麝香保心丸中5種人參皂苷類化合物在心肌梗死大鼠血漿中的藥代動力學研究

劉群++吳然+呂超+張衛東+柳潤輝

[摘要]麝香保心丸（SBP）是治療冠心病的經典復方，其中人參皂苷類化合物是其發揮藥效的主要成分之一。該文采用液相色譜串聯質譜（LCMS/MS）的方法，研究心梗大鼠多次灌胃麝香保心丸、人參提取物（GE）及5種人參皂苷類單體化合物后人參皂苷類化合物的藥代動力學特性。研究發現人參皂苷類化合物總體吸收較差，各組Cmax均小于200 μg·L-1。比較各組分析物的Tmax發現人參提取物組和麝香保心丸組中人參皂苷類化合物均比各單一化合物組吸收快，提示人參提取物及復方中均存在促進人參皂苷成分吸收的成分。麝香保心丸組中的各人參皂苷成分的給藥劑量在所有給藥組中最小，但相應的AUC0t和AUCINF數值最大，表明配伍后麝香保心丸中人參皂苷類成分吸收最好，說明復方是中醫藥用的最佳形式。

[關鍵詞]麝香保心丸； 人參提取物； 人參皂苷類； 心肌梗死； 藥代動力學

麝香保心丸（SBP）源于南宋《太平惠民和劑局方》中收載的蘇合香丸，由麝香、蟾酥、人參提取物、蘇合香、牛黃、肉桂、冰片組成，具有芳香溫通、益氣強心之功效。近40年來，麝香保心丸廣泛應用于臨床治療冠心病、心絞痛及心肌梗死等疾病[12]，療效顯著。現代藥理研究表明麝香保心丸具有舒張血管[3]、穩定易損斑塊[4]、縮小心肌梗死面積[5]、抑制血管鈣化[6]和促進血管新生[7]等作用。為了闡釋麝香保心丸組方的科學內涵，自上市以來對其進行藥效物質基礎及作用機制方面的研究從未間斷。本課題組前期采用現代分離分析手段結合血清藥化的方法對麝香保心丸的藥效物質基礎進行了全面研究[89]，進一步采用藥理學及代謝組學方法對其作用機制進行了研究[1013]。

近年來，中藥藥代動力學研究在闡釋中藥復方藥效物質基礎及作用機制方面的應用越來越廣泛。中藥藥代動力學是利用動力學原理與處理方法，定量地描述中藥有效成分、有效部位、單味中藥和復方中藥通過各種途徑進入機體后吸收、分布、代謝和排泄等過程的動態變化規律，在闡明中藥作用機制及其科學內涵、設計及優選給藥方案、促進新藥研發和劑型改進等方面起著重大作用[14]。目前，課題組已對麝香保心丸中的主要藥效成分人參皂苷類[1516]、蟾蜍甾體二烯類[17]以及揮發性成分（異龍腦、龍腦、麝香酮和肉桂醛）[18]在正常大鼠體內的藥代動力學進行了研究。眾所周知，藥物最終用于病人治療疾病，因此研究疾病狀態下的中藥藥代動力學更有意義，且與臨床更相關[19]。有文獻報道，大鼠心肌梗死后胃腸功能[20]、內分泌水平[21]及血漿纖維蛋白含量[22]均會發生改變，這些由心功能受損引起血流動力學的變化和病理變化都可導致藥物血漿藥動學和組織分布的改變，影響藥物的體內過程。因此本文對麝香保心丸中人參皂苷類成分在心肌梗死模型大鼠體內的藥代動力學特征進行了研究。

本文在前期血清藥化及藥代動力學研究的基礎上選取5種人參皂苷類化合物（Rg1，Re，Rb3，Rc，Rb1）作為目標分析物，比較分析心肌梗死大鼠分別多次灌胃5種人參皂苷類單體化合物、人參提取物（GE）和麝香保心丸后5種人參皂苷類化合物的藥代動力學特性差異，探討麝香保心丸中人參皂苷類成分在病理狀態下的體內代謝過程，為闡釋麝香保心丸的作用機制提供依據。

