人臍帶血間充質干細胞條件培養基在白血病患兒口腔黏膜炎中的療效觀察

門倩倩 曹秀艷 盧偉 吳南海

(解放軍海軍總醫院，北京 100048)

人臍帶血間充質干細胞條件培養基在白血病患兒口腔黏膜炎中的療效觀察

門倩倩 曹秀艷 盧偉 吳南海

(解放軍海軍總醫院，北京 100048)

目的 探討人臍帶血間充質干細胞條件培養基在白血病患兒口腔黏膜炎中的臨床療效。方法 2015年1-12月收治的白血病患兒312例，共發生口腔黏膜炎124例，隨機分為兩組，每組62例。對照組采用生理鹽水漱口后，在潰瘍面涂抹外用重組人粒細胞巨噬細胞刺激因子凝膠(金扶寧rhGM-CSF)；觀察組采用生理鹽水漱口后，在潰瘍面涂抹人臍帶血間充質干細胞培養基(hUCB-MSC-CM)。觀察兩組患兒口腔創面愈合時間及愈合率。結果 觀察組口腔創面愈合時間5～14 d，愈合率91.9%；對照組口腔創面愈合時間5～14 d，愈合率67.7%，觀察組明顯優于對照組(P<0.05)。 結論 人臍帶血間充質干細胞培養基在白血病患兒口腔黏膜炎中療效顯著。

人臍帶血間充質干細胞條件培養基; 白血病患兒; 口腔黏膜炎; 護理

Human umbilical cord blood mesenchymal stem cell conditioned medium; Leukemia in children; Oral mucositis; Nursing

白血病是造血干細胞出現惡性克隆性疾病，骨髓中出現大量的原始細胞和幼稚細胞，機體正常的造血功能受到抑制。化學藥物治療是惡性腫瘤的重要治療手段[1]，而口腔黏膜炎(Oral mucositis,OM)是白血病患兒化療中的常見并發癥之一。隨著化療方案的不斷發展，大劑量化療藥物及聯合用藥的應用，化療患兒并發口腔炎的發生率達66%，更高可達88%[2-3]。為了使患兒在化療過程中，免受口腔黏膜炎所帶來的痛苦，我們選用人臍帶血間充質干細胞培養基(hUCB-MSC-CM)預防和治療白血病患兒口腔黏膜炎，療效顯著。現報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2015年1-12月我科使用大劑量化療后發生口腔黏膜炎的白血病患兒124例，男74例，女50例，年齡6個月至13歲，中位年齡4.75歲。將患兒隨機分為對照組和觀察組，每組62例。對照組患兒在口腔潰瘍面涂抹外用重組人粒細胞刺激因子凝膠(rhGM-CSF),觀察組患兒涂抹人臍帶血間充質干細胞條件培養其(hUCB-MSC-CM)。其中，急性淋巴細胞白血病53例，急性非淋巴細胞白血病71例，兩組患兒均處于粒缺期，中性粒細胞絕對值0～0.5×109/L，根據口腔黏膜受損情況，將口腔黏膜炎分0～Ⅳ級[4]。見表1。兩組患兒性別、年齡及口腔黏膜炎程度比較差異無統計學意義(P>0.05) ，具有可比性。

表1 124例患兒口腔黏膜炎分級

1.2 方法

1.2.1 hUCB-MSC-CM獲取 人臍帶血(Human umbilical cord blood,hUCB)間充質干細胞(Mesenchymal stem cells,MSCS)條件培養基(Conditioned medium,CM)的制備方法：在無菌條件下收集足月健康新生兒的臍帶血，經肝素抗凝、離心后分離、培養、傳代hUCB-MSCS、用倒置顯微鏡觀察不同時期細胞的生長情況和形態特征，并用酶標儀監測細胞增殖情況，待細胞融合達80%時更換培養基，在繼續培養24 h后收集培養上清液即為人臍帶間充質干細胞條件培養基(hUCB-MSC-CM)。hUCB-MSC-CM由我們兒科實驗室自行研制，臍帶血從廢棄的臍帶中獲得，并經產婦同意，簽署同意書。實驗方案經過醫院醫學倫理委員會批準，不涉及倫理問題。

1.2.2 對照組 每日生理鹽水漱口，不能漱口患兒或較小患兒給予無菌棉球口腔護理后，在潰瘍面涂抹外用重組人粒細胞刺激因子凝膠(rhGM-CSF100 μg/cm2),3次/d。

