中性粒細胞及淋巴細胞VCS參數在手足口病診治中的應用

陳將南+許文芳+陶葉海+柳紅梅

手足口病是由多種人腸道病毒引起的一種兒童常見傳染病，傳染性強，常出現暴發或流行，重癥病例病情進展迅速，可致死亡或留有后遺癥。Beckman Coulter GEN.S五分類血細胞分析儀可在規定時間內分析8 000多個白細胞VCS參數，對白細胞進行分類。其中，V代表細胞體積，采用電阻抗法測定細胞體積大小；C代表射頻傳導性，可測量細胞內部結構差異，了解細胞內部核質比例、胞內密度和化學成分差異；S代表激光散射，可測得細胞內核分葉狀況和細胞質顆粒情況＼[1＼] 。中性粒細胞VCS參數是診斷急性細菌感染的重要指標＼[2＼]，現對手足口病病例外周血中性粒細胞平均體積（MNV）、平均射頻傳導性（MNC）、平均激光散射（MNS）參數及各自的分布寬度（MNVSD、MNCSD、MNSSD）和淋巴細胞平均體積（MLV）、平均射頻傳導（MLC）、平均激光散射（MLS）參數及各自的分布寬度（MLVSD、MLCSD、MLSSD）進行分析研究，為疾病診斷和治療提供參考。

1對象與方法

1.1對象

按入院先后，用隨機數字法隨機選取2013年3月1日至10月31日紹興市立醫院住院手足口病患兒159例，其中普通型131例，男82例，女49例，年齡0～7歲；重型28例，男17例，女11例。排除手足口病伴感染、血液病等患兒。診斷標準參考《手足口病診療指南（2010年版）》＼[3＼]。健康對照者選取同時期健康體檢兒童45例，男25例，女20例，年齡1～7歲，均無明顯感染癥狀。

1.2儀器與試劑

采用Beckman Coulter GEN.S五分類血細胞分析儀檢測，試劑為原裝配套試劑，儀器每年定期參加衛生部室間質量控制評價，每天進行室內質量控制評價，確保檢測時儀器狀態穩定。

1.3方法

采用EDTAK2抗凝真空管采集全血2 mL，于2 h內完成檢測。記錄每份標本中性粒細胞和淋巴細胞的VCS參數及各自的分布寬度。疾病分期界定為急性期：入院后發熱、皮疹等臨床癥狀明顯；恢復期：體溫降至正常，臨床癥狀消失。

1.4統計學分析

采用SPSS 19.0統計軟件進行統計學分析，正態分布的計量資料用x-±s表示，兩兩比較采用獨立樣本t檢驗及配對樣本t檢驗，檢驗水準α=0.05。

2結果

急性期普通型和重型手足口病組與健康對照組MNV、MNVSD、MNC、MNS、MLV、MLVSD、MLC、MLCSD、MLS差異有統計學意義，見表1。普通型與重型手足口病組各參數比較差異均無統計學意義（P均>0.05）。

普通型和重型手足口病組急性期與恢復期MNV、MNVSD 、MNC、MLV、MLC參數差異均有統計學意義。見表2。

恢復期普通型手足口病組MNV、MNVSD、MNC、MNS、MLV、MLVSD、MLC、MLS與健康對照組差異有統計學意義；重型手足口病組MNVSD、MNC、MNS、MLVSD、MLC、MLS與健康對照組差異有統計學意義。見表3。

3討論

手足口病由腸道病毒引起，常見病毒有柯薩奇A組16型（CoxA16）、腸道病毒71型（EV71）＼[4＼]。多發生于學齡前兒童，尤其是3歲以下幼兒＼[5＼]。患者和隱性感染者均為傳染源，主要通過消化道、呼吸道和密切接觸傳播，少數重癥病例（尤其是3歲以下者）表現病情進展迅速，發病1～5 d出現腦膜炎、腦炎、腦脊髓炎、肺水腫、循環障礙等，腦干腦炎最為兇險，極少數病例病情危重，可致死亡，存活病例可留有后遺癥＼[6＼]。近年來，對于腸道病毒感染后機體體液免疫、細胞免疫功能異常改變的研究報道較多，而引起外周血中性粒細胞和淋巴細胞VCS參數的變化報道較少。本研究對手足口病患兒全血采用五分類血細胞分析儀檢測得到的中性粒細胞和淋巴細胞的VCS參數及分布寬度進行分析。

