龍脷葉提取物的抗氧化活性研究

陸秋娜++李兆疊++鄭鴻娟++黃春陽++齊梁煜++黃月維++黃鎖義

摘要：通過采用清除DPPH·和Fe3+還原力的不同體外抗氧化模型，根據試驗結果評價龍脷葉乙酸乙酯提取物和乙醇提取物的體外抗氧化活性。結果表明，龍脷葉乙酸乙酯提取物和乙醇提取物對DPPH·均具有較強的清除作用，乙酸乙酯提取物的半數抑制濃度（IC50）為1.387 mg/mL，乙醇提取物的IC50為0.349 mg/mL。提取物均對Fe3+有還原能力，且隨著提取液濃度的提高而增強，呈劑量效應關系。

關鍵詞：龍脷葉；提取物；抗氧化活性

中圖分類號：R282.71 文獻標識碼：A 文章編號：0439-8114（2017）01-0089-02

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2017.01.022

Investigation of Antioxidant Activity of Sauropus spatulifolius Beille Extract

LU Qiu-na1a，LI Zhao-die1a，ZHENG Hong-juan1a，HUANG Chun-yang1a，

QI Liang-yu1a，HUANG Yue-wei1a，HUANG Suo-yi1b，2

（1a.College of Clinical Medicine；1b. College of Pharmacy，Youjiang Medical University for Nationalities，Baise 533000，Guangxi， China；

2.Key Laboratory of Guangxi Universities on National Medicine in Youjiang River Basin，Baise 533000，Guangxi， China）

Abstract：Aiming to investigate antioxidant activity of ethyl acetate extract and alcohol extract of Sauropus spatulifolius Beille， clearing ability of the extracts on DPPH· and reduction of Fe3+ were measured to evaluate its antioxidant activity. The results showed that，ethyl acetate extract and alcohol extract of S. spatulifolius Beille had strong scavenging effects on DPPH· free radical，half inhibitory concentrations （IC50） of ethyl acetate extract was 1.387 g/L，while IC50 of alcohol extract was 0.349 g/L. The two extracts all had the reduction ability on Fe3+，the effects increased with the increasing of extract concentration，which showed corresponding does-response relationship.

Key words： Sauropus spatulifolius Beille； extract； antioxidant activity

龍脷葉為大戟科植物龍脷葉（Sauropus spatulifolius Beille）的干燥葉[1]，主要產于中國云南、四川、廣東和廣西等地。文獻報道龍脷葉中主要含有單萜、倍半萜、香豆素、黃酮苷等多種生物活性成分[2]。龍脷葉常用于治療上呼吸道炎癥引起的咳嗽、咽痛、急性支氣管炎等癥[3]。

龍脷葉是中國藥典2010年版一部收載品種，正文中暫無含量測定項，目前關于龍脷葉的薄層色譜鑒別[4]和揮發油的氣-質聯用分析[5]已有報道，但還暫無龍脷葉的抗氧化性研究，為了龍脷葉的開發和利用，本試驗采用清除DPPH·和Fe3+還原力的不同體外抗氧化模型，比較龍脷葉乙酸乙酯提取物和乙醇提取物的不同抗氧化活性。評價龍脷葉這兩種提取物的抗氧化活性，以期進一步優化龍脷葉的綜合利用價值，為加快龍脷葉藥品的臨床應用和開發新型功能食品提供依據。

1 材料與方法

1.1 原料與試劑

龍脷葉購自廣西百色市，經右江民族醫學院民族醫學教研室覃道光副教授鑒定，粉碎后備用。

乙酸乙酯、無水乙醇、DPPH（美國Signe公司）、鹽酸、磷酸鹽緩沖液、鐵氰化鉀、三氯乙酸（TCA）和三氯化鐵等試劑均為分析純，試驗用水為蒸餾水。

1.2 儀器

高速萬能粉碎機（FW100）（天津泰斯特儀器有限公司）；電熱恒溫鼓風干燥箱（上海精宏實驗設備有限公司）；電熱式恒溫水浴鍋HHS-21-4（江蘇金壇宏凱儀器廠）；SHZ-D（III）循環水式多用真空泵（鞏義市子華儀器有限公司）；FA1204B電子天平（上海天美天平儀器有限公司）；752N紫外可見分光光度計（上海精科實業有限公司）。

