43例白血病患者FLT3基因和NPM1基因突變的臨床研究

楊曉哲

(濮陽市人民醫院 血液內科 河南 濮陽 457000)

·臨床研究·

43例白血病患者FLT3基因和NPM1基因突變的臨床研究

楊曉哲

(濮陽市人民醫院 血液內科 河南 濮陽 457000)

目的 研究43例白血病(AML)患者FLT3基因和NPM1基因突變的臨床特點。方法 選取2013年1月至2015年1月濮陽市人民醫院血液科收治的43例成人AML患者為研究對象，初診時收集其骨髓單個核細胞，采用基因組DNA-PCR方法分別擴增其FLT3和NPM1基因，并用毛細管電泳方法分析NPM1基因第12外顯子突變，瓊脂糖凝膠電泳分析FLT3基因突變，觀察患者基因突變特征并隨訪1 a了解其預后。結果 43例患者初診AML患者中共檢出FLT3+AML 30例(69.77%)，其中正常核型AML 22例(81.48%)顯著高于異常核型AML 8例(50.00%)(P<0.05)；共檢出NPM1+AML 28例(65.12%)，其中正常核型AML 21例(77.78%)顯著高于異常核型AML 7例(43.75%)(P<0.05)。FLT3+AML患者完全緩解率與無復發率顯著高于FLT3-AML患者(P<0.05)；NPM1+AML患者完全緩解率與總生存率顯著高于NPM1-AML患者(P<0.05)。結論 AML患者FLT3和NPM1基因突變發生率較高，是較為常見的子學異常，且NPM1和FLT3基因突變與臨床特點及預后密切相關。

AML；FLT3基因；NPM1基因；突變

AML是一組起源于造血干細胞的惡性克隆性疾病，與遺傳學的改變密切相關，具有高度異質性，其發病基礎是基因突變引起細胞增殖、分化、凋亡途徑的改變[1]；AML伴有嚴重的凝血功能障礙，極易引發致命性出血，早期死亡率極高。目前在AML患者中發現了多種基因突變，而近幾年的研究發現，NPM1(核仁磷酸蛋白)突變、FLT3(FMS樣酪氨酸激酶3基因內部串聯重復)突變可作為成人AML患者制定治療方案以及評估預后的分子標記物[2-3]。因此，檢測FLT3基因、NPM1基因突變對AML患者治療、預后及相關研究有重要意義。本文以濮陽市人民醫院43例成人AML患者為研究對象，進一步分析FLT3基因和NPM1基因突變的臨床特點，以期為AML患者的治療、預后及相關實踐提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2013年1月至2015年1月濮陽市人民醫院血液科收治的43例成人AML患者為研究對象，均符合2007年《血液病診斷和療效標準》(第3版)確定的AML診斷標準[4]，且經病理學確診，所有患者及其家屬對本研究知情且同意，本研究經濮陽市人民醫院倫理委員會批準。其中男19例，女24例；年齡為19～53歲，平均(32.42±10.70)歲；按FAB標準進行分型：M1 9例、M2 9 例、M3 6例、M4 5例、M5 2例、M6 2例；正常核型AML 27例，異常核型AML 16例。

1.2 研究方法

1.2.1 治療方法 43例患者均住院接受治療，根據患者實際情況主要采用以下方案：①全反式維甲酸(ATRA)、亞砷酸(ATO)或兩者聯合治療；②標準DA方案化療；③減量DA方案化療或CAG等預激方案化療。

1.2.2 基因突變檢測方法 ①FLT3基因突變：PCR反應擴增FLT3基因，涵蓋基因外顯子14和15，引物正義鏈：5’-GCAATTTAGGT ATGAAAGCCAGC-3’；反義鏈：5’-CTTTCAGCATTTTGA CGGCAACC-3’；在5 μl PCR產物于20 g/L瓊脂糖凝膠上進行電泳，出現>329 bp的DNA 條帶為FLT3+標本。②NPM1基因突變：擴增NPM1基因第12外顯子，擴增產物長度329 bp；引物正義鏈：5’T YAACTCTCTGGTGGTACAATGAA-3’；反義鏈：5’TGITACAGAAATGAAATAAGACGG-3’；在5’端標記FAM基羧基熒光素；PCR總體系25 μl，反應條件：95 ℃預變性min，35個循環，72 ℃延伸6 min。1 μl PCR產物進行毛細管電泳，在215 bp峰之后出現額外峰為NPM1+標本。