本研究結果顯示，急性期普通型和重型手足口病患兒的MNV、MNVSD、MLV、MLVSD、MLCSD均高于健康者，說明患兒中性粒細胞和淋巴細胞的體積和分布寬度均明顯變大，而MNC、MNS、MLC、MLS均低于健康者，說明細胞射頻傳導性和激光散射值均變小。當病毒感染時，中性粒細胞發生炎性反應以及病毒對中性粒細胞的毒性作用，使中性粒細胞發生空泡變性、退化、中毒顆粒增多等形態學的變化，中性粒細胞大小和分布寬度均變大。在病毒感染時，T淋巴細胞和B淋巴細胞等參與免疫應答，患兒T淋巴細胞、T輔助細胞、T輔助細胞/抑制性T淋巴細胞均低于相應年齡段正常參考值水平，并隨病程進展有逐漸上升趨勢＼[7＼]，血中IgM升高，IgA和IgG均降低＼[8＼]。病毒感染使淋巴細胞增生并發生形態學上的變化，表現為胞體變大、胞質增多、嗜堿性增加、母細胞化等＼[9＼]。患兒淋巴細胞形態呈異型性改變，比例高達80.2%＼[10＼]，與儀器測得的MLV、MLC、MNS等變化均相符。無論是急性期還是恢復期，普通型和重型之間的VCS參數均無明顯差異，因此無法通過VCS參數來判斷疾病為普通型還是重型。隨著疾病的進展，恢復期患兒MNV、MNVSD 、MNC、MLV、MLC小于急性期，而MNCSD、MLVSD、MLCSD、MLS、MLSSD與急性期比較無明顯變化；恢復期MNVSD、MLVSD參數仍比健康者高，MNC、MNS、MLC、MLS比健康者低；普通型手足口病患兒MNV、MLV在疾病恢復期均高于健康者，而重型手足口病患兒MNV、MLV在疾病恢復期已降至健康者水平。說明中性粒細胞和淋巴細胞的體積大小和分布寬度隨著病情的恢復也逐漸恢復正常，而射頻傳導性并未隨著病情的恢復而恢復，表明雖然細胞體積大小在恢復，而細胞內部的結構、密度等仍在發生著病理性改變。

綜上所述，中性粒細胞和淋巴細胞體積參數（MNV、MLV）及其分布寬度（MNVSD、MLVSD）在手足口病急性期升高，并隨著疾病的發展，至恢復期逐漸下降或至正常，可以為疾病的早期診斷和病情轉歸判斷提供線索。而射頻傳導性和激光散射值參數（MNC、MNS、MLC、MLS）在手足口病急性期降低，并隨著疾病的發展，至恢復期繼續下降，說明中性粒細胞和淋巴細胞的許多特性變化并沒有隨著病情的轉歸而恢復。本研究僅基于醫院收住的手足口病患兒與健康組對照分析，對于中性粒細胞和淋巴細胞VCS參數在手足口病患兒總體中的變化以及與其他感染性疾病時變化的對照分析尚待進一步研究。

參考文獻

[1]CHAVE F，TIERNO B，XU D.Quantitative determination of neutrophil VCS parameters by the Coulter automated hematology analyzer：new and reliable indicators for aute bacterial infection＼[J＼].Am J Clin Pathol，2005，124（3）：440444.

[2]王劍超，馬春芳，呂國才，等.中性粒細胞VCS參數在急性細菌感染篩查中的初步應用＼[J＼].中華醫學檢驗雜志，2009，32（2）：179183.

[3]中華人民共和國衛生部.手足口病診療指南（2010年版）＼[EB/OL＼].（20100420）＼[20150505＼].http：//www.nhfpc.gov.cn/mohyzs/s3586/201004/46884.shtml.

[4]LIU W Y， WU S M， XIONG Y， et al.Cocirculation and genomic recombination of coxsackievirus A16 and enterovirus 71 during a large outbreak of hand， foot， and mouth disease in central China＼[J＼].PLoS One，2014，9（4）： e96051.

[5]XING W J， LIAO Q H， VIBOUD C，et al. Epidemiological characteristics of handfootandmouth disease in China， 2008-2012＼[J＼].Lancet Infect Dis，2014，14（4）： 308318.

[6]LIU B Y， LUO L， YAN S Y，et al. Clinical features for mild hand， foot， and mouth disease in China＼[J＼]. PLoS One，2015，10（8）： e0135503.

[7]LUO Q M， PENG W J， CHEN L. Coxsackievirus A16 infection stimulates imbalances of T cells in children＼[J＼]. Exp Ther Med， 2015，9（6）：22132218.

[8]喬培修，范聯.手足口病兒童體液免疫功能變化及臨床意義＼[J＼].中華全科醫學，2013，11（6）：869870.

[9]俞善丁.臨床基礎檢驗學＼[M＼].北京：人民衛生出版社，1997：81.

[10]付萌，張同華.86例小兒手足口病外周血片異型淋巴細胞檢出率分析＼[J＼].臨床血液學雜志（輸血與檢驗版），2011，24（2）：236237.

（收稿日期：20150616）