18種大豆多酚含量組成及抗氧化活性分析

朱怡霖，張海生，楊淑芳，趙鑫帥，薛煥煥

(陜西師范大學 食品工程與營養科學學院，陜西 西安，710119)

18種大豆多酚含量組成及抗氧化活性分析

朱怡霖，張海生*，楊淑芳，趙鑫帥，薛煥煥

(陜西師范大學 食品工程與營養科學學院，陜西 西安，710119)

分析18種大豆品種的總酚含量、多酚的組成及抗氧化能力。以榆林和山西地區的大豆為試材，Folin-Ciocalteau 法測定總酚含量，高效液相色譜法(HPLC)測定多酚組成成分，1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl, DPPH)和鐵還原抗氧化力(ferric reducing-antioxidant power, FRAP)法測定抗氧化能力，相關系數法分析抗氧化能力與多酚含量的相關性。18種大豆品種之間總酚含量存在明顯差異，靖邊黑豆品種含量最高，達到5.07 mg/g，HPLC 鑒定出沒食子酸、原兒茶酚、綠原酸、對羥基苯甲酸、對香豆酸、阿魏酸、咖啡酸、槲皮素和肉桂酸等9種多酚組成成分，其中原兒茶酸、綠原酸和咖啡酸的含量較高，且這些組分含量及總酚含量之間存在差異，DPPH和FRAP抗氧化能力之間也存在明顯差異；大豆的總抗氧化能力與其總酚、原兒茶酸、綠原酸和咖啡酸含量之間呈現極顯著的正相關性(P<0.01)。

大豆；總酚含量；酚類化合物；抗氧化

豆類是中國傳統的藥食兼用的農產品資源之一，不僅含有大量蛋白質、脂肪、氨基酸、微量元素及維生素，而且還含有黃酮類及酚類物質，這2種物質均對自由基有清除能力，是天然的抗氧化食品[1-2]。

近幾年，隨著研究的越來越深入，整本書閱讀，或者說書冊閱讀，在實踐上也開始了探索。2007年，揚州市語文特級教師岳乃紅在所著的《班級讀書會ABC》一書，結合一線教學實踐，總結了一套以“班級讀書會”的形式來進行整本書的閱讀的方式，她提出了以“班級讀書會”的形式來組織“整本書”閱讀教學過程，并在此過程中對學生進行“整本書”閱讀指導的策略。

天然多酚類化合物是植物體內重要的功能性化合物，主要由酚酸、黃酮和單寧類物質組成。酚類化合物具有良好的清除自由基、抗氧化、抑制脂質過氧化等作用，是潛在的高效天然抗氧化劑[3-5]。XU[6]和TAKAHASHI[7]等研究表明，黑豆和黃豆中含有大量的多酚類化合物，而且還具有較高的抗氧化活性。目前，關于大豆多酚的研究僅限于測定其總含量，對其多酚單體的組成及含量鮮見報道[6]。為了清楚的了解大豆種子的多酚構成情況及生理活性，開發出多酚總含量和某單體含量較高、保健作用較強的大豆品種，有必要對其抗氧化活性、單體組成及含量進行分析。

本文采用HPLC 對大豆品種中多酚組成及各單體含量進行分析?？偡拥目寡趸钚酝ㄟ^DPPH(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl，1,1-二苯基-2-三硝基苯肼)自由基清除率能力和總抗氧化能力FRAP(ferric reducing-antioxidant power，鐵還原抗氧化力)進行研究。

1 材料與方法

1.1 試驗材料與試劑

成聯方:書法的專業教學，是非常重視創作能力培養的，也非常重視書法文化知識的傳授。本科和碩士、博士等三個階段的教學重點有所不同。一般來說，本科更重視技法教學，碩士大概技法與研究各占一半，博士基本都是史論研究。大體是這樣，但各院校之間有些差異?；A厚實、歷史悠久的學校做得好一些，年輕的學校、師資欠缺的學校做得差一些。書法界經常開展高校書法教育論壇，討論高等書法教育問題。應該說，整個高校書法教育是向良好的方向發展的。

Airbnb聯合創始人中國區主席Nathan Blecharczyk曾透露，目前中國區的房源已經達到15萬套，自2008年以來已經有1000萬中國游客選擇了Airbnb，中國極有可能在2020年成為Airbnb的最大客源國。隨著用戶習慣養成、服務標準化完善、制度與政策環境優化等，Airbnb在中國區接待的游客數量也在逐年上升，這也對Airbnb的民宿服務有了更高要求。

