丹參防治順鉑肝毒性的實驗研究

曹思思，龔 雙，顏 苗，張畢奎

(中南大學1. 藥學院、2. 湘雅二醫院藥學部、3. 臨床藥學研究所，湖南 長沙 410011)

◇研究簡報◇

丹參防治順鉑肝毒性的實驗研究

曹思思1,2,3，龔 雙1，顏 苗2, 3，張畢奎2, 3

(中南大學1. 藥學院、2. 湘雅二醫院藥學部、3. 臨床藥學研究所，湖南 長沙 410011)

丹參；順鉑；肝毒性；小鼠；抗氧化；HO-1；

順鉑廣泛用于治療各種實體瘤，但由于其在肝臟蓄積，且肝臟對順鉑敏感性高[1]，高劑量給藥或低劑量重復給藥，患者肝毒性頻發。氧化應激與順鉑所致肝臟病理損傷有密切關聯[2]。而丹參具有抗氧化，清除脂質過氧化物的功效[3]。因此，本課題旨在研究丹參對順鉑給藥小鼠肝功能的影響，并探討其作用機制。

1 材料

1.1 實驗動物 SPF級♂ ICR小鼠，體質量20 g～23 g，購自湖南斯萊克景達實驗動物有限公司，許可證SCXK(湘)2011-0003。

1.2 藥物與試劑 丹參注射液(正大青春寶藥業有限公司)；順鉑(Sigma)；ALT、AST測定試劑盒(和光純藥工業株式會社)；SOD、GSH-Px、MDA檢測試劑盒(南京建成生物工程研究所)；一抗(Abcam)；二抗及β-actin (Proteintech)。

1.3 儀器 全自動生化分析儀(日立公司)；電動玻璃勻漿器(日本新芝)；酶標儀(匯松公司)；低溫高速離心機(深圳黑馬)；電泳儀(BIO-RAD公司)；轉膜儀(北京六一生物科技有限公司)。

2 方法

2.1 分組 將小鼠隨機分為4組(n=9)：對照組(腹腔注射等體積生理鹽水)、丹參組(腹腔注射丹參3 g·kg-1)、順鉑組(單次腹腔注射順鉑20 mg·kg-1)、丹參+順鉑組(丹參連續給藥7 d，d 5腹腔注射順鉑)。實驗d 8處死小鼠，取血和肝組織用作后續分析。

2.2 檢測指標 全自動生化分析儀測定血清ALT、AST活性；肝臟HE染色，觀察病理變化；試劑盒測定肝勻漿SOD、GSH-Px活性和MDA含量；蛋白免疫印跡法檢測肝臟HO-1蛋白表達。

3 結果

3.1 肝功能 丹參保護組血清ALT、AST活性低于順鉑組，差異具有統計學意義(P<0.05)，見Tab 1。

GroupALT/U·L-1AST/U·L-1Control36．80±6．17119．51±21．28Danshen36．22±5．12111．98±14．30Cisplatin65．82±5．71??293．90±43．60??Danshen+Cisplatin53．83±8．32##216．16±21．65##

**P<0.01vscontrol;##P<0.01vscisplatin.

3.2 肝臟病理切片 順鉑組小鼠出現輕微肝細胞水腫，炎性細胞浸潤和壞死。丹參保護組肝組織形態結構接近對照組，未見明顯病理改變。

3.3 SOD、GSH-Px活性及MDA含量 與順鉑組相比，丹參保護組SOD、GSH-Px活性增高，MDA含量降低，其中，GSH-Px和MDA組間差異具有統計學意義(P<0.05)，見Tab 2。

GroupSOD/kU·g-1ProGSH?Px/kU·g-1ProMDA/μmol·g-1ProControl6．37±1．7656．99±20．803．71±1．64Danshen6．76±1．7054．84±20．163．23±1．27Cisplatin3．51±2．13?30．78±13．79?7．67±2．10??Danshen+Cisplatin5．89±2．8353．15±17．87#4．63±2．07##

