黃芪注射液對(duì)慢性胰腺炎的治療作用

[摘要] 目的 探討黃芪對(duì)大鼠慢性胰腺炎的治療作用。方法 采用光度酶聯(lián)免疫分析法(ELISA)及比色法檢測胰腺正常組、對(duì)照組、干預(yù)組中的層粘連蛋白(LN)的含量及超氧化物歧化酶(SOD)的活性進(jìn)行比較分析，同時(shí)對(duì)胰腺組織進(jìn)行HE染色，觀察病理形態(tài)學(xué)改變。結(jié)果 胰腺纖維化組血清中LN的含量明顯增高，SOD的活性降低，干預(yù)組中LN含量較對(duì)照組降低，SOD活性較對(duì)照組升高。結(jié)論 黃芪注射液有改善大鼠胰腺纖維化的作用。

[關(guān)鍵詞] 黃芪注射液; 胰腺纖維化; 層粘連蛋白; 超氧化物歧化酶

[中圖分類號(hào)] R255.5 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1673-9701(2010)03-03-03

Therapeutic Effect of Astragalus Injection on Chronic Pancreatitis

GUO Qiang ZHANG Bingtai LI Maolan REN Hui

Department of General Surgery，the Second Hospital of Shanxi Medical University，Taiyuan 030001，China

[Abstract] ObjectiveTo investigate the therapeutic effect of Astragalus injection on rat chronic pancreatitis. MethodsThe laminin(LN)level and the superoxide dismutase(SOD) activity were detected in normal pancreas group(pancreas fibrosis group)，control group and intervention group by using enzyme immunoassay(ELISA) and colorimetric method，and the pancreatic tissue was stained by using HE and its pathological change was observed. ResultsThe serum LN level was significantly higher and the SOD activity was decreased in the pancreas fibrosis group. The serum LN level was lower and the SOD activity was higher in the intervention group compared with the control group. ConclusionAstragalus injection has the role in the improvement of rat pancreatic fibrosis.

[Key words]Astragalus injection; Pancreatic fibrosis;Laminin;Superoxide dismutase

慢性胰腺炎是由于膽道疾病或酒精中毒等因素導(dǎo)致的胰腺實(shí)質(zhì)進(jìn)行性損害和纖維化，常伴鈣化、假性囊腫及胰島細(xì)胞減少或萎縮。主要表現(xiàn)為腹痛、消瘦、營養(yǎng)不良、腹瀉或脂肪痢，后期可出現(xiàn)腹部包塊、黃疸和糖尿病等。其病理生理過程復(fù)雜，以胰腺內(nèi)成纖維細(xì)胞和細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)在胰腺組織內(nèi)過多沉積為其特征[1]。傳統(tǒng)的胰腺纖維化指標(biāo)是LN的含量升高及SOD活性降低。我們采用光度酶聯(lián)免疫分析法(ELISA)檢測胰腺正常組、對(duì)照組、黃芪注射液小劑量組、中劑量組、大劑量組中的LN的含量及SOD的活性進(jìn)行比較分析，以初步探討其對(duì)胰腺纖維化的治療作用。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

選用雄性Spraque-Dawley大鼠50只，清潔級(jí)，體重200～250g，由上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司提供，飼養(yǎng)于山西醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心。

1.2 主要試劑與藥物

三硝基苯磺酸(TNBS)為Sigma公司產(chǎn)品(批號(hào):107K5008)。黃芪注射液購于成都地奧九泓制藥廠。LN試劑盒購于武漢博士德生物工程有限公司。SOD試劑盒購自南京建成生物工程研究所。

1.3 方法

1.3.1 模型建立 SD大鼠隨機(jī)方法等分成5組，每組10只，分別為正常組、模型正常組、低劑量黃芪干預(yù)組(400mg/kg)、中劑量黃芪干預(yù)組(800mg/kg)、大劑量黃芪干預(yù)組(1600mg/kg)。除正常組外，其余4組大鼠術(shù)前禁食12h，胺碘酮(100mg/kg體重)腹腔注射麻醉，沿腹白線做正中切口，夾閉胰膽管近肝門端，通過恒流泵向十二指腸乳頭注射2%TNBS乙醇磷酸鹽緩沖液0.4mL，1h注完，關(guān)閉恒流泵后維持壓力10min，以防藥物回流，手術(shù)過程嚴(yán)格無菌操作[2]。為防止大鼠脫水，每天皮下注射生理鹽水2次，每次6mL，直至大鼠能自由飲水。術(shù)后禁食72h后給予常規(guī)飲食。于術(shù)后72h用不同劑量的黃芪肌肉注射至術(shù)后28d。

1.3.2 檢測指標(biāo)和方法 所有所有觀察對(duì)象抽取靜脈血，分離血清，置于-20℃低溫冰箱中備用。實(shí)驗(yàn)前將血清置室溫復(fù)溶，轉(zhuǎn)離心，取上清液進(jìn)行測定。采用光度酶聯(lián)免疫分析法(ELISA)檢測胰腺正常組、對(duì)照組、干預(yù)組中的LN的含量。SOD試劑盒采用黃嘌呤氧化酶法測其總活力。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS11.0統(tǒng)計(jì)軟件系統(tǒng)分析處理。各組間計(jì)量資料均采用(χ±s)表示。含量正常組和黃芪處理組的比較采用Dunnet t檢驗(yàn)，各個(gè)黃芪處理組之間的比較采用LSD-t檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 胰腺組織病理學(xué)改變