試劑 ：沒食子酸，原兒茶酸，綠原酸，對羥基苯甲酸，咖啡酸，對香豆酸，阿魏酸，槲皮素，肉桂酸，三吡啶三吖嗪(2,4,6-tripyridyl-s-triazine,TPTZ), 1,1-二苯基-2-三硝基苯肼 (2,2-diphenyl-1-picryl-hydrazyl,DPPH)，水溶性VE(6-hydroxy-2,5,7,8-tetramethylchroman-2-carboxylic acid ,Trolox)均購自Sigma 公司，其他試劑均為國產。

1.2 實驗方法

1.2.1 樣品處理

取各參試大豆粉碎過60目篩，準確稱取1.0 g，加入10mL石油醚振蕩脫脂24 h，用15 mL體積分數80%的甲醇于超聲提取儀40 ℃提取30 min后，3 000 r/min離心15 min后收集上清液，殘渣以同樣方法重復提取2次，合并3次提取液，40 ℃旋轉蒸發后用甲醇定容至10 mL，于4 ℃冰箱中備用。

3.2 大豆種子的抗氧化活性與多酚和黃酮含量的關系

[8]的方法并稍加改進。采用Folin-Ciocalteau 法測定總酚含量，準確移取各提取液0.1 mL，分別加入0.5 mL蒸餾水和0.1 mL Folin-Ciocalteu 試劑，3 min后加入7.5 g/100mL Na2CO3溶液0.3 mL，于漩渦混合器中混合，置于25 ℃水浴避光反應2 h，以0.1 mL蒸餾水代替樣品做空白，在760 nm波長處用酶標儀測定吸光度A。以沒食子酸作標準品代替樣品作標準曲線，得到回歸方程y=0.005 1x+0.003，R2=0.999 3。樣品中的總酚以沒食子酸的含量表示(mg/g)。

1.2.3 總黃酮含量的測定

參考文獻[9]的方法稍加改進。采用Al(NO3)3絡合分光光度法測定總黃酮的含量，準確移取各提取液1 mL,分別加入質量分數5%NaNO2溶液1 mL，搖勻，放置6 min，分別加入質量分數10% Al(NO3)3溶液1 mL，搖勻，放置6 min，再加入質量分數4% NaOH溶液10 mL，用體積分烽80%甲醇定容至25 mL，搖勻，放置15 min，在506 nm波長處用酶標儀測定吸光度A。以蘆丁作標準品代替樣品作標準曲線，得到回歸方程y=0.005 7x+0.004 6，R2=0.996 2。樣品中的總酚以蘆丁的含量表示，單位為mg/g。

1.2.4 酚類化合物的組成

采用HPLC法測定酚類化合物的組成[10]。取上述處理過的各樣品提取液1 mL，0.45 μm濾膜過濾。采用Thermo U-3000 HPLC 系統，Diamonsil C18(2)色譜柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，流動相乙腈(A)和質量分數1%冰乙酸(B)溶液，檢測波長 280 nm，柱溫 30 ℃，流速1.0 mL/min，進樣量 20 μL，HPLC的總運行時間為50 min。梯度洗脫條件：0～5 min，5%～15% A；5～35 min，15%～35% A；35～40 min， 35%～45% A；40～50 min， 45%～5% A。樣品的定性與定量通過與標品的出峰時間和峰面積來確定。

1.2.5 DPPH自由基清除能力的測定

DPPH(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl，1,1-二苯基苦基苯肼)自由基清除率的測定，參照文獻[11]和[12]的方法進行，準確移取適當稀釋的各提取液0.2 mL于試管中，加入0.2 mmol DPPH溶液3.8 mL，再用蒸餾水定容至10 mL，常溫下避光反應30 min后517 nm波長處用ELIASA測定吸光值。以乙醇作對照，DPPH自由基清除能力以mg Trolox標準物質/g豆類干物質表示(mg TE/g)。

1.2.6 總抗氧化能力的測定(FRAP法)

