肌球蛋白輕鏈磷酸化在腹瀉型IBS大鼠腸黏膜屏障功能障礙中的作用*

張 夢(mèng) 陳超英 呂 賓#

浙江中醫(yī)藥大學(xué)第一臨床醫(yī)學(xué)院1(310053) 浙江中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院消化科2

肌球蛋白輕鏈磷酸化在腹瀉型IBS大鼠腸黏膜屏障功能障礙中的作用*

張 夢(mèng)1陳超英2呂 賓2#

浙江中醫(yī)藥大學(xué)第一臨床醫(yī)學(xué)院1(310053) 浙江中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院消化科2

背景：肌球蛋白輕鏈(MLC)是調(diào)控細(xì)胞間緊密連接和腸道通透性的啟動(dòng)因子，磷酸化MLC(pMLC)可引起緊密連接相關(guān)蛋白重新分布，破壞緊密連接結(jié)構(gòu)和完整性，最終引起腸黏膜屏障功能障礙。目的：探討MLC磷酸化在腹瀉型IBS(IBS-D)大鼠腸黏膜屏障功能障礙中的作用。方法：將8只Sprague-Dawley孕鼠隨機(jī)分為模型組和對(duì)照組，采用母嬰分離法構(gòu)建IBS-D大鼠模型。記錄大鼠造模成功后1 h內(nèi)糞便性狀和顆粒數(shù)，采用腹壁回撤反射(AWR)評(píng)分評(píng)估大鼠內(nèi)臟敏感性，免疫熒光法觀察結(jié)腸組織纖維狀肌動(dòng)蛋白(F-actin)、細(xì)胞緊密連接相關(guān)蛋白ZO-1、claudin-1的分布，蛋白質(zhì)印跡法檢測(cè)腸黏膜MLC、pMLC、F-actin、ZO-1、claudin-1蛋白的表達(dá)，透射電鏡觀察細(xì)胞間緊密連接。結(jié)果：與對(duì)照組相比，模型組內(nèi)臟敏感性顯著升高；免疫熒光法顯示claudin-1熒光強(qiáng)度減弱，結(jié)構(gòu)紊亂，重新分布，F(xiàn)-actin和ZO-1結(jié)構(gòu)模糊；蛋白質(zhì)印跡結(jié)果顯示pMLC/MLC比值和pMLC表達(dá)明顯升高，claudin-1表達(dá)明顯降低，MLC、F-actin和ZO-1表達(dá)無(wú)明顯差異；透射電鏡顯示細(xì)胞緊密連接破壞，細(xì)胞間隙擴(kuò)大。結(jié)論：MLC磷酸化水平升高介導(dǎo)細(xì)胞骨架蛋白F-actin重組，引起細(xì)胞緊密連接蛋白結(jié)構(gòu)和功能的改變，細(xì)胞間隙增加，導(dǎo)致腸黏膜屏障功能障礙，在IBS-D的發(fā)病中發(fā)揮重要作用。

肌球蛋白輕鏈； 纖維狀肌動(dòng)蛋白；……