Leptin及OB-R在宮頸癌中的表達及與臨床病理參數的關系

聶 明，邢 靜，畢彥芬，林凡忠

(1.山東省濟寧市任城區第一婦幼保健院病理科，山東 濟寧 272000；2.山東省濟寧市市直機關醫院，山東 濟寧 272019；3. 濟寧市婦女兒童醫院，山東 濟寧 272125；4.山東省濟寧市第一人民醫院病理科，山東 濟寧272011)

Leptin及OB-R在宮頸癌中的表達及與臨床病理參數的關系

聶 明1，邢 靜2，畢彥芬3，林凡忠4

(1.山東省濟寧市任城區第一婦幼保健院病理科，山東 濟寧 272000；2.山東省濟寧市市直機關醫院，山東 濟寧 272019；3. 濟寧市婦女兒童醫院，山東 濟寧 272125；4.山東省濟寧市第一人民醫院病理科，山東 濟寧272011)

目的 探討瘦素(Leptin)及其受體(OB-R)在宮頸癌中的表達及與臨床病理參數的關系。方法 選取2014年1月至2015年12月濟寧市任城區第一婦幼保健院病理科宮頸癌石蠟包埋組織31例，慢性宮頸炎組織標本22例和宮頸上皮內瘤樣病變20例，采用免疫組織化學技術檢測各組織Leptin及OB-R表達。結果 宮頸癌組織中Leptin及OB-R陽性表達率為80.65%和77.42%，明顯高于慢性宮頸炎和宮頸上皮內瘤樣病變，差異比較有統計學意義(χ2值分別為26.36、18.23、20.95、16.19，均P<0.05)；慢性宮頸炎和宮頸上皮內瘤樣病變Leptin及OB-R陽性表達差異無統計學意義(χ2值分別為0.32、0.02，均P>0.05)；Leptin表達與宮頸癌浸潤深度和分化程度有關(χ2值分別為10.78、4.08，均P<0.05)，OB-R表達與宮頸癌浸潤深度有關(χ2=5.28，P<0.05)。結論 Leptin及OB-R可能在宮頸癌發生發展中起著促進作用，值得進一步研究。

瘦素；瘦素受體；宮頸癌；免疫組織化學

宮頸癌是臨床上發病率最高的婦科生殖系統惡性腫瘤，雖然細胞學、宮頸高危型人乳頭瘤病毒等可以提高早期診斷水平，但仍然存在15%～25%的宮頸癌患者臨床確診時已處于中晚期，遠期預后不佳[1-2]。 對于宮頸癌發生發展過程中相關生物學機制的探討，可以為改善患者的遠期生存預后提供理論參考。瘦素(Leptin)及其受體(Leptin receptor，OB-R)可以通過影響細胞內多種信號通路如PI3K/AKT、NOTCH/CYC等，抑制細胞凋亡、增強細胞增殖活性[3-4]。已經證實Leptin及OB-R在卵巢癌、乳腺癌等惡性腫瘤中異常表達，并與疾病的生存預后具有一定的關系[5-6]，但在宮頸癌中的研究不足。本研究通過選取2014年1月至2015年山東省濟寧市任城區第一婦幼保健院收治的宮頸癌患者術后標本，采用免疫組化分析，探討Leptin及OB-R在宮頸癌中的陽性率表達水平以及并初步探討了其與患者臨床病理特征間的關系。

1資料與方法

1.1一般資料

選取2014年1月至2015年12月在濟寧市任城區第一婦幼保健院病理科保存的宮頸癌石蠟包埋組織31例，年齡46～61歲，平均年齡51.46±6.68歲。納入標準：①經病理學證實；②臨床資料保存完整；③術前均未接受放療、化療及免疫治療；④患者知情同意并簽署同意書。排除標準：臨床資料欠缺。

同時選取慢性宮頸炎組織標本22例，年齡44～63歲，平均年齡52.20±5.87歲；宮頸上皮內瘤樣病變20例，年齡43～66歲，平均50.73±6.02歲,作為對照組。

1.2實驗方法

采用石蠟切片脫蠟至水，切片厚度3mm，3%雙氧水室溫孵育 5min，采用去離子水沖洗3次，每次3min，采用濃度為10% 牛奶蛋白(1g蛋白加入100mL純水)封閉，室溫孵育 5min，加入Leptin及OB-R抗體(鼠來源，南京碧云天生物科技有限公司)，37℃ 孵育2h，磷酸緩沖鹽溶液(phosphate buffer saline,PBS)沖洗3次，每次5min，滴加辣根過氧化物酶標記的二抗(兔來源，購自羅氏檢測公司)，37 ℃ 孵育30min，PBS沖洗3次，每次5min，加入 堿性磷酸酯酶顯色試劑盒(Alkaline Phosphatase Color Development Kit，BCIP/NBT)色劑顯色5min，復染，脫水，透明，封片，鏡下觀察。Stemi 508OLIPICS電子顯微鏡顯微鏡購自上海精密儀器有限公司，配套試劑購自南京泰康生物科技有限公司。

