健脾顆粒的質量標準研究

李佳杏 孫 蓉

昆明中藥廠有限公司，云南 昆明 650228

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健脾顆粒的質量標準研究

李佳杏 孫 蓉*

昆明中藥廠有限公司，云南 昆明 650228

目的：建立控制健脾顆粒的質量標準。方法:采用薄層色譜法對健脾顆粒中白術、橙皮苷進行鑒別；用高效液相色譜法測定制劑中橙皮苷的含量，采用十八烷基硅烷鍵合硅膠柱(Agilent XDB C18柱；4.6mm×250mm，5μm)，流動相為乙腈-0.2%磷酸溶液(19∶81)，流速為1.0mL/min，柱溫為30℃，檢測波長：283nm。結果：定性鑒別方法能檢出白術、橙皮苷，且薄層色譜中陰性無干擾，專屬性強；橙皮苷的線性范圍為0.131～4.192mg，平均加樣回收率為100.26%，RSD為2.21%。結論：該方法簡便、準確，重現性好，可用作健脾顆粒的質量控制。

健脾顆粒；橙皮苷；白術； HPLC

健脾顆粒的處方來源于部頒中藥成方制劑第二冊[1](標準號：WS3-B-0381-90)，由黨參、炒白術、陳皮等6味藥組成，具有健脾開胃的功效，臨床用于脾胃虛弱，脘腹脹滿，食少便溏。原標準中無含量測定項和薄層色譜鑒別項，為了能全面地控制其藥品質量，本文通過對處方中的組分進行薄層色譜鑒別試驗研究，確定白術、橙皮苷的薄層色譜鑒別方法。同時對陳皮、枳實中橙皮苷進行了含量測定試驗。通過多次反復試驗，確定該方法簡捷，效果好，可用于本品的質量控制方法。

1 儀器與材料

1.1 儀器 B3200S-T超聲機(上海必能信超聲)；高效液相色譜儀(美國Agilent 1100液相色譜儀系統)。1.2 材料 橙皮苷對照品(批號：110712-201010)、白術對照藥材(批號：120925-201109)等均購自中國藥品生物制品檢定所；健脾顆粒(昆明中藥廠有限公司提供，規格：5g/袋)；高效進樣使用的乙腈、甲醇為色譜純；其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 薄層色譜鑒別

2.1.1 白術的薄層色譜鑒別 取本品10g，研細，加40mL乙酸乙酯和5mL水，振搖2min，傾取上清液，殘渣續加乙酸乙酯30mL，振搖1min，合并上清液，每次分別用20mL 3%碳酸鈉溶液振搖提取3次，取堿水液，用濃鹽酸調pH值至2～3，每次用20mL乙酸乙酯振搖提取3次，分取乙酸乙酯液，用水30mL洗滌，分取乙酸乙酯液，蒸至近干，加甲醇0.5mL制成供試品溶液[2]。另外取0.5g白術對照藥材，加30mL水置150mL燒杯中煮沸，保持微沸30 min，濾過后保留殘渣繼續加水20mL煮沸，保持微沸20min，用脫脂棉濾過煎液，合并剩余的煎液并濃縮至約1mL，放冷，加乙酸乙酯15mL混合，“自振搖2min”起，同法制成對照藥材溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》2015年版四部通則0502)試驗[3]，吸取上述供試品溶液15～20μL，白術對照藥材溶液10μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以環己烷-乙酸乙酯(7∶3)為展開劑，展開，取出，晾干。噴以10%硫酸乙醇溶液，于105℃加熱3～5 min，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。結果見圖1。

2.1.2 橙皮苷的鑒別 取適量本品研細，稱取2g，加20mL甲醇，超聲30min，用定性濾紙濾過，將濾液蒸至近干，加2mL甲醇溶解制成供試品溶液。另取橙皮苷對照品適量，加甲醇制成飽和溶液，作為對照品溶液[2]。照薄層色譜法(《中國藥典》2015年版四部通則0502)試驗[3]，吸取供試品溶液2～4μL，對照品溶液4μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-甲醇-水(100∶17∶13)為展開劑，展開至約3cm，取出，晾干，再以甲苯-乙酸乙酯-甲酸-水(20∶10∶1∶1)的上層溶液為展開劑，展至8cm，取出，晾干，噴以三氯化鋁試液，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。結果見圖2。