對(duì)照組大鼠胰腺明顯病理變化。模型組大鼠造模4周后，可見胰腺間質(zhì)炎性細(xì)胞浸潤，管周纖維組織增生，胰管增生擴(kuò)張，管周及胰腺小葉間和小葉內(nèi)纖維化伴炎癥細(xì)胞浸潤，局部腺體萎縮壞死，腺泡空泡樣變。干預(yù)組較模型組纖維化程度明顯減少。見圖1、表1。將五組大鼠胰腺組織病理切片進(jìn)行纖維化評(píng)分，發(fā)現(xiàn)模型組大鼠胰腺纖維化程度遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于干預(yù)組，有顯著差異。

2.2 胰腺血清中LN含量與SOD活性的變化

SD大鼠正常組與對(duì)照組比較，對(duì)照組發(fā)生明顯的胰腺纖維化，LN的含量明顯升高，SOD活性明顯降低。黃芪干預(yù)組中胰腺纖維化程度減輕，小中大劑量組均使LN含量降低(P<0.05)，SOD活性顯著升高(P<0.05)。 見表2。

2.3 黃芪干預(yù)組中各劑量組的療效

見圖2、3。

由圖2可以看出，小、中、大劑量組的干預(yù)均有療效，其中以大劑量組療效最為明顯。

3 討論

近年來，隨著膽道疾病發(fā)病率的上升，慢性胰腺炎的發(fā)病率亦呈現(xiàn)出上升的趨勢。目前，雖然我們對(duì)于膽道疾病的治療取得了很大的進(jìn)展，但對(duì)于慢性胰腺炎依舊缺乏有效的治療措施。慢性胰腺炎的臨床結(jié)果是胰腺外分泌和內(nèi)分泌功能的降低，但其病理生理基礎(chǔ)卻是胰腺的不斷纖維化[3]。胰腺纖維化的形成有多種細(xì)胞因素的參與，與氧自由基、脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物等密切相關(guān)，黃芪有抗脂質(zhì)過氧化、抗氧自由基的作用[4-5]。目前我們已經(jīng)通過動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證實(shí)，黃芪對(duì)肝臟的纖維化具有治療作用，而肝臟纖維化與胰腺纖維化在發(fā)病機(jī)制上類似，這為對(duì)慢性胰腺炎的治療提供了理論依據(jù)[6]。

LN屬結(jié)構(gòu)性蛋白，存在于基底膜的透明層中，在胰腺纖維化時(shí)沉積于胰腺血竇，使胰腺血竇毛細(xì)血管化，增加胰腺竇阻力，使胰腺血清中LN含量增高[7]，與胰腺纖維化密切相關(guān)。SOD是機(jī)體中抗氧自由基的關(guān)鍵酶類，對(duì)機(jī)體的氧化與抗氧化起著至關(guān)重要的作用，在胰腺中含量豐富，對(duì)胰腺抗氧自由基損傷有重要作用。

黃芪是扶正補(bǔ)氣的中藥，其主要成分是黃芪皂甙、黃芪多糖等，具有提高免疫功能，抗氧化、抗腫瘤等多種生物活性，亦有報(bào)道黃芪有抗肝、腎、肺纖維化作用[8-9]。黃芪主要成份是黃芪總黃酮(TFA)、黃芪總皂甙(TPA)和黃芪總多糖(TSA)。有報(bào)道表明黃酮類物質(zhì)抗氧化清除自由基的主要機(jī)理是酚輕基類基團(tuán)在與過氧化物作用時(shí)，通過提供氫原子，發(fā)生氧化還原反應(yīng)而發(fā)揮作用[10]。從Kitagawa等測定黃芪總皂甙的幾種分子結(jié)構(gòu)式可以看出，黃芪中的皂貳類成分為含有一個(gè)以上的酚輕基基團(tuán)的多環(huán)狀化合物，其結(jié)構(gòu)與黃酮類化合物類似，黃芪中總黃酮和總皂甙類成分清除自由基，是其結(jié)構(gòu)中的酚經(jīng)基基團(tuán)與自由基反應(yīng)而發(fā)揮功效。我國學(xué)者劉星諧等認(rèn)為黃芪總皂甙清除自由基作用的機(jī)理是由于含有以環(huán)黃芪醇為甙元的糖甙，這些糖甙與自由基發(fā)生反應(yīng)，阻止了新的自由基生成，從而抑制機(jī)體氧化應(yīng)激的作用，提高SOD活性抑制機(jī)體纖維化。

本實(shí)驗(yàn)通過研究不同濃度的黃芪注射液對(duì)大鼠慢性胰腺炎的干預(yù)，從而探討黃芪注射液對(duì)慢性胰腺炎的治療作用。大鼠胰腺組織病理形態(tài)學(xué)改變和膠原纖維染色分析結(jié)果均支持黃芪具有改善胰腺纖維化的作用。血清LN、SOD是反應(yīng)胰腺纖維化的重要指標(biāo)。大鼠慢性胰腺炎模型組中LN含量明顯增高，SOD活性明顯降低。分別用大、中、小三種劑量的黃芪對(duì)大鼠慢性胰腺模型進(jìn)行治療，經(jīng)治療后，三組均有療效，均使LN含量降低，SOD活性升高。其中以大劑量組療效最為明顯，使LN含量、SOD活性最為接近正常水平。以上均進(jìn)一步說明黃芪注射液可通過多途徑延緩胰腺纖維化的發(fā)生，有較好的預(yù)防效果，臨床應(yīng)用能較好地防止胰腺纖維化的發(fā)生發(fā)展，對(duì)慢性胰腺炎有較好的治療作用。

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(收稿日期:2009-11-05)