PI3K/AKT激動(dòng)劑和抑制劑對(duì)巨噬細(xì)胞炎癥反應(yīng)的影響*

王 靜 徐 萍# 楊志文 徐 凱 賴躍興

上海交通大學(xué)附屬第一人民醫(yī)院松江分院消化內(nèi)科1(201600) 藥劑科2

PI3K/AKT激動(dòng)劑和抑制劑對(duì)巨噬細(xì)胞炎癥反應(yīng)的影響*

王 靜1徐 萍1#楊志文2徐 凱1賴躍興1

上海交通大學(xué)附屬第一人民醫(yī)院松江分院消化內(nèi)科1(201600) 藥劑科2

背景：近年發(fā)現(xiàn)磷脂酰肌醇3激酶/絲氨酸-蘇氨酸激酶(PI3K/AKT)在重度急性胰腺炎(SAP)的發(fā)病中發(fā)揮重要作用，但機(jī)制尚未明確。目的：探討PI3K/AKT激動(dòng)劑胰島素樣生長(zhǎng)因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)和抑制劑wortmannin對(duì)巨噬細(xì)胞株RAW264.7 Toll樣受體4(TLR4)信號(hào)通路的影響，闡明PI3K/AKT參與調(diào)節(jié)SAP炎癥反應(yīng)的作用機(jī)制。方法：分別以不同濃度脂多糖(LPS)、IGF-Ⅰ、wortmannin處理RAW264.7細(xì)胞，采用CCK-8實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞活性。RAW264.7細(xì)胞分為空白對(duì)照組(不予處理)、LPS組(LPS 1 μg/mL)、IGF-Ⅰ組(IGF-Ⅰ 100 ng/mL+LPS 1 μg/mL)、wortmannin組(wortmannin 100 nmol/L+LPS 1 μg/mL)和IGF-Ⅰ+wortmannin組(wortmannin 100 nmol/L+IGF-Ⅰ 100 ng/mL+LPS 1 μg/mL)，采用ELISA法檢測(cè)腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、白細(xì)胞介素-6(IL-6)蛋白表達(dá)，采用real-time PCR檢測(cè)TLR4、髓樣分化因子88(MyD88)、AKT、PI3K、p38絲裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)、核因子-κB(NF-κB)mRNA表達(dá)。結(jié)果：RAW264.7細(xì)胞經(jīng)不同濃度LPS、IGF-Ⅰ、wortmannin處理后，各濃度組間細(xì)胞活性無(wú)明顯差異(P>0.05)。LPS組、IGF-Ⅰ組、wortmannin組、IGF-Ⅰ+wortmannin組TNF-α、IL-6表達(dá)水平均較空白對(duì)照組顯著升高(P<0.05)；wortmannin組TNF-α、IL-6表達(dá)水平較LPS組和IGF-Ⅰ組顯著降低(P<0.05)；IGF-Ⅰ+wortmannin組 TNF-α、IL-6表達(dá)水平較IGF-Ⅰ組顯著降低(P<0.05)。LPS組AKT、PI3K、TLR4及其下游分子MyD88、p38MAPK、NF-κB mRNA表達(dá)均顯著高于空白對(duì)照組(P<0.05)；IGF-Ⅰ組上述指標(biāo)較LPS組進(jìn)一步升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；wortmannin組上述指標(biāo)較LPS組和IGF-Ⅰ組顯著降低(P<0.05)；IGF-Ⅰ+wortmannin組上述指標(biāo)顯著高于wortmannin組(P<0.05)，但較IGF-Ⅰ組顯著降低(P<0.05)。結(jié)論：PI3K/AKT可能通過(guò)調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞中的TLR4及其下游分子影響促炎細(xì)胞因子表達(dá)，從而參與SAP炎癥反應(yīng)的發(fā)生。

胰腺炎； 磷酸肌醇3-激酶類； 蛋白質(zhì)絲氨酸蘇氨酸激酶； Toll樣受體4； 胰島素樣生長(zhǎng)因子 Ⅰ； Wortmannin； 腫瘤壞死因子α； 白細(xì)胞介素6

重度急性胰腺炎(severe acute pancreatitis, SAP)是病死率較高的消化系統(tǒng)疾病，其發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明。本課題組前期研究[1]發(fā)現(xiàn)磷脂酰肌醇3激酶/絲氨酸-蘇氨酸激酶(PI3K/AKT)參與調(diào)控SAP 大鼠胰腺組織促炎細(xì)胞因子的釋放，可加重胰腺組織損傷；而PI3K/AKT抑制劑wortmannin可減輕胰腺組織損傷，提高SAP大鼠生存率。然而，PI3K/AKT參與SAP發(fā)病的具體機(jī)制尚未明確。已有研究[2]證實(shí)Toll樣受體4(Toll-like receptor 4, TLR4)信號(hào)通路是促炎細(xì)胞因子釋放的主要通路，刺激TLR4可激活核因子-κB(NF-κB)、p38絲裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)信號(hào)通路，導(dǎo)致炎性因子釋放。故……