FRAP(ferric reducing-antioxidant power，鐵還原抗氧化力)法測定抗氧化能力，參照文獻[13]和[14]的方法進行，取適當稀釋的各提取液0.01 mL，加入0.36 mL TPTZ工作液(由300 mmol/L pH 3.6的醋酸鹽緩沖液25 mL，10 mmol/L TPTZ溶液2.5 mL，20 mmoL FeCl3溶液2.5 mL 組成)，混合后避光37℃反應10 min，593 nm ELIASA測定吸光值，以Trolox 為標物計算抗氧化活性(FRAP 值，單位mg TE/g)。

1.3 數據統計分析

采用 SPSS 17.0 軟件(SPSSInc, Chicago, IL, USA)進行統計分析，數據結果以平均數±標準差(n=3)表示，采用Duncan多元回歸方法分析0.05水平上均值的顯著性差異。選用Pearson 相關系數分析相關性。

2 結果與分析

2.1 不同大豆種子資源的總酚和總黃酮含量

采用Folin-Ciocalteu 法和硝酸鋁絡合分光光度法分別對18種大豆的總酚含量和總黃酮含量進行測定結果見表1。

注：表1結果表示為3次測定的平均值±標準差；不同的小寫字母表示在0.05顯著性水平上差異顯著。表3同。

18種大豆種子中的總酚和總黃酮存在顯著性的差異。靖邊黑豆的總酚含量最高5.07 mg/g,吉育82品種的總酚含量最低2.07 mg/g。 定邊小黑豆的總黃酮含量最高0.90 mg/g，神木雞腰白、橫山狗牙豆和汾豆79品種的總黃酮含量較低。BAOJUN等[6]研究報道，黑豆的總酚及黃酮含量比黃豆的含量高，本研究結果與其一致。同時本研究結果比李思獲等[14]報道結果所得的多酚含量高，總黃酮含量低，這可能與研究的品種，種植條件和地區，原料預處理方法以及分析條件的不同有關。

2.2 多酚的組成

HPLC共鑒定出沒食子酸、原兒茶酸、綠原酸、對羥基苯甲酸、咖啡酸、對香豆酸、阿魏酸和槲皮素等9種酚類物質，標準品圖和樣品圖分別見圖1和圖2，定量結果見表2。

(二)以危機為契機傳遞中國在南海問題上的利益訴求、政策意圖與維權決心。中國出于周邊外交整體戰略的考慮在南海問題上長期以來相對克制，各聲索國卻肆無忌憚地鞏固非法強占的既得利益。因此，南海問題的最終解決還需要中國進一步明確利益訴求、政策意圖和維權決心。如此，才能真正地將綜合國力的優勢轉化為化解爭端的籌碼。

注：表2結果表示為3次測定的平均值±標準差。

原兒茶酸是18種大豆中主要存在的酚類物質，定邊小黑豆的含量最高1 191.00 μg/g。吉育82的含量最低181.01 μg/g。綠原酸的含量也占了相對較高的比重，沒食子酸和肉桂酸含量較低。表2中所測的9種酚類物質的總量遠低于表1中的總酚含量，這是由于大豆中除了已測的酚類物質外還含有其他較高的酚類物質未被檢出，還有待研究。18種大豆中定邊小黑豆的所檢酚類物質含量最高，吉育82品種的含量最低。黑豆品種的酚類物質含量遠高于黃豆的酚類物質含量，這可能與深色的豆皮含有的色素中的類黃酮物質含量高有關。

2.3 抗氧化能力與多酚、黃酮及酚類化合物的關系分析

如表3所示，參試的18種大豆品種之間的抗氧化能力存在明顯差異。DPPH的抗氧化活性為3.91～28.36 mgTE/g，子洲小黑豆的DPPH抗氧化活性最高。FRAP的抗氧化活性為5.50～55.02 mgTE/g，橫山老黑豆的FRAP抗氧化活性最高，神木雞腰白的DPPH和FRAP抗氧化活性均最低。這表明黑色種皮大豆的抗氧化活性遠高于黃色種皮大豆的抗氧化活性。為進一步研究酚類物質和其抗氧化活性間的關系，進行了總酚、總黃酮及單體酚與其DPPH和FRAP間的相關性分析。分析結果發現，采用DPPH法測定的抗氧化活性與FRAP法顯著呈正相關(R2=0.966；P<0.01, 且總酚、總黃酮與總抗氧化能力相關性也較高，且相關系數達極顯著水平(表4)。原兒茶酸、綠原酸、咖啡酸和肉桂酸與總抗氧化能力相關性也較高， DPPH和FRAP法結果的相關系數都達極顯著水平。

