Ghrelin基因多態(tài)性與原發(fā)性高血壓患者危險因素的關(guān)系研究

劉 斌， 周志安， 劉麗麗， 姜 敏， 高 磊， 金明磊

(1.河北省滄州市人民醫(yī)院心內(nèi)科， 河北 滄 州 061000 2.河北省承德市中心醫(yī)院， 河北 承 德 067000 3.河北省定州市人民醫(yī)院， 河北 定 州 073000 4.河北醫(yī)科大學第一醫(yī)院， 河北 石家莊 050011)

Ghrelin基因多態(tài)性與原發(fā)性高血壓患者危險因素的關(guān)系研究

劉 斌1， 周志安2， 劉麗麗3， 姜 敏3， 高 磊4， 金明磊2

(1.河北省滄州市人民醫(yī)院心內(nèi)科， 河北 滄 州 061000 2.河北省承德市中心醫(yī)院， 河北 承 德 067000 3.河北省定州市人民醫(yī)院， 河北 定 州 073000 4.河北醫(yī)科大學第一醫(yī)院， 河北 石家莊 050011)

目的：探討人生長激素釋放多肽(Ghrelin)基因多態(tài)性與原發(fā)性高血壓患者危險因素的關(guān)系及其機制。方法：2014年10月至2015年10月選取80例原發(fā)性高血壓患者進行研究，另選取80例健康體檢者為對照組，采用TaqMan-PCR法測定兩組Ghrelin基因多態(tài)性，并分析Ghrelin基因多態(tài)性與高血壓患者高危因素的關(guān)系。結(jié)果：與對照組相比，高血壓組患者CC、CA、AA型基因頻率分布為68. 75%、17.50%、13.75%，等位基因C、A頻率分別為0.185、0.875，對照組分別為18.75%、35.00%、46.25%，等位基因C、A頻率分別為0.125、0.815。Ghrelin基因CC型高血壓患者血清甘油三脂(TC)、低密度脂蛋白(LDL-C)、總膽固醇(TG)、收縮壓(SBP)、舒張壓(DBP)、腰臀比(WHR)、體質(zhì)量(BMI)水平顯著高于CA型及AA型(P＜0.05)，而HDL-C低于CA型及AA型(P＜0.05)。經(jīng)卡方及Logistic多因素分析，Ghrelin基因CC型與TC異常、LDL-C異常、SBP異常、DBP異常、BMI異常有關(guān)。結(jié)論：Ghrelin基因多態(tài)性與導致高血壓的高危因素，如TC異常、LDL-C異常、SBP異常、DBP異常、BMI異常等有關(guān)，因此，Ghrelin基因多態(tài)性可能參與原發(fā)性高血壓的發(fā)病機制。

Ghrelin基因多態(tài)性； 高血壓； 低密度脂蛋白； 發(fā)病機制

本研究將探討Ghrelin基因多態(tài)性與高血壓患者高危因素的關(guān)系及其機制，旨在為臨床高危高血壓患者臨床防治提供指導。

1 資料與方法

1.1 臨床資料：2014年10月至2015年10月選取80例原發(fā)性高血壓患者為高血壓組，納入標準：①我國2010年修訂的《高血壓防治指南》診斷標準[1]；②均為漢族人群；③均簽署知情同意書，愿意配合調(diào)查研究。排除標準：①近期應用過甲氨蝶呤、葉酸、茶堿、維生素B6、維生素B12等藥物；②合并腦卒中、糖尿病或心肝腎功能不全者；③惡性腫瘤或慢性腎病所致的繼發(fā)性高血壓者。男45例，女35例，年齡18～75歲，平均(48.8±3.4)歲；另選取80例健康體檢者為對照組，患者經(jīng)心、肝、腦、腎及血液系統(tǒng)等檢查證實為身體健康，男43例，女37例，年齡18～72歲，平均(48.2±3.6)歲，兩組性別、年齡比較無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)，具有可比性。

