全血法流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)血小板抗體分析

韓博文

（天津曠博協(xié)和生物技術(shù)有限公司，天津 300384）

全血法流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)血小板抗體分析

韓博文

（天津曠博協(xié)和生物技術(shù)有限公司，天津 300384）

目的 本文針對(duì)全血法流式細(xì)胞術(shù)在檢測(cè)血小板抗體中的診斷作用進(jìn)行研究分析。方法選取我院2015年6月～2017年5月收治的進(jìn)行質(zhì)量的特發(fā)性血小板減少性紫癜患者77例。將使用傳統(tǒng)方法和全血法流式細(xì)胞術(shù)的患者進(jìn)行對(duì)比測(cè)試，將結(jié)果進(jìn)行比較。結(jié)果使用全血法流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)行檢測(cè)的患者有56例（72.7%），PALgG陽性的為39例，血漿抗血小板抗體陽性，總陽性率為91.6%；使用傳統(tǒng)的方法進(jìn)行檢測(cè)的是46例（59.7%），PALgG陽性的為25例，主要體現(xiàn)為血漿之中的抗血小板抗體為陽性，總陽性率為75.1%，在使用全血法流式細(xì)胞數(shù)進(jìn)行檢測(cè)的時(shí)候，在血小板降低的情況下，血小板之中的LgG和PALgM的熒光度隨之增加，所以使用次方法能夠比傳統(tǒng)方法更為準(zhǔn)確。結(jié)論全血法流式細(xì)胞術(shù)在檢測(cè)血小板抗體的問題上非常有優(yōu)勢(shì)，需要的血量比較少，檢測(cè)結(jié)果也比較準(zhǔn)確、檢測(cè)比較靈敏可以重復(fù)進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果對(duì)醫(yī)生進(jìn)行治療有很大的幫助，可以廣泛應(yīng)用在臨床的檢測(cè)上面。

血小板；抗體；診斷

特發(fā)性血小板而造成的較少性紫癜，主要是因?yàn)檠“蹇乖寡“搴脱“宓目乖嘟Y(jié)合的過程之中，由于血小板的減少而造成的免疫類疾病，如果想要對(duì)于此類疾病進(jìn)行質(zhì)量，就需要對(duì)于血小板抗體檢測(cè)的分類的過程進(jìn)行全面了解，檢測(cè)得到有價(jià)值的信息。檢測(cè)手段有很多種，傳統(tǒng)的檢測(cè)手段對(duì)患者來說非常痛苦，因?yàn)閷?duì)血小板的需求很大的，需要不斷地增加采血量，患者和患者家屬都很難接受，這極大的影響了治療效果，還非常容易引起醫(yī)療糾紛。所以在進(jìn)行檢測(cè)血小板抗體中減少血量的采取和保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確十分重要。全血法流式細(xì)胞術(shù)在檢測(cè)血小板抗體的問題上非常有優(yōu)勢(shì)，需要的血量比較少，檢測(cè)結(jié)果也比較準(zhǔn)確、檢測(cè)比較靈敏可以重復(fù)進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果對(duì)醫(yī)生進(jìn)行治療有很大的幫助，可以廣泛應(yīng)用在臨床的檢測(cè)上面。近幾年，這一臨床檢測(cè)手段對(duì)檢測(cè)血小板抗體中有了理想效果。

1 資料與方法

1.1 一般資料

BD公司生產(chǎn)的流式細(xì)胞儀FACSCantoII。磷酸緩沖液選擇PBS；抗凝劑選擇109 mmol/L檸檬酸鈉；固定液選擇2%的多聚甲醛。CD41-PE選擇北京曠博生物技術(shù)股份有限公司。

1.2 檢測(cè)方法

1.2.1 全血法流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)將血小板進(jìn)行分離洗滌

離心時(shí)候的洗滌，是需要控制好最后的濃度的，最后血小板濃度盡量在5*106左右，具體操作如下：將2 mL周血600轉(zhuǎn)離心，得1 mL上清，加入1 mL多聚甲醛混勻，2000轉(zhuǎn)離心，棄上清，加入2 mLPBS洗滌，2000轉(zhuǎn)離心，棄上清，加入2 mLPBS重懸備用，取100 uL重懸液與20 uL CD41-PE抗體混勻，孵育20分鐘后上機(jī)檢測(cè)。

