓植株子葉、卷須、莖段、根段、根尖等作為外植體，以MS作為基本培養(yǎng)基，通過(guò)添加不同激素誘導(dǎo)不定芽、不定根的發(fā)生，均可培養(yǎng)出完整植株，實(shí)現(xiàn)快速繁殖的目的[14]。但組織培養(yǎng)技術(shù)只是初步的研究，技術(shù)還不成熟，不能進(jìn)行大規(guī)模的推廣應(yīng)用。栝樓具有食品、藥品多種價(jià)值，由于人們生活水平的不斷提高，對(duì)栝樓的需求量也不斷增加。本文通過(guò)對(duì)栝樓組織培養(yǎng)技術(shù)的總結(jié)，以期為將來(lái)的研究提供依據(jù)。

（作者單位：山東中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院）

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陳燕文，男，在讀碩士研究生。