1.2 方 法

1.2.1 收集受試者臨床資料：記錄兩組性別、年齡、體質(zhì)量(BMI)、腰臀比、收縮壓(SBP)、舒張壓(DBP)。受試者于立體位測量腰圍及臀圍，腰圍、臀圍應用刻度為0.1cm的軟皮尺測量，腰臀比(WHR)=腰圍/臀圍。應用臺式血壓計測量患者血壓，受試者取坐位，于靜息狀態(tài)下向袖帶內(nèi)充氣，同時觸診肱動脈，待脈搏消失后，汞柱繼續(xù)升高20～30mmHg后緩慢放氣，聽到第一次聲響時為汞柱收縮壓，聲音消失后為汞柱舒張壓。

1.2.2 生化指標測定：空腹狀態(tài)下抽取兩組靜脈血，離心處理后應用全自動化生化分析儀測定兩組甘油三脂(TC)、低密度脂蛋白(LDL-C)、總膽固醇(TG)、高密度脂蛋白(HDL-C)。

1.2.3 Ghrelin基因多態(tài)性測定：①兩組患者均抽取靜脈血3mL，應用鹽析法提取DNA，待DNA溶解于TE溶液后，測定其在280nm下的分光光度植，并計算每個樣本濃度及純度，根據(jù)所需要的濃度將DNA原液稀釋至合適濃度工作液；②設計DNA引物：上游引物序列5’-GCTCCGGTAGGTCACG-3’；下游引物序列5’-CCTGGGTCAAGTGTCGGAG-3’；③PCR反應體系：分別在DNA樣本中加入2μL模板DNA，4μL上游引物，4μL下游引物，2μLdNTs，5μL10×PCR buffer，32.5μL，0.5μL Taq Polymerase；④PCR擴增條件：樣液在94℃中預變性5min，然后變性 45s，退火61℃ 45s，延伸72℃ 45s，末端延伸72℃ 5min，并在退火階段收集熒光信號。⑤采用熒光定量PCR儀測定TapMan探針上的FAM熒光信號。等位基因頻率=(2×純合子+雜合子)/(2×受體人數(shù))。按照Hardy-Weinberg平衡法對群體代表樣本進行分析。

1.3 統(tǒng)計學方法：基因型分布頻次及頻率應用χ2檢驗，計量資料中符合正態(tài)分布的數(shù)據(jù)應用數(shù)標準差(±s)表示，采用t檢驗，應用多元Logistic回歸分析Ghrelin基因多態(tài)性與高血壓危險因素的關(guān)系，P＜0.05具有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié) 果

2.1 高血壓與對照組基因型及頻次對比：與對照組相比，高血壓組患者CC、CA、AA型基因頻率分布為68. 75%、17.50%、13.75%，等位基因C、A頻率分別為0. 185、0.875，對照組分別為18.75%、35.00%、46.25%，等位基因C、A頻率分別為0.125、0.815，見表1。

表1 高血壓與對照組基因型及頻次對比n(%)

2.2 原發(fā)性高血壓患者不同基因型相關(guān)危險因素對比：Ghrelin基因CC型高血壓患者血清TC、LDL-C、TG、SBP、DBP、WHR、BMI水平顯著高于CA型及AA型(P＜0.05)，而HDL-C低于CA型及AA型(P＜0. 05)，CA型與AA型在各指標的比較上無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)，見表2。

表2 原發(fā)性高血壓患者不同基因型相關(guān)危險因素對比(s)

表2 原發(fā)性高血壓患者不同基因型相關(guān)危險因素對比(s)

基因型 TC (mmoL/L) TG (mmoL/L) LDL-C (mmoL/L) HDL-C (mmoL/L) SBP (mmHg)(mmHg) WHR BMI (kg/m) DBP CC型 5.26±0.88 4.89±0.70 4.42±0.69 0.98±0.85 158.34±0.69 88.93±.0.82 84.23±0.93 28.93±2.45 CA型 3.22±0.76 3.52±0.58 3.41±0.71 2.58±0.69 139.9±0.72 72.62±0.88 77.22±0.97 25.85±2.12 AA型 3.08±0.74 3.11±0.60 3.28±0.73 2.39±0.70 141.2±0.70 71.99±0.86 76.98±0.93 24.98±2.09 F 8.256 7.562 8.399 6.852 5.363 6.425 7.225 8.963 P 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000

