急性腦梗死患者體內(nèi)血小板CD62P和sTLT-1的表達(dá)水平

陸麗麗， 劉 丹， 龐春燕， 張 偉， 張廣煒

急性腦梗死患者體內(nèi)血小板CD62P和sTLT-1的表達(dá)水平

陸麗麗， 劉 丹， 龐春燕， 張 偉， 張廣煒

目的 大量研究表明血小板CD62P和sTLT-1能夠促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化性血栓的形成，因此我們檢測急性腦梗死患者體內(nèi)血小板CD62P和sTLT-1的表達(dá)水平，以作為評(píng)價(jià)動(dòng)脈粥樣硬化性血栓形成的功能指標(biāo)。方法 選擇急性腦梗死患者(發(fā)病時(shí)間≤7 d)102例作為病例組，同期選擇來我科就診的非急性腦梗死患者93例為對(duì)照組，采用流式細(xì)胞儀(flow cytometry,FCM)檢測血小板CD62P的表達(dá)水平，用酶聯(lián)免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)檢測血清中sTLT-1的表達(dá)水平。結(jié)果 急性腦梗死組的血小板CD62P和sTLT-1的表達(dá)水平均明顯高于對(duì)照組(P<0.01)，CD62P和sTLT-1的表達(dá)水平與急性腦梗死患者的神經(jīng)功能缺損程度及梗死灶體積呈正相關(guān)；CD62P和sTLT-1之間呈直線正相關(guān)(r=0.247，P<0.01)；多元Logistic回歸分析，CD62P和sTLT-1在校正其他相關(guān)危險(xiǎn)因素后[CD62P(%)OR值=1.102，95%CI：1.062～1.143，P<0.01；sTLT-1(pg/ml)OR值=1.004，95%CI：1.002～1.006，P<0.01]。結(jié)論 血小板CD62P和sTLT-1是腦梗死發(fā)病的危險(xiǎn)因素，可能是急性腦梗死患者體內(nèi)動(dòng)脈粥樣硬化性血栓形成的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。

急性腦梗死； 動(dòng)脈粥樣硬化性血栓形成； 血小板； CD62P； sTLT-1

動(dòng)脈粥樣硬化性血栓形成是目前公認(rèn)的腦梗死急性發(fā)病的主要原因，不穩(wěn)定的粥樣硬化斑塊被侵蝕發(fā)生破裂后，富含脂質(zhì)的核心和內(nèi)皮下膠原等物質(zhì)會(huì)激活血流中的血小板，活化的血小板通過變形、釋放顆粒內(nèi)容物及合成血管活性物質(zhì)等作用，招募血流中的白細(xì)胞粘附于血管內(nèi)皮損傷處，粘附的白細(xì)胞釋放炎性介質(zhì)，又可以加重內(nèi)皮細(xì)胞的損傷和釋放血小板活化因子。活化因子作為一種血管活性介質(zhì)又可促使炎細(xì)胞聚集和血小板的活化，如此反復(fù)導(dǎo)致局部血栓形成，阻塞血管影響組織供血，發(fā)生缺血性疾病。當(dāng)此過程發(fā)生于腦血管內(nèi)，就會(huì)引起腦血管的閉塞，局部腦組織失去血液的供應(yīng)而發(fā)生缺血壞死，出現(xiàn)相應(yīng)的臨床癥狀。

本實(shí)驗(yàn)涉及的指標(biāo)CD62P是表達(dá)于活化血小板表面的膜結(jié)合蛋白，是經(jīng)典的血小板活化指標(biāo)；髓樣細(xì)胞觸發(fā)受體樣轉(zhuǎn)錄因子-1(triggering receptor expressed on myeloid cells-like transcript 1，TLT-1)是儲(chǔ)存于血小板和巨核細(xì)胞α-顆粒內(nèi)的具有單一V形免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域的Ⅰ型孤兒受體，當(dāng)血小板被激活時(shí)，α-顆粒會(huì)與血小板膜融合使TLT-1轉(zhuǎn)移到血小板的表面，血小板表面的TLT-1會(huì)分泌一種可溶性的片段(sTLT-1)，并通過sTLT-1發(fā)揮作用。大量研究表明血小板CD62P和sTLT-1與動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生和發(fā)展有關(guān)，因此我們欲檢測急性腦梗死患者體內(nèi)血小板CD62P和sTLT-1的表達(dá)水平，探討其與急性腦梗死患者體內(nèi)動(dòng)脈粥樣硬化性血栓形成之間的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 研究對(duì)象 選擇急性腦梗死(發(fā)病時(shí)間≤7 d)患者102例作為病例組，男性66例，女性36例，平均年齡(62.03±8.95)歲。均符合1996年全國第四屆腦血管病學(xué)術(shù)會(huì)議修訂的動(dòng)脈粥樣硬化性腦梗死的診斷標(biāo)準(zhǔn)，且經(jīng)頭部CT或MRI檢查證實(shí)。排除標(biāo)準(zhǔn)：年齡≤30歲或≥90歲；有嚴(yán)重的肝腎功能損害；合并急性心肌梗死、心力衰竭；合并全身自身免疫性疾病、慢性炎癥、嚴(yán)重感染、腫瘤或傳染性疾病；有腦出血等出血史或出血傾向，血小板計(jì)數(shù)<100×109/L或>300×109/L；入院前2 w服用抗血小板聚集、抗凝藥物。同期選擇來我科就診的非急性腦梗死患者93例為對(duì)照組,男48例，女45例，平均年齡(59.61±11.26)歲。

