溶血三項 網織紅細胞及血清總膽紅素聯合檢測對新生兒溶血病的診斷價值

夏幫坤 張杏杏 劉婷婷

作者單位： 236000 安徽阜陽 阜陽市人民醫院輸血科

新生兒溶血病(hemolytic disease of the newborn，HDN)指由于母嬰血型不合，母體產生的血型抗體通過胎盤與胎兒體內的血型抗原結合而發生的免疫性溶血病變，若不及時治療，可能會誘發新生兒膽汁粘稠綜合征等疾病，嚴重威脅患兒的生命健康[1-2]。目前，臨床常通過溶血三項對HDN進行診斷，臨床參考價值較高。研究[3-5]顯示，因溶血三項易受血液抽取時間、存放條件等因素的影響，通過單一檢測溶血三項診斷HDN存在一定的缺陷。網織紅細胞、血清總膽紅素水平為臨床評估新生兒黃疸、進行性貧血的常用指標，有研究[6-7]發現，網織紅細胞、血清總膽紅素對HDN的診斷具有一定的積極作用。本文以136例疑似HDN的新生兒為研究對象，探討溶血三項、網織紅細胞及血清總膽紅素三者聯合檢測對HDN的診斷價值，旨為臨床探尋便捷、有效的HDN診斷方法提供參考依據。

1 資料與方法

1.1 一般資料 回顧性分析阜陽市人民醫院2020年2月至2021年12月收治的136例疑似HDN的新生兒患者的臨床資料，其中男患兒74例，女患兒62例；日齡2 h～20 d，平均(6.91±1.85)d；血型：A型61例，B型44例，O型31例；以臨床診斷為標準，分為HDN組(102例)和非HDN組(34例)，HDN組：男患兒52例，女患兒50例；日齡2 h～18 d，平均(6.83±1.62)d；非HDN組：男患兒22例，女患兒12例；日齡2 h～20 d，平均(7.16±1.94)d；兩組基線資料對比，差異無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。納入標準：HDN患兒符合臨床診斷標準[9]：依據溶血三項檢測結果并結合臨床黃疸、貧血癥狀確診；男患兒日齡<28 d；母親血型均為O型RhD陽性，且新生兒血型與母親血型不合；單胎妊娠；患兒家屬對本研究知情同意。排除標準：顱內出血、頭顱血腫史者；先天性膽/肝系統疾病；合并嚴重感染或重要臟器功能不全者。

1.2 方法 比較兩組網織紅細胞、血清總膽紅素水平；繪制溶血三項、網織紅細胞及血清總膽紅素單檢及三者聯合檢測診斷HDN的受試者工作特征(receiver operating characteristic，ROC)曲線，比較上述各指標的曲線下面積(area under the curve，AUC)。

1.2.1 溶血三項檢測 抽取所有研究對象靜脈血2 mL，采用酸放散法并使用抗人球蛋白檢測卡、人ABO血型正/反定型及Rh(D)血型檢測卡、專用檢測卡離心機及37℃試劑卡孵育器依次行直抗試驗、游離試驗及釋放試驗，試劑盒均購于長春博迅生物技術公司；溶血三項判定HDN[8]：溶血三項檢測結果均為陰性[直抗試驗(-)、游離試驗(-)、釋放試驗(-)],可判定為HDN；僅直抗或游離試驗單項陽性，可判定為疑似HDN；釋放試驗陽性或任何兩項或兩項以上陽性，可判定為非HDN。

1.2.2 網織紅細胞及總膽紅素檢測 采用全自動血液分析儀(型號：邁瑞bc-6900，深圳邁瑞生物醫療電子股份有限公司)檢測網織紅細胞計數。采用全自動生化分析儀(型號：XC8001，四川新健康成生物股份有限公司)檢測血清總膽紅素水平(重氮法)。

2 結果

2.1 溶血三項檢測與臨床診斷HDN結果比較 依據溶血三項檢測結果，診斷HDN患兒103例，非HDN患兒33例。溶血三項診斷HDN的靈敏度、特異度分別為90.20%(92/102)、67.65%(23/34)。見表1、2。