2.3 Ghrelin基因多態(tài)性與相關(guān)危險因素的關(guān)系：以BMI＜24.0kg/m2為正常，≥24.0kg/m2為異常；以TC＜220mg/dl為正常，≥220mg/dl為異常；LDL-C＜105mg/ dL為正常，≥105mg/dL為異常，TG＜150mg/dl為正常，≥150mg/dL為異常，HDL-C＞55mg/dl，≤55mg/dl，以WHR(男/女＜0.95/0.8)為正常，WHR(男/女)≥0. 95/0.8為異常。以Ghrelin基因CC型基因型為因變量，以相關(guān)危險因素異常值為自變量進行Logistic多因素分析，Ghrelin基因CC型與TC異常、LDL-C異常、SBP異常、DBP異常、BMI異常有關(guān)(P＜0.05)，見表3。

3 討 論

血漿中Ghrelin主要由胃黏膜分泌，并可促進下丘腦中樞釋放促生長激素，從而發(fā)揮促進脂肪形成、調(diào)節(jié)攝食、增加營養(yǎng)物質(zhì)攝取等多方面作用[2]。近年發(fā)現(xiàn)，機體能量代謝水平的改變會影響Ghrelin分泌，在外周組織如冠狀動脈、主動脈、心肌及肺動脈組織中均表達Ghrelin受體，這提示Ghrelin可通過非生長激素依賴的方式調(diào)節(jié)心血管效應。Virdis等[3]表明，高血壓患者中血漿Ghrelin水平顯著高于正常人群，且Ghrelin水平與血壓水平呈正相關(guān)，這提示Ghrelin可能參與血壓調(diào)節(jié)。Gibas-Dorna等[4]研究指出，影響Ghrelin在高血壓中的作用主要與其基因啟動子區(qū)單核苷酸(Arg51Gln)上的A等位點向C等位點突變有關(guān)。Ghrelin中不同基因型的Arg51Gln C/A其對Ghrelin調(diào)控作用也不同，AA基因調(diào)控的Ghrelin具有舒張血管及維持血壓穩(wěn)定的作用，而CC基因調(diào)控的Ghrelin具有收縮血管及升高血壓的作用。AC基因型一般情況下不表達，但當外界一些不利因素刺激下可向CC基因轉(zhuǎn)變，從而起到收縮血管及升高血壓的作用。本研究中高血壓組患者Arg51Gln位點中CC型比例顯著高于對照組(P＜0.05)，從而表明Arg51Gln位點中CC型與高血壓的發(fā)生有密切的關(guān)系。