*P<0.05,**P<0.01vscontrol;#P<0.05,##P<0.01vscisplatin

3.4 HO-1蛋白表達 丹參保護組HO-1蛋白含量高于順鉑組，差異具有統計學意義(P<0.05)。同時，與對照組相比，丹參組小鼠肝組織HO-1蛋白表達明顯上調(P<0.05)。

4 討論

本研究發現小鼠單次腹腔注射順鉑20 mg·kg-1引起血清轉氨酶升高，抗氧化物耗竭，脂質過氧化物增加，與文獻報道一致[4]。首次證實丹參能拮抗順鉑所致肝臟氧化損傷，發揮防御作用。HO-1是血紅素代謝的限速酶，上調HO-1的表達能防治多種藥物所致肝組織病理損傷[5]。研究發現丹參能上調HO-1表達，發揮肝保護作用。由于丹參兼具抗腫瘤活性，因此，丹參與順鉑合并用藥可能發揮減毒增效的獨特優勢。

(致謝：本實驗在中南大學藥學院和湘雅市第二醫院藥學部實驗室進行，在此對參與本試驗研究和給予幫助的人員表示衷心感謝。)

[1] 廖英俊, 湯 浩,金亞平.抗癌藥順鉑對小鼠的耳、腎和肝毒性及其機制的研究[J].中國藥理學通報,2004, 20(1):82-5.[1] Liao Y J,Tang H,Jin Y P.Study of toxic effects on hearing,kidney and liver of mice induced by anticancer agent of cisplatin and their mechanisms[J].ChinPharmacolBull,2004,20(1): 82-5.

[2] Dkhil M A, Al-Quraishy S, Aref A M, et al. The potential role of Azadirachta indica treatment on cisplatin-induced hepatotoxicity and oxidative stress in female rats[J].OxidMedCellLongev, 2013, 2013：741817.

[3] 陳俞材, 方蓮花, 杜冠華. 丹參水溶性化合物抗心肌缺血作用的研究進展[J].中國藥理學通報, 2015, 31(2): 162-5.

[3] Chen Y C, Fang L H, Du G H. Research advances in protective effects of water soluble compounds in Salvia miltiorrhiza against myocardial ischemia[J].ChinPharmacolBull, 2015,31(2):162-5.

[4] Palipoch S, Punsawad C, Koomhin P, et al. Hepatoprotective effect of curcumin and alpha-tocopherol against cisplatin-induced oxidative stress[J].BMCComplementAlternMed, 2014,14: 111.

[5] 王陽陽, 于惠玲, 李田陽, 等. HO-1介導芒果苷對大鼠肝臟缺血/再灌注損傷的保護作用[J]. 中國藥理學通報, 2015, 31(5):736-7.

[5] Wang Y Y, Yu H L, Li T Y, et al. Protective effect of HO-1 mediated mangiferin on liver ischemia /reperfusion injury in rats[J].ChinPharmacolBull, 2015,31(5): 736-7.

Preventive effects of Danshen on cisplatin-induced hepatotoxicity

CAO Si-si1,2,3, GONG Shuang1, Yan Miao2,3, ZHANG Bi-kui2,3

(1.SchoolofPharmaceuticalScience; 2.DeptofPharmacy,theSecondXiangyaHospital; 3.InstituteofClinicalPharmacy,CentralSouthUniversity,Changsha410011,China)

Danshen; cisplatin; hepatotoxicity; mice; antioxidant; HO-1

時間：2016-12-27 16:13

http://www.cnki.net/kcms/detail/34.1086.R.20161227.1613.050.html

2016-08-19,

2016-11-19

國家自然科學基金資助項目(No 81202985,81573686)

曹思思(1990-)，女，碩士，研究方向：臨床藥學，E-mail:1169233155@qq.com; 張華奎(1968-)，男，博士，教授，研究方向：臨床藥學，通訊作者，E-mail:zhbk68@163.com

10.3969/j.issn.1001-1978.2017.01.025

A

1001-1978(2017)01-0144-02

R-332；R282.71；R322.47；R575.1；R979.19