西藏雞沙門菌病流行情況調查

元振杰 ， 王 燕 ， 馬弘財 ， 夏晨陽 ， 吳金措姆 ， 四朗玉珍 ， 班 旦 ， 格桑卓嘎

(西藏自治區農牧科學院畜牧獸醫研究所， 西藏 拉薩 850009)

沙門菌病是目前危害養禽業最常見的細菌疫病之一[1]，在公共衛生學上有著重要的意義。隨著進藏旅游的盛行，從而帶動高原藏雞、藏蛋等需求增加，近年來西藏養禽業在養殖規模和數量上得到了快速的發展，隨之而來雞病發生也更加復雜化。由于有良好的疫苗和完善的免疫程序，目前病毒性傳染病基本得到了控制，而細菌性疾病尤其是雞沙門菌病呈現出擴張流行的趨勢[2]。為了解雞沙門菌在西藏流行情況，項目組選擇在養禽區拉薩市5個縣(區)12個養殖場不同品種不同來源的雞進行采樣分析，為臨床上科學防治本病提供一定的依據。

1 試驗材料

1.1 主要儀器 恒溫培養箱，超凈工作臺，全自動高壓蒸氣滅菌鍋，電熱恒溫干燥箱，光學顯微鏡等

1.2 主要試劑 沙門菌快速鑒別培養基、麥康凱培養基、 LB培養基、伊紅美藍培養基、BS瓊脂培養基(均購自青島海博生物公司)；沙門菌生化編碼微量鑒定管(購自杭州天和微生物試劑有限公司)；沙門菌A-F屬診斷血清(購自蘭州生物制品研究所)。

1.3 病理樣品 2015年4月至2016年8月，來自拉薩市城關區、曲水縣、達孜縣、墨竹工卡縣、堆龍德慶縣12個集約化養雞場，雛雞泄殖腔拭子、成雞泄殖腔拭子和病死雞病變組織。

1.4 實驗雞 來自西藏農科院畜科所曲尼帕拉薩白雞良種繁育基地。

2 試驗方法

2.1 細菌分離培養 采用無菌操作取待檢病料分別接種于沙門菌快速鑒別平板，37 ℃培養18～24 h后，觀察結果。挑取陽性菌株分別接種于麥康凱平板、伊紅美藍平板、BS瓊脂平板，37 ℃培養16～18 h，根據菌落生長特性進行初步判斷。

2.2 細菌染色鏡檢 分別挑取單個菌落，固定并進行革蘭染色鏡檢，染色鏡檢方法按照常規方法進行。

2.3 生化鑒定 根據《伯杰氏細菌鑒定手冊》第九版[3]和沙門菌編碼生化鑒定管說明書要求，挑取培養好的新鮮菌落分別接種于賴氨酸脫羧酶、靛基質、尿素酶、氰化鉀、硫化氫、山梨醇、甘露醇、水楊苷、丙二酸鹽、衛矛醇、ONPG及葡萄糖、乳糖、蔗糖、麥芽糖、阿拉伯糖生化鑒定管，37 ℃培養16～24 h[9]，觀察并記錄結果。

2.4 血清型鑒定 接照沙門菌屬診斷血清說明書的實驗方法進行，同時設生理鹽水和標準菌株對照組，依次用A(O2)、B(O4)、C1(O7)、C2(O8)、D(O9)、E(O3)的O血清做玻片凝集試驗，確定血清群。再用該群的H因子凝集試驗，確定其H抗原。

2.5 動物致病性試驗 將252只7日健康雛雞(拉薩白雞)隨機分為42組，每組6只，其中40組分別接種分離培養好的40株沙門菌菌液于皮下，每只接種菌液0.2 mL(3×109CUF/mL)，1組接種沙門菌標準株菌液(3×109CUF/mL)，1組接種生理鹽水對照[4]。接種后，每隔1 h，觀察記錄雞的情況。

3 結果

3.1 細菌分離染色鏡檢 從所采集的699份病理樣品中，共分離出687株細菌，通過鑒別培養基鑒定，符合沙門菌生長特征的有421株。挑取單個菌落進行革蘭染色鏡檢，均符合沙門菌特征。

圖1 雞源性沙門菌革蘭染色鏡檢形態 (10×100)

3.2 生化鑒定 對所分離出的421株可疑沙門菌進行賴氨酸脫羧酶、靛基質、尿素酶、氰化鉀、硫化氫、山梨醇、甘露醇、水楊苷、丙二酸鹽、衛矛醇、ONPG及葡萄糖、乳糖、蔗糖、麥芽糖、阿拉伯糖試驗[3-4]后，確定有403株符合沙門菌的要求，陽性率為57.65%(403/699)。其中麥芽糖發酵陽性的有127株，判定為雞傷寒沙門菌，占31.51%(127/403)；麥芽糖發酵陰性的有276株，判定為雞白痢沙門菌，占68.49%(276/403)。

表1 雞源性沙門菌分離鑒定結果

3.3 血清型鑒定 在所分離的沙門菌中，隨機抽取100株進行試驗。100株菌共屬于5個血清群，其中A群(O2)12株，C1群(O7)27株，C2群(O8)9株，D群(O9)52株，優勢血清群為D群(52%)，其次為C1群(27%)。

表2 沙門菌的血清型

3.4 動物試驗 對隨機抽取的40株菌接種于40組雛雞，約6 h左右陸續開始發病，表現精神沉郁，不食或少食，8 h后開始表現腹瀉，拉白色糞便，表明試驗的40株菌為致病性沙門菌。接種后發病率達100%，生理鹽水對照組感染率為0%。

4 討論

雞沙門菌病是雞常見的傳染病之一，可分為雞白痢、雞傷寒、雞副傷寒3種，對養禽業危害極大[1]。隨著高原畜禽養殖業的發展，沙門菌對種雞受精率、種蛋孵化率、雛雞存活率、飼料利用率和商品蛋的品質等[1]方面問題日益突顯，如何滿足市場對高原禽類產品的急切需求已經是當前西藏養禽業面臨的主要問題。因此，如何有效的預防并控制該病，也成為當前西藏養禽業所面臨的主要問題。

本試驗通過對拉薩市養殖的不同來源、不同品種的雞進行調查，由表1可以看出，西藏本土藏雞和拉薩白雞沙門菌感染率較高，分別為83.05%(147/177)和73.41%(127/173)；而從西藏境外引進的雞苗如海藍粉、海藍白、羅曼和三黃雞其感染率分別為41.07%(23/56)、33.05%(39/118)、28.57%(16/56)、42.86%(51/119)；這可能與西藏養禽業過去較省外發展滯后，近幾年來西藏養禽業的快速發展，禽類飼養管理技術和禽病的控制凈化[5]不能跟上西藏養禽業的發展節奏有關。因此，應加強禽類飼養環境和飼養用具的衛生消毒，改變過去粗放的飼養管理方式，種禽場要積極的進行禽沙門菌的凈化，從源頭控制禽沙門菌的傳播。

[1] 甘孟侯.中國禽病學[M]．北京：中國農業出版社，1999．

[2] 王亮，張元鵬，張榮武，等．雞源性腸炎沙門氏菌的流行病學調查[J].中國人獸共患病學報，2011，27(5)：455-458.

[3] 布坎南R E,吉本斯N E.伯杰細菌鑒定手冊.第8版[M].中國科學院微生物研究所譯.北京:科學出版社.1984：392-442.

[4] 馬興樹.禽傳染病實驗診斷技術[M].北京：化學工業出版社，2006：106-112.

[5] 顧國強等.種雞場雞白痢凈化綜合措施[J].中國禽業導刊，2001，32(10)：30.