表3 Ghrelin基因多態(tài)性與相關(guān)危險因素的關(guān)系

為進一步了解Ghrelin不同基因型與高血壓患者相關(guān)代謝指標的關(guān)系，本研究測定了高血壓患者血脂、體質(zhì)量、腰臀比等相關(guān)指標，結(jié)果顯示，Ghrelin基因CC型高血壓患者血清 TC、LDL-C、TG、SBP、DBP、WHR、BMI水平顯著高于CA型及AA型(P＜0.05)，且經(jīng)Logistic多因素進一步分析可知，Ghrelin基因CC型與TC異常、LDL-C異常、SBP異常、DBP異常、BMI異常有關(guān)(P＜0.05)，表明Ghrelin基因多態(tài)性除了與血壓異常有關(guān)外，還與機體血脂代謝異常有密切的關(guān)系。從本實驗中可推出Ghrelin-Arg51Gln基因多態(tài)性對高血壓的可能作用機制如下：①高血壓的發(fā)生是由多因素共同參與的結(jié)果，該病發(fā)生除了與遺傳因素有關(guān)外，還與后天所在環(huán)境、飲食、生活習慣等因素有關(guān)。Ghrelin-Arg51GlnA/C可通過調(diào)節(jié)血脂代謝過程從而影響血壓水平。血脂代謝異常及紊亂是由遺傳因素與環(huán)境因素共同作用所致，由于血脂代謝紊亂會影響高血壓水平，因此可推測兩者是由相同的基因進行調(diào)控的，相互作用相互影響。血脂異常會增加血液粘稠度，使得血管管腔變窄，導致血流變慢，使得血壓升高。②血脂代謝紊亂會影響細胞膜結(jié)構(gòu)及膜上鈣離子轉(zhuǎn)運，影響細胞膜生化性質(zhì)，影響細胞膜流動性及鈣離子通道，破壞血管正常生理結(jié)構(gòu)，導致血壓升高。(3)血脂代謝紊亂會損傷血管內(nèi)皮細胞功能，并會影響脂質(zhì)過氧化代謝途徑，從而影響機體中NO及血管前列腺素生成，促使血栓烷、內(nèi)皮素等收縮血管性物質(zhì)大量釋放，導致血壓增加。

[1] 中國高血壓防治指南修訂委員會.中國高血壓防治指南2010[J].中華心血管病雜志，2011，39(7)：579～616.

[2] 張瑩麗，尹虹.Ghrelin與代謝綜合征[J].中華臨床醫(yī)師雜志(電子版)，2015，(7)：1198～1200.

[3] Virdis A，Duranti E，Colucci R，et al.Ghrelin restores nitric oxide availability in resistance circulation of essential hypertensive patients：role of NAD(P)H oxidase[J].Eur Heart，2015，36(43)：3023～30

[4] Gibas-Dorna M，Nowak D，Piatek J，et al.Plasma ghrelin and interleukin-6 levels correlate with body mass index and arterial blood pressure in males with essential hypertension[J]. Physiol Pharmacol.2015，66(3)：367～372.

The Relationship between Ghrelin Gene Polymorphism and Essential Hypertension in Patients with Risk Factors

LIU Bin， et al

(The People's Hospital of Cangzhou，Hebei Cangzhou061000，China)

Objective：To investigate the relationship between the human growth hormone releasing peptide(Ghrelin)and the essential hypertension.Methods：80 cases of patients with essential hypertension were studied and 80 cases of healthy were selected from October 2014 to October.The Ghrelin gene polymorphism assays of two groups were used with TaqMan-PCR method and Ghrelin gene polymorphism in patients with risk factors for hypertension were analyzed.Results：Compared with the control group，patients with hypertension CC，CA，AA genotype frequency distribution was 68.75%，17.50%，13.75%，allele C，A frequencies were 0.185，0.875，the control group were 18.75%，35.00%，46.25%，allele C，a frequencies were 0.125，0.815. Ghrelin gene CC type serum triglycerides in patients with hypertension(TC)，low density lipoprotein(LDLC)，total cholesterol(TG)，systolic blood pressure(SBP)，diastolic blood pressure(DBP)，waist-hip ratio (WHR)，body mass(BMI)were significantly higher than those of CA and AA genotype(P＜0.05)，whereas HDL-C and lower than the CA type AA type(P＜0.05).Chi square and Logistic multivariate analysis showed that the Ghrelin gene type CC was associated with TC abnormalities，LDL-C abnormalities，SBP abnormalities，DBP abnormalities，and BMI abnormalities.Conclusion：Ghrelin gene polymorphism and risk factors lead to high blood pressure，such as abnormal TC，LDL-C exception，SBP abnormality，DBP abnormality，BMI and abnormal，and therefore，Ghrelin gene polymorphism may be involved in essential hypertension pathogenesis.

Ghrelin gene polymorphism； Hypertension； Low-density lipoprotein； Pathogenesis

1006-6233(2017)01-0013-04

A【doi】10.3969/j.issn.1006-6233.2017.01.005

河北省科技支撐項目，(編號：ZL20140072)