1材料

11儀器及試劑安捷倫1200系列高效液相色譜系統（Agilent Technologies，USA）；G6410B三重四級桿質譜檢測器，ESI離子源（Agilent Technologies，USA）；MassHunter軟件采集和處理數據（B0301版本，Agilent Technologies，USA）。人參皂苷Rg1，Re，Rb3，Rc，Rb1及地高辛（內標，IS）對照品均購自上海鼎瑞化工有限公司（中國上海），純度>98%。待測化合物及內標的結構，見圖1。人參提取物（批號150412）和麝香保心丸制劑（批號150603）由上海和黃藥業（中國上海）提供。乙腈為質譜純，購自Merck公司（Germany）；甲醇和甲酸分別購自百靈威科技有限公司（中國北京）；SigmaAldrich公司（USA），均為色譜級；其他試劑均為分析純。實驗中所用的超純水是由Milli Q50 SP純水系統制備。

解于10 mL量瓶，超聲提取30 min，14 000 r·min-1離心10 min，取上清液。022 μm微孔濾膜過濾，得供試液。分別配制麝香保心丸和人參提取物樣品3份，采用LCMS/MS系統進行分析，進樣體積為10 μL。根據標準曲線分析，并取平均濃度。最后測得Rg1，Re，Rb3，Rb1，Rc在麝香保心丸中質量分數分別為247，251，423，671，268 mg·g-1；在人參提取物中質量分數分別為1001，1074，1719，2648，1218 mg·g-1。

24血漿樣品制備采用液液萃取法，取100 μL血漿樣品置于15 mL離心管中，加入1 mL正丁醇（含內標地高辛25 μg·L-1）。將此混合物渦旋10 min，14 000 r·min-1，4 ℃離心10 min，上清液轉移至干凈離心管中，45 ℃ N2流下揮干，50 μL甲醇復溶，渦旋10 min，14 000 r·min-14 ℃下離心10 min，取上清液，即得樣品溶液。10 μL樣品溶液進LCMS/MS系統分析。

25給藥及采血實驗前所有心梗大鼠禁食12 h，可自由飲水。給藥后4 h即可飲水。分別稱取麝香保心丸細粉，人參皂苷提取物細粉，Rg1，Re，Rb3，Rb1和Rc，用05%羧甲基纖維素鈉（CMCNa）水溶液配制成混懸液。42只心梗大鼠隨機分組后，分別灌胃7種藥物，包括麝香保心丸組（180 mg kg-1·d-1，n=6），人參皂苷提取物組（80 mg·kg-1·d-1，n=6），Rg1組、Re組、Rb3組、Rc組、Rb1組給藥劑量與樣本數均相同（40 mg·kg-1·d-1，n=6）。所有大鼠稱重，連續灌胃5 d。第5天灌胃后，分別在5，15，30，45 min，1，15，2，4，6，8，10，24 h眼眶靜脈取血，每次采血量約250 μL，采集的樣品收集在預先涂有肝素鈉的15 mL 離心管中。所有樣本立即在4 ℃，3 500 r·min-1下離心10 min，取上清液，血漿樣品保存在-20 ℃冰箱中待分析。

3結果

31色譜行為及專一性地高辛（IS），Rg1，Re，Rb3，Rc，Rb1相應用于定量的transitions分別為m/z 7794/4752，8452/6371，9455/188，1 0775/1488，1 0777/1907，1 1073/1188。空白大鼠血漿、空白血漿添加各待測物及內標所得的最低定量限（LLOQ）處的血漿樣品及大鼠灌胃麝香保心丸后實際的血漿樣本，得到的典型MRM色譜圖，見圖2。IS，GRg1，GRe，GRb3，GRc，GRb1的保留時間分別為339，537，533，696，668，653 min。各待測物及內標無明顯干擾，該方法選擇性良好，見圖3。

32血漿樣品標準曲線通過分析標準血漿樣品得到標準曲線，每一濃度平行5份。每條標準曲線是由6個非零濃度點組成。橫坐標為待測物的血

4討論

本文應用LCMS/MS分析了心肌梗死大鼠連續5 d灌胃麝香保心丸、人參提取物及單體化合物后各時間點的5種人參皂苷化合物的血藥濃度，并計算其藥代動力學參數和時間平均血藥濃度曲線。