表3 各種大豆品種的抗氧化能力 單位：mg TE/g

表4 各種大豆抗氧化能力與多酚、黃酮及各種酚類化合物之間的關系

注：**，P<0.01。

3 討論

3.1 不同大豆總酚及其組成之間的差異

3.2.3 氣滯便秘證 主癥：大便秘結，欲便不得。兼癥：①胸脅痞滿；②腹脹疼痛；③噯氣頻作。舌脈指紋：①舌質紅；②苔薄白；③脈弦，指紋滯。

襯砌板分縫寬度要均勻，伸縮縫切割要順直，縫寬度和深度均應滿足要求；填料填充前要對伸縮縫進行清理，清除縫內的灰末及松動混凝土余渣等雜物；新配置的膠料不得與剩余膠料混合使用。

本研究分析不同大豆品種發現，其總酚和總黃酮含量在各品種之間存在較大的差異，在黑豆品種中，黑色種皮的大豆多酚和黃酮含量是黃色種皮的豆類含量的將近2倍，黃豆的含量與黑豆品種中的黃色種皮黑豆的含量相似，這種差異可能是與黑色種皮中含有較高的花色苷有關。徐金瑞[15]和張芳軒等[16]對不同黑大豆種子的總酚和花色苷及抗氧化活性進行研究表明，北方和東北種子大豆的多酚、花色苷含量最高，黑大豆種皮中的總酚和花色苷是其抗氧化作用的重要物質。

本研究利用HPLC方法對多酚的組成進行了研究，從大豆種檢測出9種酚類化合物，其中原兒茶酸是黑色種皮大豆的主要酚類組成物質，占所檢的9種酚類含量的50%以上，咖啡酸在黑色種皮大豆中含量也較高，原兒茶酸和綠原酸是黃豆中的主要酚類物質。WANG等[17]對紅棗中的酚類化合物組成進行了分析，但對豆類中的酚類化合物的組成的分析還未見報道。

1.2.2 總酚含量的測定

[2] 韓立德,蓋鈞鎰,張文明.大豆營養成分研究現狀[J].種子,2003(5)：57-59.

1-沒食子酸；2-原兒茶酸；3-綠原酸；4-對羥基苯甲酸；5-咖啡酸；6-對香豆酸；7-阿魏酸；8-槲皮素；9-肉桂酸圖1 標準混合溶液色譜圖Fig.1 Chromatograms of standard mixture

1-沒食子酸；2-原兒茶酸；3-綠原酸；4-對羥基苯甲酸；5-咖啡酸；6-對香豆酸；7-阿魏酸；8-槲皮素；9-肉桂酸圖2 樣品色譜圖Fig.2 Chromatograms of sample

4 結論

本研究分析不同地區大豆種子發現，其總多酚、總黃酮含量在各品種子之間的變幅較大，黑豆品種中黑色種皮的大豆其總多酚和總黃酮較高，黃色種皮的黑豆品種和黃豆品種的含量較低。采用HPLC分析出多酚的9種組成成分，其中原兒茶酸是含量最高的酚類化合物。抗氧化活性與總多酚和總黃酮之間存在顯著的相關性，與單體酚中的原兒茶酸、綠原酸、咖啡酸和肉桂酸存在顯著的相關性，相關系數均達到了極顯著水平(P<0.01)，表明大豆中的總酚和總黃酮是其抗氧化作用的重要物質基礎。

參考文獻

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本研究利用DPPH自由基清楚能力、FRAP總抗氧化能力分析了不同豆類的抗氧化活性，2種方法采用了統一的抗氧化標準物質Trolox 為參照，使得不同實驗室的研究結果之間具有較好的可比性，DPPH和FRAP具有較高的正相關性。本研究測得的黑色種皮的FRAP抗氧化能力最高達到55.02 mgTE/g，其中黑色種皮的大豆抗氧化活性遠高于黃色大豆，是其抗氧化活性的10倍左右?？偡雍涂傸S酮與DPPH和FRAP抗氧化活性有顯著的正相關性，含量較高的原兒茶酸、綠原酸和咖啡酸與抗氧化也有顯著的正相關性。本研究結果可以為以培育高營養和(或高活性)的大豆種子為目的的育種研究工作提供指導。