1.3 方法

1.3.1 龍脷葉提取物的制備 稱取龍脷葉干燥粉末50 g，分別加入10倍量蒸餾水或75%的乙醇室溫浸泡1 h，加熱回流提取2 h，抽濾取濾液，旋轉蒸發除去溶劑，烘干制成浸膏。稱定質量，分別用相應溶劑稀釋成不同濃度的龍脷葉乙酸乙酯提取液和乙醇提取液。

1.3.2 清除DPPH自由基能力測定[6] 取5支10 mL具塞比色管，各加入新配制的6×10-4 mol/L DPPH溶液0.5 mL，分別加入不同質量濃度的樣品溶液 1.0 mL，混勻后用無水乙醇定容至10 mL，室溫下暗光反應30 min，以無水乙醇調零，在517 nm處測定其吸光度（A），平行3次。按下式計算清除率。

清除率=[（A1-A2）/A1]×100%，式中，A1為空白吸光度（t=0）；A2為反應30 min后吸光度。

1.3.3 還原Fe3+的能力測定[7] 在10 mL具塞比色管中依次加入濃度為0.1、0.2、0.3、0.4、0.5 mg/mL的樣品液2.5 mL，0.2 mol/L磷酸鹽緩沖液（pH 6.6）和1%鐵氰化鉀各2.5 mL，混勻后置于50 ℃水浴中反應20 min，加入10%三氯乙酸溶液2.5 mL，混勻，如溶液渾濁則離心（3 000 r/min離心10 min），取上清液2.5 mL，加蒸餾水2.5 mL和0.1%三氯化鐵溶液2.5 mL，混勻，靜置10 min，以相應試劑為參比，于700 nm處測定吸光度（n=3）。

2 結果與分析

2.1 清除DPPH自由基能力

以自由基清除率為50%時樣品的濃度（IC50）來衡量樣品對自由基的清除能力。IC50越小，表明樣品清除自由基的能力越強。結果見表1和圖1，結果表明龍脷葉提取物對DPPH自由基具有一定的清除能力，且乙醇提取物的清除率優于乙酸乙酯提取物。

2.2 還原Fe3+的能力測定結果

結果見圖2，得龍脷葉乙酸乙酯提取物和乙醇提取物清除羥基自由基的回歸方程分別為y=0.269x+0.058 1（R2=0.991 7），y=0.457 x+0.040 3（R2=0.988 2），提示龍脷葉不同提取液對還原Fe3+均具有較強的能力，且乙醇提取物還原能力優于乙酸乙酯提取物。

3 小結

通過對清除DPPH自由基作用和還原Fe3+能力的考察，證實龍脷葉提取物是一種有效的自由基清除劑，在消除自由基過程中使溶液中自由基數目減少，龍脷葉乙酸乙酯提取物和乙醇提取物均具有較強的抗氧化活性，且在相對低濃度下乙醇提取物的抗氧化作用總體比乙酸乙酯提取物強。在正常情況下，細胞內自由基的產生與清除處于動態平衡狀態，隨著年齡的增長，這種平衡逐漸遭到破壞，結果自由基的濃度超過了閾值，鏈式的自由基反應使得DNA、蛋白質尤其是多不飽和脂肪酸等大分子物質發生變性和交聯，損傷細胞器、細胞膜等結構，導致生物體的氧化應激傷害，最終出現衰老與死亡[8]。由此，清除體內自由基、抗氧化是預防機體衰老及多種疾病的重要措施。

參考文獻：

[1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（一部）[M].北京：中國醫藥科技出版社，2010.

[2] 何 鵬，王國才，李藥蘭，等.高效液相色譜法測定龍脷葉中山柰酚-3-O龍膽二糖苷的含量[J].中南藥學，2014，12（8）：811-813.

[3] 黃 燕，譚建寧，馬雯芳.龍脷葉提取物體外抑菌活性初步研究[J].大眾科技，2014，16（2）：68-70.

[4] 陳 珍.龍脷葉薄層色譜鑒別[J].科技風，2014（18）：197.

[5] 汪小根，邱蔚芬.龍脷葉揮發油的氣-質聯用分析[J].食品與藥品，2007，9（5）：19-20.

[6] 李涂藍，林明霞，黃鎖義，等.薏苡莖總堿抗氧化性研究[J].中國野生植物資源，2013，32（6）：16-18.

[7] 林明霞，李涂藍，潘冬貴，等.雞骨草醇提物體外抗氧化自由基作用究[J].中國現代應用藥學，2013，30（10）：1047-1050.

[8] FINKEL T. Signal transduction by reactive oxygen species[J].J Cell Biol，2011，194（1）：7-15.