表1 溶血三項檢測結果

表2 溶血三項檢測與臨床確診HDN結果比較

2.2 兩組患兒網織紅細胞、血清總膽紅素水平比較 HDN組網織紅細胞、血清總膽紅素水平均高于非HDN組，差異有統計學意義(P<0.05)。見表3。

表3 兩組患兒網織紅細胞、血清總膽紅素水平比較

2.3 溶血三項、網織紅細胞及血清總膽紅素單檢及三者聯合檢測對HDN的診斷價值 繪制溶血三項、網織紅細胞及血清總膽紅素聯合檢測診斷HDN的ROC曲線[病理診斷為HDN以1表示，病理診斷為非HDN以0表示；溶血三項檢測結果為真陽(病理診斷為HDN，溶血三項檢測結果也為HDN)用1表示，真陰用0表示(病理診斷為非HDN，溶血三項檢測結果也為非HDN)，假陽用0表示(病理診斷為HDN，而溶血三項檢測結果為非HDN)，假陰(病理診斷為非HDN，而溶血三項檢測結果為HDN)用1表示]，結果顯示，網織紅細胞與血清總膽紅素對HDN早期診斷的最佳截斷點分別為5.06 %、200.43 μmol/L，溶血三項、網織紅細胞與血清總膽紅素三者聯合的靈敏度、特異度及AUC分別為96.08%、88.24%和0.937。見圖1、表4。

圖1 溶血三項、網織紅細胞與血清總膽紅素聯合檢測診斷HDN的ROC

表4 溶血三項、網織紅細胞及血清總膽紅素聯合對HDN診斷的ROC分析

3 討論

HDN是致使新生兒病理性黃疸常見病因，病因主要為妊娠或分娩過程中母親免疫球蛋白G抗體由胎盤進入胎兒體內而引發機體免疫反應，致使紅細胞生理結構被破壞[10-12]。臨床多依賴溶血三項試驗結果診斷HDN，但單一依據溶血三項診斷的準確度有待提高[13]。研究[14]發現，網織紅細胞、血清總膽紅素均與HDN的發生發展有關。本文探討溶血三項聯合網織紅細胞、血清總膽紅素檢測對HDN的早期診斷價值，旨為提高臨床早期診斷HDN的思路及提高診斷準確性提供參考依據。

本研究顯示，溶血三項診斷HDN的靈敏度、特異度分別為90.20%、67.65%，提示溶血三項檢測結果中存在假陰性情況，有漏診風險，與江藍玉等[15]研究結果相近，分析原因可能是由于血液抽取時間、抽血后樣本保存時間、檢測操作等因素的影響[16]。本研究發現，HDN組網織紅細胞、血清總膽紅素水平均高于非HDN組(P<0.05)，表明HDN患兒網織紅細胞、血清總膽紅素水平明顯偏高。分析原因：網織紅細胞為一種不成熟的細胞，其水平可直接反映骨髓紅細胞的生成能力，且還與HDN的發生具有一定的相關性[17]。HDN早期癥狀多表現為黃疸，新生兒機體中血清總膽紅素可明顯升高；同時新生兒出生后由于自身清除膽紅素的能力較低，致使血液中膽紅素未能得到及時清除而聚集，近而致使HDN血清總膽紅素水平異常偏高[18-19]。ROC分析顯示，網織紅細胞與血清總膽紅素對HDN早期診斷的最佳截斷點分別為5.06%、200.43 μmol/L，溶血三項、網織紅細胞與血清總膽紅素三者聯合檢測的靈敏度、特異度及AUC分別為96.08%、88.24%和0.937，提示溶血三項、網織紅細胞及血清總膽紅素聯合檢測診斷HDN有較高的診斷價值。此可能是溶血三項主要包括直抗試驗、游離試驗及釋放試驗，其中釋放試驗為三項中較為重要的，由于其采用間接的檢測方法具有較高的準確度，陽性即可診斷[20]。網織紅細胞為血液中新生紅細胞的標志，能夠反映骨髓紅系的生成狀態，同時也是新生紅細胞的標志[21]。在新生兒期過高的血清總膽紅素水平可致使膽紅素在體內蓄積，并透過血腦屏障沉積于神經系統中，其毒性常會致使基底神經節、海馬、及下丘腦神經核壞死，且可對中樞神經系統的髓鞘造成一定的損傷，同時還可能嚴重影響神經元的正常能量代謝[22]。

綜上所述，溶血三項聯合網織紅細胞與血清總膽紅素對HDN早期診斷效能較高，可作為臨床HDN早期診斷的重要參考指標，建議在臨床中對疑似HDN患兒進行溶血三項檢測的同時，還應加強對網織紅細胞、血清總膽紅素，以提高臨床診斷的準確性。由于本研究樣本量不大，對結果可能有一定的偏倚，擬在后續的研究中擴大樣本量，對本結果進行近一步的驗證。