1.2.3 觀察組 每日生理鹽水漱口，不能漱口患兒或較小患兒給予無菌棉球口腔護理后，用無菌棉球或無菌棉簽沾取hUCB-MSC-CM，覆蓋潰瘍面,3次/d，方法同對照組。對于有融合性潰瘍，能含漱的患兒，采用hUCB-MSC-CM，3～5 mL含漱3～5 min以上的時間，3次/d。告知患兒不要咽下，30 min內不要進食，2周為一個療程。

1.3 評價方法 觀察口腔黏膜愈合時間；2周后觀察口腔黏膜的情況：有效：潰瘍完全愈合或潰瘍面積較前減小，有新鮮肉芽組織增生。無效：破潰無明顯變化。

2 結果

兩組患兒口腔黏膜創面愈合情況比較 見表2和表3。

表2 兩組患兒口腔黏膜創面愈合時間對比 例

P<0.05

表3 兩組患兒治療效果比較 例

3 討論

兒童白血病是小兒惡性腫瘤最常見的一種,化療、放療是急性白血病治療的主要措施，但因化療藥物、免疫制劑、激素的應用可使粒細胞持續而嚴重缺乏，機體抵抗力明顯下降，使感染成為白血病患兒死亡的重要原因之一[5]。而口腔感染是白血病患兒化療后最常見的并發癥[6]，采取有預見性的護理，對提高患兒的生活質量有重要意義。

目前，國內臨床上常選用外用重組人粒細胞刺激因子凝膠(rhGM-CSF)[7]，主要成分為重組人粒細胞巨噬細胞刺激因子，rhGM-CSF有效啟動創面愈合，促進創面壞死組織脫落；具有保濕浸潤作用，使創面在濕潤環境下有利于上皮細胞及其修復細胞的增生，有效促進創面的愈合；具有良好的安全性和有效性。

hUCB-MSC-CM中含有血管內皮生長因子(VEGF)，成纖維細胞生長因子(FGF)、血小板源生長因子(PDGF)、轉化生長因子(TGF-β)、肝細胞生長因子(HGF)等。這些生長因子可以參與多種細胞反應。如VEGF可以形成功能性血管，有效促進血管再生，促進創傷組織的修復[8]；TGF-β在組織的創傷修復中，一方面發揮炎癥的介質作用，減少炎癥細胞的遷移和促進炎癥反應的消退；另一方面，可促進細胞外基質如膠原蛋白、纖粘連蛋白的表達，促進細胞形態發生、增殖和分化，誘導血管形成。Hirshberg等[9]研究發現，TGF-β對于黏膜損傷早期治療效果更加顯著；FGF可調節細胞代謝和促進血管生成。商振球等[10]認為FGF可以為創面的愈合提供蛋白等營養，使上皮細胞加快生長，加快創面愈合；PDGF可促進炎癥反應、肉芽組織形成、再上皮化、基質形成與重塑，Cheng等[11]實驗表明PDGF可促進創面的愈合，明顯提高愈合質量，參與血管的生成與重構；HGF、VEGF具有抗血管內皮、腎小管及肝細胞凋亡的作用，而HGF除了抗凋亡外，還能促進有絲分裂并通過抑制TGF-β表達起到抗纖維化作用；hUCB-MSC-CM中存在MSCS合成和分泌包括鈉尿肽、降鈣素基因相關肽、內皮素等在內的多種調節肽，參與細胞存活與保護、心血管調節和組織修復[12]。hUCB-MSC-CM原材料從廢棄的臍帶中獲取，并由產婦同意，簽署同意書，也是臍帶血間充質干細胞培養中的“副產品”，可以在體外大量的制備，不屬于國家規定干細胞三類技術范疇內,國家衛計委2015年發布的《干細胞臨床研究管理辦法》中細胞培養條件培養基不屬于其范疇，具有可行性，實驗方案經過醫院醫學倫理委員會批準，不涉及倫理問題。在大劑量化療導致口腔黏膜炎的患兒中，療效顯著，使用方法簡單。但機制有待進一步研究，具有較大的臨床應用前景。

綜上所述，化療藥物影響了口腔黏膜上皮細胞的正常代謝和更新，而黏膜的修復取決于該部位黏膜的血液供應及細胞生長繁殖的速度, hUCB-MSC-CM可以提供白血病患兒化療后缺乏的各種細胞因子，為促進潰瘍面愈合提供了更好的條件，因此給予hUCB-MSC-CM護理干預后，療效較外用重組人粒細胞巨噬細胞刺激因子凝膠顯著，縮短了口腔黏膜炎愈合的時間，提高了潰瘍面的愈合率，減輕了患兒的痛苦。

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門倩倩(1986-), 女,山東,本科,主管護師，護士長,從事臨床護理及管理工作

R473.73,R733.7

B

10.16821/j.cnki.hsjx.2017.03.022

2016-10-10)