大豆種子資源：18種大豆種子均從橫山種子公司獲得，其中6種黑豆品種，12種黃豆品種。

要切實提升對紀檢監察工作的認識。從工作實踐來看，認識上的誤區主要有兩種：一種認為紀委的監督阻礙了工作效率的提升，片面地把監督與發展對立起來，因而存在應付監督、不愿監督的現象，甚至表現為一定形式或程度的抵觸情緒，不利于監督工作的正?；⒁幏痘?、常態化；另一種是把紀委的監督當“擋箭牌”，有的部門自己不履行檢查與監督職能，而是把紀委推到一線，甚至事事都要有紀檢部門人員參加，并為其決策“簽字背書”，這種“越位”“錯位”現象把紀檢部門推向了“監督不是、不監督也不是”的兩難境地。

隨著護理事業的發展，男護已經成為護理隊伍中不可缺少的重要組成部分。護理工作不同于一般服務行業的從業人員，工作要求專業性、技術性、知識性較強，因而男護在就業方面有著較高的優越性。所以男護生進軍護理行業勢在必得，通過此次調查，可以看出我院男護生對護理行業就業意向率較高，對護理行業認可度也較高。男護生希望大一就接受就業指導，所以作為教師在日常教學中就應該給學生多提供相關的就業指導知識，其次要幫助學生提高求職技能。

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2）盡管英語專業大三學生的英語綜合能力較之低年級學生有較大提高和進步，但是由于語言環境的限制，他們用英語練習翻譯和交流的時間并不多，所以容易受漢語母語的影響，做漢譯英的翻譯練習時，不可避免地把漢語中的一些詞語，短語以及句型與英語相互聯系，導致他們的譯文里頻繁地出現“中國式”英語。學生們的譯文翻譯腔較重，譯文往往只是勉強達意，干癟生硬，缺乏可讀性。

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總之，基于云班課的混合式教學方式利用現代技術把手機化“敵”為“友”，混合多種教學形式發揮教師腳手架功能幫助學生知識的內化，促進學生的課堂參與度最終英語能力得到提高。

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和田所處的南疆地區脫貧攻堅存在貧困面積廣、脫貧難度大、生態環境脆弱、工業化城鎮化水平低、社會發展滯后等諸多制約，是新疆扶貧攻堅的重點和難點，此次捐助將用于喀什塔什鄉基礎設施建設，助力當地扶貧攻堅。

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Comparisons of phenolic composition and antioxidant activity in 18 different varieties of soybean

ZHU Yi-lin, ZHANG Hai-sheng*, YANG Shu-fang, ZHAO Xin-shuai, XUE Huan-huan

(Food Engineering and School of Nutrition Science of Shaanxi Normal University,Xi’an 710119,China)

The total phenol content, the composition of polyphenols and antioxidant capacity in 18 different varieties of soybean were studied to provide guidance for breeding of high nutrition and highly active soybean germplasm research. Soybeans from Yulin, Shanxi province were used as materials; DPPH radical-scavenging and FRAP assay were conducted. Total phenolic content was measured by Folin-Ciocalteau method. Phenolic constituents were identified by HPLC and the correlation between antioxidant capacity and phenolic content was measured with Pearson correlation coefficient. The results showed obvious differences in total phenol content, jingbian black soybean have the highest content, up to 5.07 mg/g; nine phenolic substance were identified by HPLC : gallic acid, protocatechuic acid, chlorogenic acid, p-hydroxybenzoic acid, caffeic acid, p-coumaric acid, ferulic acid, quercetin and cinnamic acid; among which protocatechuic acid, chlorogenic acid and caffeic acid were in high concentrations. There were big variations in contents of the above nine phenolic compounds and total phenolic content in the examined soybeans. Extremely significant (P<0.01) correlations were found between antioxidant capacity and total phenolic content, between antioxidant capacity and flavonoids content, between antioxidant capacity and protocatechuic acid, chlorogenic acid and caffeic acid content , respectively.

soybean; total phenolics content; phenolic compounds; antioxidation

10.13995/j.cnki.11-1802/ts.201701040

碩士研究生(張海生副教授為通訊作者,E-mail:hshzh1965@snnu.edu.cn)。

2016-04-25，改回日期：2016-06-17