1.2 方法與分組 (1)根據(jù)頭部CT或MRI病灶大小,腦梗死體積按Pullicino公式(長×寬×層數(shù))/2計(jì)算，將其分為大梗死組17例，病灶體積>10 cm3；中梗死組15例，病灶體積(4～10 cm3)；小梗死組70例，病灶體積<4 cm3。(2)根據(jù)美國國立衛(wèi)生院神經(jīng)功能缺損評(píng)分(NIHSS)標(biāo)準(zhǔn)在入院第一天進(jìn)行評(píng)分，分為輕度組44例(<4分)；中度組45例(4～10分)；重度組13例(>10分)。(3)所有入組患者均于入院后由護(hù)士急抽肘靜脈血4 ml置于全塑枸櫞酸鈉抗凝管中，在常溫環(huán)境中以2500 r/min離心5 min，吸取上層血漿收集于流式管內(nèi)，加入1%多聚甲醛的PBS液1 ml進(jìn)行固定(此過程必須控制在30 min內(nèi))，然后加入相應(yīng)抗體等處理后，在24 h內(nèi)用流式細(xì)胞儀檢測血小板CD62P的表達(dá)水平。另4 ml置于全塑真空干管內(nèi)，在常溫環(huán)境中以2500 r/min離心5 min，吸取上層血清放于-80 ℃冰箱保存待測，最后用ELISA檢測sTLT-1的表達(dá)水平。

2 結(jié) 果

2.1 兩組之間一般資料和臨床實(shí)驗(yàn)指標(biāo)的比較P值來自于獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，結(jié)果年齡、性別、血小板計(jì)數(shù)、TG、CHO、LDL的t檢驗(yàn)組間P值>0.05，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；SP、DP、空腹血糖、HDL、CD62P和sTLT-1的t檢驗(yàn)組間P值<0.05，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，結(jié)果(見表1)。

2.2 CD62P和sTLT-1的表達(dá)水平與梗死灶體積的關(guān)系 見1.2方法與分組(1)，ANOVA檢驗(yàn)組間P<0.05，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；組間兩兩比較示CD62P：P1和P2<0.05(P1小梗死組-中梗死組；P2小梗死組-大梗死組)；sTLT-1：P1、P2和P3<0.05(P1小梗死組-中梗死組；P2小梗死組-大梗死組；P3中梗死組-大梗死組)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，梗死灶越大，CD62P和sTLT-1的表達(dá)水平越高；其中小梗死組[70例，CD62P(%)=44.82±9.14；sTLT-1 (pg/ml)=530.60±155.88]；中梗死組[15例，CD62P(%)=49.93±9.20；sTLT-1(pg/ml)=600.75±152.90]；大梗死組[17例，CD62P(%)=54.41±8.61；sTLT-1(pg/ml)=735.95±137.65]。

2.3 CD62P和sTLT-1的表達(dá)水平與神經(jīng)功能缺損程度的關(guān)系 見1.2方法與分組(2)，ANOVA檢驗(yàn)組間P<0.05，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；組間兩兩比較示CD62P：P1和P2<0.05(P1輕度 -中度；P2輕度-重度)；sTLT-1：P1、P2和P3<0.05(P1輕度-中度；P2輕度-重度；P3中度-重度)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，神經(jīng)功能缺損程度越重，CD62P和sTLT-1的表達(dá)水平越高；其中輕度組[44例，CD62P(%)=42.31±8.54，sTLT-1(pg/ml)=522.61±151.48]；中度組[45例，CD62P(%)=49.76±9.14，sTLT-1(pg/ml)=577.84±163.71]；重度組[13例，CD62P(%)=54.68±7.30，sTLT-1(pg/ml)=743.60±141.07]。