1.3結果判斷

Leptin、OB-R陽性細胞為細胞質和細胞核出現棕黃色或黃色顆粒細胞，>50%細胞著棕黃色或黃色、<50%細胞著棕黃色為陽性；<50%細胞著黃色或淡黃色或不著色為陰性。

1.4統計學方法

數據整理分析采用SPSS 19.0統計軟件，計數資料比較使用卡方檢驗，以P<0.05表示差異具有統計學意義。

2結果

2.1免疫組織化學染色

慢性宮頸炎、宮頸上皮內瘤樣病變組織Leptin及OB-R陽性表達分布在鱗狀上皮層，染色呈黃色或淡黃色；宮頸癌組織中Leptin及OB-R陽性表達位于腫瘤細胞胞質、胞核和部分癌巢周圍血管的內皮和基層，見圖1。

2.2 瘦素及OB-R在不同宮頸組織中表達

宮頸癌組織中Leptin及OB-R陽性表達率為80.65%和77.42%，明顯高于慢性宮頸炎和宮頸上皮內瘤樣病變，差異比較有統計學意義(χ2值分別為26.36、18.23、20.95、16.19，均P<0.05)；慢性宮頸炎和宮頸上皮內瘤樣病變Leptin及OB-R陽性表達差異無統計學意義(χ2值分別為0.32、0.02，均P>0.05)，見表1。

2.3 瘦素及OB-R表達與宮頸癌臨床病理參數關系

Leptin表達與宮頸癌浸潤深度和分化程度有關(均P<0.05)，OB-R表達與宮頸癌浸潤深度有關(P<0.05)，見表2。

表1 Leptin及OB-R在不同宮頸組織中表達[n(%)]

Table 1 Expressions of Leptin and OB-R in different cervical tissues [n(%)]

表2 Leptin及OB-R表達與宮頸癌臨床病理參數關系[n(%)]

3討論

3.1宮頸癌背景分析

宮頸癌是我國現階段發病率和死亡率較高的生殖系統疾病，相關研究顯示在我國農村地區，宮頸癌的發病率可達0.05%以上，特別是在年齡介于35～55歲的人群中，發病率更高[7]。宮頸癌患者容易早期發生髂內淋巴結、閉孔淋巴結等的轉移，宮旁組織的浸潤程度較高。患者的遠期生存指標較差，無瘤生存期及疾病的無進展生存期較短，中位生存時間不足32個月[8-9]。迄今為止臨床上仍然缺乏有效的宮頸癌患者遠期評估指標，宮頸HPV或者細胞學檢查雖然可以提高早期診斷水平，但預測疾病遠期預后的靈敏度不足35%，具有明顯的局限性[10]。對于宮頸癌組織中Leptin及其受體的研究，可以為食管癌的綜合性治療提供新的生物學靶向治療靶點，且可以為患者的遠期預后提供生存評估指標。

3.2瘦素與宮頸癌發病關系研究

Leptin主要存在于脂肪細胞中，同時在上皮細胞、間質細胞、巨噬細胞等中也存在少量的表達，Leptin結構上包含了4個重復的脯氨酸結合區域，其羧基末端含有多個磷酸化的巰基結構，可以通過結合靶細胞膜上的糖蛋白受體OB-R，調節細胞內的第二信使如鈣離子、環磷酸腺苷等的含量。Leptin結合配體OB-R后，可以上調PI3K/AKT、STATA、JAK等信號通路下游效應分子，促進細胞增殖、誘導不良細胞分化結局[11-13]。在卵巢癌、乳腺癌等組織中，Leptin的表達可平均上升25%以上，并與患者的細胞分化、臨床分期等病理類型密切相關。本研究的創新性在于探討了慢性宮頸炎、宮頸上皮內瘤變及宮頸癌這一連續性病理變化過程中的Leptin及其受體的表達，從而更有利于揭示Leptin在宮頸癌發病過程中的作用。