2.2 含量測定

2.2.1 色譜條件 色譜柱：采用十八烷基硅烷鍵合硅膠柱(Agilent ZORBAX Eclipse XDB-C18柱)，流動相為乙腈-0.2%磷酸溶液(19∶81)，流速為1.0mL/min，柱溫為30℃，檢測波長：283nm。按橙皮苷峰的理論塔板數計算應不應低于2000。見圖3。

2.2.2 對照品溶液的制備 精密稱取橙皮苷對照品適量，加甲醇溶解，制成每1mL含524μg的溶液，即得[2]。

2.2.3 供試品溶液的制備 取本品適量，研細，取2g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70%乙醇25mL，密塞，稱定重量，超聲處理(功率160W，頻率50kHz)30min，放冷，再稱定重量，用70%乙醇補足減失的重量，搖勻，靜置，取上清液，濾過，取續濾液，即得。

2.2.4 陰性對照溶液的制備 取處方中除陳皮、枳實外的其他藥材，按處方劑量及制法和工藝要求制備缺陳皮、枳實的空白樣品，照含量測定項下供試品溶液的制備方法制成陰性對照樣品溶液，同法進行測定，結果在與對照品橙皮苷相同的保留時間位置，無其他干擾峰出現，表明除陳皮、枳實外的其他藥材和輔料對橙皮苷測定無干擾。見圖3。

2.2.5 線性關系考察 精密取上述對照品溶液分別稀釋成13.1、26.2、52.4、104.8、209.6、419.2g/mL的對照品溶液，注入高效液相色譜儀，按上述色譜條件測定峰面積；以峰面積積分值為縱坐標，以橙皮苷進樣量(mg)為橫坐標作線性回歸，繪制標準曲線，得回歸方程：Y=1471.42326X-10.75587(r=0.99974)，結果表明，橙皮苷在0.131～4.192mg之間呈良好線性關系。

2.2.6 精密度試驗 按照測定方法，制備同一橙皮苷對照品溶液，精密吸取10μL重復進樣8次，測定其峰面積值。相對標準偏差(RSD)為0.03%。

2.2.7 穩定性試驗 取141106批同一供試品溶液，設定分別在0、2、4、6、8、10h進樣10μL，按以上色譜條件進行測定。測得其峰面積值，RSD=0.252%，結果表明，在10h內供試品溶液中的橙皮苷穩定。

2.2.8 重復性試驗 取批號為141106(5g/袋，相當于飲片4g)的健脾顆粒，供試品制備方法分別制備9份供試品溶液，測定橙皮苷含量，平均含量為1.1133mg/g，RSD為1.48%。

2.2.9 加樣回收率試驗 取已知含量的健脾顆粒樣品(批號：141106，橙皮苷含量：1.1133mg/g)，添加橙皮苷對照品，按正文中含量測定方法測定橙皮苷含量，計算回收率，表明法有良好的回收率。結果見表1。

表1 加樣回收率試驗結果

2.2.10 樣品測定 取6批健脾顆粒樣品分別按上述含量測定方法測定橙皮苷含量。測定結果見表2。

表2 樣品含量測定結果

3 討論

研究以黨參對照藥材作為對照，參照中國藥典一部黨參項下相關內容進行本品TLC試驗。試驗結果：斑點模糊，色譜通道顏色較深，特征斑點不易檢視。又多次試驗其他提取方法和展開劑，結果：陰性有干擾。

在山楂的薄層鑒別中，參照藥典方法，以山楂對照藥材作對照，試用過多種提取方法和展開劑，進行薄層色譜試驗研究。結果：供試品色譜中均無明顯對應斑點。

在麥芽薄層鑒別，以麥芽對照藥材作為對照，參照《中國藥典》一部麥芽項下相關方法進行本品TLC試驗。試驗結果：供試品色譜在與麥芽對照藥材的色譜相對應的位置上顯相同顏色熒光斑點，陰性供試品無相對應的斑點，但供試品色譜中對應斑點不明顯，增加取樣量后，斑點無明顯改善，故此方法未采用。

[1] 國家藥典委員會.衛生部藥品標準中藥成方制劑(第九冊).WS3-B-0381-90.

[2] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[M].北京：中國醫藥科技出版社，2010.

[3] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(四部)[M].北京：中國醫藥科技出版社，2015.

(編輯：穆麗華)

20416-10-18

李佳杏(1990-)，女，助理工程師，主要從事中藥質量控制研究。E-mail：2421094484@qq.com

孫蓉(1968-)，女，高級工程師，主要從事中藥工藝及質量控制研究。E-mail：534223032@qq.com

R914.1

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1007-8517(2017)01-0023-03