1.2.2 傳統(tǒng)的檢測(cè)方法

傳統(tǒng)檢測(cè)方法（熒光免疫標(biāo)記）是將血小板進(jìn)行分離，然后洗滌，將數(shù)量進(jìn)行計(jì)算、溶解、離心。加上96孔酶標(biāo)板，再加入HRP-lgG，進(jìn)行均勻的混合，保存環(huán)境保證在37攝氏度。60 min之后將酶版取出，使用洗滌液進(jìn)行清洗四次，加上底物，溫度依然控制在37攝氏度，十分鐘之后加上終止劑，在使用酶標(biāo)儀，然后在492 nm下進(jìn)行檢測(cè)將顏色度數(shù)和計(jì)算含量進(jìn)行比較。

2 結(jié) 果

使用全血法流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)行檢測(cè)的患者有56例（72.7%），PALgG陽性的為39例，血漿抗血小板抗體陽性，總陽性率為91.6%；使用傳統(tǒng)的方法進(jìn)行檢測(cè)的是46例（59.7%），PALgG陽性的為25例，血漿抗血小板抗體陽性。

3 討 論

血小板抗體能夠引發(fā)很多種疾病，比如特發(fā)性血小板減少性紫癜、自身免疫血小板減少癥等并發(fā)癥。現(xiàn)階段我們對(duì)血小板抗體檢測(cè)還不夠普及，方法也不夠完善。全血法流式細(xì)胞術(shù)在對(duì)血小板抗體檢測(cè)、診斷血栓性的疾病和出血性疾病包括血小板等一系列問題的檢測(cè)判斷都有優(yōu)勢(shì)，能夠幫助醫(yī)生及時(shí)的進(jìn)行改善病情。傳統(tǒng)的檢測(cè)方法采血量大，并且檢測(cè)結(jié)果也不夠準(zhǔn)確，影響了患者的治療效果，對(duì)患者和患者家屬的情緒影響也比較大。面對(duì)這種情況臨床需要一種快速、簡(jiǎn)單、有效、準(zhǔn)確、對(duì)患者身體影響比較小的血小板抗體檢測(cè)方法。全血法流式細(xì)胞術(shù)恰恰能夠滿足這項(xiàng)需求，彌補(bǔ)了傳統(tǒng)方法的許多不足之處。通過本文的對(duì)比分析得出，在進(jìn)行檢測(cè)血小板抗體的問題里，全血法流式細(xì)胞術(shù)和傳統(tǒng)方法比較，醫(yī)生可以獲得更多可靠信息。所以全血法流式細(xì)胞術(shù)對(duì)血小板檢測(cè)提供了可靠的技術(shù)支持和依據(jù)，醫(yī)生能夠更好地為患者進(jìn)行治療，更多的獲取患者的信息，更準(zhǔn)確更詳細(xì)的了解患者病情信息，對(duì)患者的治療、病情的判斷、進(jìn)行手術(shù)的方式、后續(xù)監(jiān)控都十分重要。全血法流式細(xì)胞術(shù)隨著醫(yī)學(xué)的進(jìn)步，時(shí)代的發(fā)展，因?yàn)閮?yōu)秀的臨床價(jià)值，開始逐漸替代傳統(tǒng)方法被逐漸運(yùn)用在臨床上，能夠更好地為患者服務(wù)，提高患者治療效果，減輕患者痛苦，減少醫(yī)療糾紛等各種問題。為臨床醫(yī)療做出了極大貢獻(xiàn)。

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[2]余 暉,高曉陽.全血法流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)血小板相關(guān)抗體[J].細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志.2010年12期.

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ISSN.2095-8242.2017.061.12002.01

本文編輯：趙小龍