本研究采用免疫組化分析了Leptin及OB-R在宮頸病變組織中的異常表達，染色分析可以發現Leptin及OB-R主要表達于宮頸鱗狀上皮層，且在細胞膜、細胞質等部位的富集較為明顯，Leptin及OB-R可能主要通過影響細胞內的相關效應分子的含量，從而影響到細胞增殖和分化。陽性率分析可見Leptin及OB-R在宮頸癌中的存在明顯的高表達表現，陽性率可達80%左右，表明Leptin及其受體可能在宮頸癌的發生發展過程中發揮了重要的作用。Leptin及OB-R的結合，在抑制細胞凋亡蛋白(B-apoptosis protein BAX)、B淋巴細胞瘤-2基因(B-cell lymphoma-2，BCL-2)等表達的同時，可以促進腫瘤血管內皮生長因子的表達，促進新生血管形成，促進腫瘤病變的發展。

Yuan等[14]研究者通過回顧性分析了46例宮頸鱗狀細胞癌術后標本的免疫組化資料，發現Leptin的平均陽性表達率接近75%，這與本研究的結論較為一致，且認為Leptin在宮頸癌組織中的表達明顯強于宮旁組織。但本研究并未發現慢性宮頸炎組織及宮頸鱗狀上皮內瘤變組織中的Leptin表達差異，這與Yuan等的研究結論并不完全一致，Yuan等認為鱗狀上皮內瘤變的患者，其Leptin陽性率可較宮頸炎組上升15%左右，研究結論的差異考慮與樣本量的不足、檢測方法的不統一及上皮內瘤變的級別差異等有關。本研究總采用的浸潤深度的分組根據Yuan等[14]研究者的臨床薈萃分析結果提示進行，更能夠提供宮頸癌的臨床進展情況，臨床病理特征分析可以發現，Leptin表達與宮頸癌浸潤深度和分化程度有關，OB-R表達與宮頸癌浸潤深度有關，Leptin及其受體的激活，可以促進表皮生長因子受體、絡氨酸激酶受體等的表達，促進宮頸癌組織的浸潤，導致細胞分化不良。Leptin及其受體與宮頸癌的臨床特征的關系，提示其在疾病的預后或者臨床轉歸的評價中可能發揮了重要作用。

綜上所述，Leptin及OB-R在宮頸癌組織中異常高表達，并與宮頸癌患者的疾病浸潤深度、細胞分化程度等密切相關，臨床上可以通過隨訪宮頸癌患者術后的免疫組化結果，進而評估患者的遠期預后。本研究的局限性在于對Leptin及OB-R的靈敏度、特異度等診斷學指標的分析不足，Leptin預測遠期生存風險的價值仍然需要深入探討。

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[專業責任編輯：張冠軍]

Expressions of Leptin and OB-R in cervical carcinoma and their relationship with clinical pathological parameters

NIE Ming1, XING Jing2, BI Yan-fen3, LIN Fan-zhong4

(1.PathologyDepartment,FirstMaternalandChildHealthCareHospitalofRenchengDistrictinJiningCity,ShandongJining272000,China; 2.JiningMunicipalHospitalofShandongProvince,ShandongJining272019,China;3.JingningMaternalandChildren’sHospital,ShandongJining272125,China;4.PathologyDepartment,FirstPeople’sHospitalofJiningCity,ShandongJining272011,China)

Objective To investigate the expression of leptin (Leptin) and its receptor (OB-R) in cervical carcinoma and its relationship with clinical pathological parameters. Methods Altogether 31 specimens of paraffin embedded tissue of cervical cancer, 22 specimens of chronic cervicitis tissue and 20 specimens of cervical intraepithelial neoplasia in pathology department of First Maternal and Child Health Care Hospital of Rencheng District in Jining City from January 2014 to December 2015 were selected. Expression of Leptin and OB-R in different tissues was detected by immunohistochemistry technique. Results Positive expression rate of Leptin and OB-R in cervical cancer tissue was 80.65% and 77.42%, which was significantly higher than that in chronic cervicitis and CIN, and the differences were statistically significant (χ2value was 26.36, 18.23, 20.95 and 16.19, respectively, allP<0.05). There was no significant difference in expression of Leptin and OB-R between chronic cervicitis and CIN (χ2value was 0.32 and 0.02, respectively, bothP>0.05). Expression of Leptin was correlated with the invasive depth and differentiation degree of cervical cancer (χ2value was 10.78 and 4.08, respectively, bothP<0.05), and expression of OB-R was correlated with invasion depth of cervical cancer (χ2=5.28,P<0.05). Conclusion Leptin and OB-R may play a promoting role in development of cervical cancer, and it is worth further study.

Leptin; Leptin receptor (OB-R); cervical cancer; immunohistochemistry

2016-08-23

聶 明(1977-)，男，主治醫師，主要從事瘦素受體在宮頸癌中表達的研究。

林凡忠，副主任醫師。

10.3969/j.issn.1673-5293.2017.01.019

R711.74

A

1673-5293(2017)01-0054-03