1.2.3 隨訪 通過門診、電話、視頻等方式對患者進行隨訪，時間為1 a。

1.3 觀察指標 觀察患者基因突變發生情況及預后。

1.4 統計學方法 采用SPSS 10.0統計學軟件進行數據處理分析，定性資料的組間比較采用χ2檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 基因突變發生情況 43例患者初診AML患者中共檢出FLT3+AML 30例(69.77%)；其中正常核型AML 22例(81.48%)顯著高于異常核型AML 8例(50.00%)(P<0.05)；共檢出NPM1+AML 28例(65.12%)，其中正常核型AML 21例(77.78%)顯著高于異常核型AML 7例(43.75%)(P<0.05)。見表1。

表1 43例患者基因突變發生情況[n(%)]

2.2 預后情況FLT3+AML患者完全緩解率與無復發率顯著高于FLT3-AML患者(P<0.05)；NPM1+AML患者完全緩解率與總生存率顯著高于NPM1-AML患者(P<0.05)。見表2。

表2 43例患者預后情況[n(%)]

注：與FLT3-比較，aP<0.05；與NPM1-比較，bP<0.05。

3 討論

AML往往伴有嚴重的凝血功能障礙，常常引發致命性出血，顱內出血是患者出血性死亡的最主要原因，并且致命性出血通常發生在誘導治療的早期。AML出血導致死亡的原因主要有[5-6]：血小板及其功能異常，首先表現為血小板減少及血小板生成障礙，進而表現為血小板的黏附、聚集及釋放功能異常，臨床表現為出血明顯、止血困難等；凝血和纖溶指標均升高，血小板和凝血因子消耗，導致血栓形成和組織缺血；大量異常的白血病細胞增生浸潤，使血管內皮損傷，血管通透性增高而導致大量出血；白血病細胞纖維蛋白(原)溶解及凝血因子等降解引發出血等。

FLT3和NPM1基因是AML患者突變頻率較高的基因，國內外臨床實踐與研究中常將這兩個基因推薦為基本檢測項目，特別在染色體核型正常的患者，檢測FLT3和NPM1基因突變是公認的可幫助判斷治療效果及預后的指標，在成人AML中，染色體核型正常的患者約占40%，其預后有明顯的異質性。FLT3是Ⅲ型受體酪氨酸激酶的一種，在骨髓中僅表達于造血干細胞，正常生理情況下當配體與FLT3的細胞外結構域結合時，可誘發FLT3二聚體化，介導一系列細胞內信號傳導，導致細胞增殖、活化；若FLT3基因發生突變，會發生非配體依賴性FLT3自身磷酸化，破壞正常血細胞的增殖分化、凋亡，從而引發白血病[7]。NPM1又稱為核仁磷酸蛋白B23或核仁間質蛋白，是位于核仁顆粒區的主要蛋白分子之一，能穿梭于核仁、核質和胞質之間，參與核糖體前體運輸和合成及中心體的復制，進而調控細胞的周期進程和增殖發育，其是白血病發生的始動因素[8]。

本文研究結果顯示，43例患者初診AML患者中共檢出FLT3+AML 30例(69.77%)；其中正常核型AML 22例(81.48%)顯著高于異常核型AML 8例(50.00%)；共檢出NPM1+AML 28例(65.12%)，其中正常核型AML 21例(77.78%)顯著高于異常核型AML 7例(43.75%)；FLT3+AML患者完全緩解率與無復發率顯著高于FLT3-AML患者，NPM1+AML患者完全緩解率與總生存率顯著高于NPM1-AML患者。結果數據表明，不同AML核型FLT3基因和NPM1基因突變存在差異，FLT3和NPM1基因突變對成人AML患者預后有一定的預測價值；本文結果NPM1+、FLT3-、NPM1+、NPM1-預后情況數值差異不夠明顯，可能與提供的例數較少有關，因此相關研究有待提供大規模數據進行深入論證。

綜上所述，NPM1和FLT3基因突變是AML患者臨床較為常見的基因突變，其與患者臨床特點及預后有密切的相關性。

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10.3969/j.issn.1004-437X.2017.02.010

2016-06-26)