2.4 Spearman等級(jí)相關(guān)分析 急性腦梗死患者體內(nèi)CD62P和sTLT-1的表達(dá)水平與神經(jīng)功能缺損程度呈正相關(guān)(CD62P：r=0.518,P<0.01；sTLT-1：r=0.407，P<0.01)；與梗死灶體積呈正相關(guān)(CD62P：r=0.429，P<0.01；sTLT-1：r=0.417，P<0.01)。

2.5 Pearson相關(guān)分析 急性腦梗死患者體內(nèi)CD62P與sTLT-1的表達(dá)水平呈正相關(guān)(r=0.247，P<0.01)。

2.6 將P<0.05的各變量行多元Logistic回歸分析 將單因素方差分析中P<0.05的各變量納入多元逐步Logistic回歸分析，與急性腦梗死明顯相關(guān)的變量有HDL、CD62P和sTLT-1，校正其他相關(guān)危險(xiǎn)因素后，CD62P(%)：(OR值=1.102，95%CI：1.062～1.143，P<0.01)；sTLT-1(pg/ml)：(OR值=1.004，95%CI：1.002～1.006，P<0.01)與急性腦梗死的發(fā)病明顯相關(guān)，可能是急性腦梗死患者體內(nèi)動(dòng)脈粥樣硬化性血栓形成的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。

表1 病例組和對(duì)照組的一般資料和臨床實(shí)驗(yàn)指標(biāo)對(duì)比

病例組與對(duì)照組比較*P<0.05，**P<0.01

3 討 論

動(dòng)脈粥樣硬化是一種慢性的血管病變，在動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展中，尤其是在粥樣硬化斑塊的破裂和血栓形成中血小板的活化起著至關(guān)重要的作用。動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生過程包括內(nèi)皮細(xì)胞的損傷、大量脂質(zhì)在內(nèi)膜的沉積、固有免疫和適應(yīng)性免疫反應(yīng)的增強(qiáng)、血管內(nèi)膜平滑肌細(xì)胞的增殖和細(xì)胞外基質(zhì)的重塑、動(dòng)脈粥樣硬化性斑塊的形成。血小板內(nèi)含致密顆粒和α-顆粒，顆粒內(nèi)含有能夠表達(dá)在血小板表面的膜結(jié)合蛋白和分泌到細(xì)胞外的可溶性蛋白，如纖維蛋白原、CD62P、TLT-1、5-羥色胺(5-HT)、sTLT-1和ADP等物質(zhì)，血小板的功能也是由這些不同的受體和介質(zhì)決定的，它們共同作用促進(jìn)血小板的活化、血小板-白細(xì)胞、血小板-內(nèi)皮細(xì)胞以及與其他炎性細(xì)胞之間的相互作用。

CD62P又稱為P-選擇素，是細(xì)胞粘附分子選擇素家族中的一員。正常情況下CD62P合成并儲(chǔ)存于血小板的α-顆粒和內(nèi)皮細(xì)胞的Weibel-Palade小體內(nèi)，當(dāng)機(jī)體發(fā)生炎癥反應(yīng)時(shí)，在組胺、凝血酶或補(bǔ)體的激活下CD62P會(huì)轉(zhuǎn)移到細(xì)胞表面，通過與白細(xì)胞表面的P-選擇素糖蛋白配體-1(P-selectin glycoprotein ligand-1,PSGL-1)結(jié)合，招募循環(huán)中的白細(xì)胞粘附于血管損傷處，進(jìn)而促進(jìn)炎癥反應(yīng)[1]。有研究表明[2]，CD62P在動(dòng)脈粥樣硬化的形成和發(fā)展中起重要作用，在腦梗死急性期的表達(dá)水平明顯高于對(duì)照組[3]且與疾病的嚴(yán)重程度有關(guān)[4]，是腦梗死發(fā)生的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，這與本實(shí)驗(yàn)的研究結(jié)果是一致的。