藥動學參數Cmax反映了藥物在血漿中的最大濃度，所有給藥組中人參皂苷的Cmax均小于200 μg·L-1，說明人參皂苷類化合物灌胃給藥吸收較差，可能是由于人參皂苷類化合物在吸收過程中被胃酸破壞、腸道菌降解、腸壁吸收差及肝首過作用所致[2425]。各人參皂苷化合物在麝香保心丸組和人參提取物組的Cmax均大于相應的單體化合物給藥組，且麝香保心丸組Cmax高于人參提取物組。血漿蛋白結合率為藥代動力學重要參數之一，對血漿蛋白結合率的協同作用可以影響到藥物游離體的血漿濃度，文獻報道，人參皂苷Rg1與Rb1合并應用氯吡格雷后二者血漿蛋白結合率均下降約10%，使得游離皂苷濃度增加[26]。中藥復方及中藥提取物中均含有多種成分，因此服用中藥制劑相當于藥物聯合應用。麝香保心丸及人參皂苷提取物中可能含有一些成分，可與人參皂苷類成分競爭性結合血漿蛋白，導致其Cmax升高。心肌缺血后藥物可以透過受損血管更多地分布于缺血區，同時，由于缺血區血流減少，使得透過藥物在缺血區的滯留時間延長。這種因缺血導致的心肌區藥物分布變化稱為透過增強與滯留效應，是目前普遍認同的心肌缺血區被動靶向的主要機制[27]。正常大鼠灌胃相近劑量的5種人參皂苷單體化合物后Cmax為1996 ～7014 μg·L-1 [2831]，大于模型動物灌胃相應的單體人參皂苷化合物的Cmax，提示在心肌缺血模型大鼠體內，人參皂苷類化合物可能存在心肌缺血區被動靶向的現象，使得心肌缺血區藥物分布多，而血藥濃度較低。

心梗大鼠灌胃全方、提取物和人參皂苷類單體化合物后，各組Rb1和Re藥時曲線均有雙峰現象，這與正常大鼠的相關報道一致[2829]。藥物的雙峰現象通常由肝腸循環、成分間轉化或藥物再分布導致。文獻報道人參皂苷Rd在大鼠體內經代謝可生成Rb1[32]；同時，人參皂苷Rb1在空腸的吸收量、吸收速率及累積吸收率，較回腸和十二指腸顯著提高[33]，提示人參皂苷Rb1的雙峰現象可能由人參皂苷Rd轉化及其自身在不同腸斷吸收不同導致。

Tmax反映了藥物達到最大血藥濃度所需要的時間。比較各組相應分析物的Tmax發現，麝香保心丸組及人參皂苷提取物組中5種人參皂苷與相應的單體化合物組相比較小，且麝香保心丸組中人參皂苷的Tmax小于人參提取物組，說明提取物組和麝香保心丸組中人參皂苷均比各單一化合物吸收快，提示不僅各人參皂苷類化合物可以互相促進吸收速率，而且復方中的其他成分對人參皂苷的吸收速率具有促進作用。

所有給藥組的T1/2和MRT均較長，可能由于人參皂苷類化合物的膽汁及腎臟的排泄率低、腸道排泄慢、血漿蛋白結合率高導致[24，34]。比較各組相應分析物的T1/2和MRT發現，麝香保心丸組中各分析物的T1/2最大，說明復方配伍后5種人參皂苷在體內起效時間可能會延長。正常大鼠灌胃麝香保心丸后5種人參皂苷成分的T1/2在2053～3634 h[16]，大于其灌胃于心梗大鼠后各分析物相應的T1/2，可能由于心梗大鼠較正常大鼠小腸推進率增加導致[35]。

藥代動力學參數AUC和AUCINF是評價藥物吸收程度的重要指標，反映藥物在體內的暴露特性。正常大鼠灌胃相近給藥濃度的5種人參皂苷單體化合物后AUC和AUCINF分別為13 3637～63 5000，14 9909 ～ 66 8000 μg·L-1·h[2831]，遠大于心梗大鼠灌胃各單體化合物的AUC和AUCINF，提示正常大鼠對于這5種人參皂苷類化合物吸收優于心梗大鼠。該現象可能由于大鼠心梗后胃排空減慢[20]、血漿中纖維蛋白含量增加[22]及小腸推進率增加[35]導致。在各給藥組中，麝香保心丸組中的各人參皂苷成分的給藥劑量均最小，但其對應的AUC0t和AUCINF的數值最大，人參提取物組中各人參皂苷的AUC0t和AUCINF其次，結果說明人參皂苷提取物中存在促進人參皂苷單體吸收的成分，同時全方中其他配伍組分也能促進人參皂苷成分的吸收，與之前的研究結果一致[36]。通過藥代動力學參數比較可以發現，中藥有效成分在配伍后的復方中發揮藥效的能力最強，體現了中藥復方配伍的科學性，由此說明復方是中醫用藥的最佳形式。

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[責任編輯曹陽陽]