sTLT-1是血小板表面的TLT-1發(fā)生裂解而生成的是一種可溶性蛋白[5]，當(dāng)機(jī)體發(fā)生炎癥性疾病時(shí)(如敗血癥)，sTLT-1的表達(dá)水平會(huì)明顯增高，并通過促進(jìn)肌動(dòng)蛋白的聚合而促使血小板粘附于內(nèi)皮細(xì)胞上，因此，sTLT-1是動(dòng)脈粥樣硬化形成過程中的一個(gè)促進(jìn)因子[6]。Omar LE[7]等研究發(fā)現(xiàn)，sTLT-1在急性冠脈綜合征(acute coronary syndrome,ACS)患者體內(nèi)的表達(dá)水平明顯增高，且與P-選擇素的表達(dá)水平增加同步。這與我們的研究結(jié)果是一致的，急性腦梗死患者體內(nèi)sTLT-1的表達(dá)水平明顯高于對(duì)照組。sTLT-1與CD62P的表達(dá)水平呈正相關(guān)，且都是血小板的活化產(chǎn)物，因此我們認(rèn)為sTLT-1與CD62P一樣在血小板、白細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞或其他細(xì)胞之間起調(diào)節(jié)作用，是急性腦梗死病情嚴(yán)重程度的指標(biāo)，這也間接表明sTLT-1參與動(dòng)脈粥樣硬化性血栓的形成。

雖然有研究表明sTLT-1是通過Rac1/p38信號(hào)通路調(diào)節(jié)激動(dòng)蛋白的聚合[7]，參與斑塊形成和(或)動(dòng)脈粥樣硬化性血栓形成的病理生理過程。但是sTLT-1參與動(dòng)脈粥樣硬化性血栓形成的具體機(jī)制目前仍不清楚。

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[2]Hu SS,Zhang HG,Zhang QJ,et al.Circulating CD62P small microparticles levels are increased in hypertension[J].Int J Clin Exp Pathol,2014,7(8):5324-5326.

[3]Yip HK,Chen SS,Liu JS,et al.Serial changesin platelet activation in patients after ischemic stroke:Role of pharmacodynamic modulation[J].Stroke,2004,35(7):1683-1687.

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[5]Jessica M,Karina V,Jim G,et al.Soluble TLT-1 modulates platelet-endothelial cell interactions and actin polymerization[J].Blood Coagul Fibrinolysis,2010,21(3):229-236.

[6]Morales J,Villa K,Gattis J,et al.Soluble TLT-1 modulates platelet-endothelial cell interactions and actin polymerization[J].Blood Coagul Fibrinolysis,2010,21(3):229-236.

[7]Omar LE,Robert H,Jose RR,et al.Levels of soluble TREM-like transcript 1 in patients presenting to the emergency department with chest pain[J].Clin Appl Thromb Hemost,2015,21(1):30-34.

The levels of CD62P and Soluble TREM-Like Transcript 1 in patients with acute cerebral infarction

LULili,LIUDan,PANGChunyan,etal.

(DepartmentofNeurology,theFirstAffiliatedHospitalofBaotouMedicalCollege,Baotou014010,China)

Objective Recent studies suggest that the CD62P and soluble triggering receptor expressed on myeloid cells-like transcript 1 (sTLT-1) facilitate atherothrombosis.Therefore,We evaluated CD62P and sTLT-1 as functional measures of atherothrombosis in acute cerebral infarction (ACI).Methods The case group includes 102 patients with acute cerebral infarction from department of neurology (within the first 7 days after the onset of stroke),and the control group includes 93 patients with non acute cerebral infarction.The level of CD62P was detected by flow cytometry,the level of sTLT-1 was detected by enzyme linked immunosorbent assay.Results The level of CD62P and sTLT-1 were dramaticlly higher than the control group(P<0.01).They have obviously positive correlation between degree of neurofunction impairment and volume of infarction.CD62P and sTLT-1 are positive linear correlation(r=0.247,P<0.01).Multivariate analysis showed that CD62P and sTLT-1 are independent indicators of acute cerebral infarction[CD62P(%)OR=1.102,95%CI：1.062～1.143，P<0.01；sTLT-1 (pg/ml)OR=1.004,95%CI：1.002～1.006，P<0.01].Conclusion Platelet activity markers CD62P and sTLT-1 are the risk factor of may be functional measures of acute cerebral infarction and may be independent predictors of atherothrombosis in acute cerebral infarction.

Acute cerebral infarction; Atherothrombosis; Platelets; CD62P; sTLT-1

1003-2754(2017)02-0105-03

2016-10-23；

2016-11-28

內(nèi)蒙古科技大學(xué)包頭醫(yī)學(xué)院青苗計(jì)劃項(xiàng)目(No.2016H0906)

(內(nèi)蒙古科技大學(xué)包頭醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科，內(nèi)蒙古 包頭 014010)

陸麗麗，E-mail：823734635@qq.com

R743.3

A