淺析妊娠流產患者與染色體異常關系的研究

吳亞敏

【摘要】 目的 探析輔助生殖技術致妊娠的早期流產患者絨毛染色體異常情況。方法 400例孕早期流產患者， 其中320例自然妊娠孕早期自然流產患者作為對照組， 80例因輔助生殖技術致妊娠的孕早期自然流產患者作為觀察組。對兩組患者的絨毛細胞進行分離、染色體分析， 觀察兩組的對比結果。結果 觀察組患者中 <40歲的患者染色體正常例數為41例， ≥40歲的患者染色體正常例數為4例， 共45例， 染色體正常例數為35例；對照組患者中<40歲的患者染色體正常例數為181例， ≥40歲的患者染色體正常例數為11例， 共192例， 染色體正常例數為128例；兩組患者在不同年齡段（以40歲為界）染色體異常率對比， 差異具有統計學意義 （P<0.05）。結論 輔助生殖技術致妊娠早期流產與自然流產的發生率無明顯差異， 但絨毛細胞染色體異常與育齡婦女的年齡有明顯的關系， 年紀≥40歲的患者采用輔助生殖技術妊娠更容易導致妊娠早期流產。

【關鍵詞】 輔助生殖技術；妊娠早期；染色體異常

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2017.04.042

近年來， 助生殖技術（assisted reproductive technology， ART）廣泛用于治療不孕問題， 相關研究顯示[1]， 發達國家每年有≥3%的輔助生殖技術出生兒， 輔助生殖技術為不孕家庭帶來了福音。自然流產是一種人類優勝劣汰的自然選擇結果， 發生自然流產的幾率為15%， 在全部流產中占75%的比例， 導致自然流產的主要原因是染色體異常（夫妻染色體異常與胚胎染色體異常）。近30年來， 輔助生殖技術得到了高速發展， 但有相關報道指出[2， 3]， 輔助生殖技術致早期妊娠流產率較高， 為此， 本院對400例流產患者進行了絨毛細胞分離和染色體分析， 現做如下報告。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 選取2015年1月～2016年1月本院收治的孕早期流產患者400例， 將其中320例自然妊娠孕早期自然流產患者作為對照組， 80例因輔助生殖技術致妊娠的孕早期自然流產患者作為觀察組。觀察組患者年齡22～43歲， 平均年齡（33.6±3.3）歲， 孕周7～12周；對照組患者年齡25～44歲， 平均年齡（31.2±5.2）歲， 孕周7～12周。兩組患者一般資料比較， 差異無統計學意義（P>0.05）， 具有可比性。在告知兩組患者實驗過程及目的后， 均表示愿意參加實驗并簽署知情同意書， 實驗獲得了醫院倫理委員會批準同意。

1. 2 方法 先提取絨毛細胞， 對流產的患者進行子宮清宮術， 備好負壓吸引管， 清宮時嚴格遵守無菌操作規程， 采用負壓吸引管利用負壓原理， 吸附絨毛組織5～20 mg。將這5～20 mg絨毛組織作為標本， 放入生理鹽水中浸泡， 并立即送入中心實驗室備檢。標本送達后， 立對絨毛組織標本進行分離培養， 采用雙抗清洗法清洗標本， 去污物（血塊、蛻膜組織）， 保留典型的絨毛組織約10 mg， 將清洗后的標本放入離心管置入離心機進行離心操作， 離心結束后觀察管內分層， 去除上層的液體， 在下層滴入生物酶（膠原酶、胰酶）， 將標本放入保溫箱， 仔細觀察并記錄， 待出現絨毛散開現象時， 立即滴入母牛血清， 采用電子顯微鏡觀察絨毛細胞形態。當視野中出現成片狀細胞， 將標本放入新鮮的培養液中并滴入生物堿（秋水仙素）， 再次放置在保溫箱內， 放置時間為4 h， 然后去掉上層清夜， 將標本置入水浴箱， 2 h后取出， 將標本放入離心機再次離心， 將離心后的標本去上清液制成懸液， 通過萊卡顯微鏡進行觀察， 選擇兩名醫生同時讀標本玻片， 每例計算20個分裂象， 分析2個核型（嵌合體加倍計數）。

1. 3 統計學方法 采用SPSS13.0統計學軟件進行統計分析。計量資料以均數±標準差（ x-±s）表示， 采用t檢驗；計數資料以率（%）表示， 采用χ2檢驗。P<0.05表示差異具有統計學意義。

2 結果

觀察組患者中 <40歲的患者染色體正常例數為41例， ≥40歲的患者染色體正常例數為4例， 共45例， 染色體正常例數為35例；對照組患者中<40歲的患者染色體正常例數為181例， ≥40歲的患者染色體正常例數為11例， 共192例， 染色體正常例數為128例；兩組患者在不同年齡段（以40歲為界）染色體異常率對比， 差異具有統計學意義 （P<0.05）。見表1。

3 討論

輔助生殖技術是治療不孕不育的一種手段， 有體外受精-胚胎移植（IVF-ET）、卵子體外成熟（IVM）、人工受精（AI） 等形式[4]。根據WTO的相關數據顯示[5-9]， 我國的不孕癥發病率高達15%， 傳統的治療遠遠不能滿足日益增長的不孕不育患者的治療需要。

自然流產是妊娠過程中常見的并發癥， 而染色體異常則是自然流產的主要原因之一， 包括夫妻染色體異常和胚胎染色體異常[10-12]。夫婦染色體異常常見的有平衡易位和羅伯遜易位， 胚胎染色體異常常見的有三倍體、多倍體及染色體平衡易位、嵌合體等。與自然流產相比， 輔助生殖技術妊娠不增加妊娠早期流產率， 但是與流產孕婦的年齡存在著一定的關系。本研究通過對流產的患者進行子宮清宮術， 清宮時采用負壓吸引管利用負壓原理， 取出絨毛組織5～20 mg作為實驗標本， 將其放入生理鹽水中浸泡， 然后對絨毛組織標本進行分離培養， 采用雙抗清洗法清洗標本， 去除血塊及蛻膜組織， 保留典型的絨毛組織， 進行離心操作， 觀察標本現象。發現自然妊娠孕早期自然流產患者的絨毛細胞染色體異常率與輔助生殖技術致妊娠早期自然流產患者的絨毛細胞染色體異常率無明顯差異（P>0.05）， 但是不同年齡間差異具有統計學意義（P<0.05）。

相關研究顯示[2]， 輔助生殖技術能影響表觀遺傳（印記基因）的調控， 影響胚胎植入和胎兒生長等， 表觀遺傳學方面的異常能使胚胎停育， 基因印記缺陷會導致早期妊娠的不穩定易發生流產[1]。控制性招促排卵過程中， 大劑量促性腺激素的使用， 可能是引起配子及胚

胎印記異常， 輔助生殖技術實施時間正處于印跡重建的窗口期， 運用于當中的操作會對配子及胚胎的甲基化狀態發生一定的影響。

本文研究結果顯示， 觀察組患者中 <40歲的患者染色體正常例數為41例， ≥40歲的患者染色體正常例數為4例， 共45例， 染色體正常例數為35例；對照組患者中<40歲的患者染色體正常例數為181例， ≥40歲的患者染色體正常例數為11例， 共192例， 染色體正常例數為128例；兩組患者在不同年齡段（以40歲為界）染色體異常率對比， 差異具有統計學意義（P<0.05）。其中觀察組和對照組流產孕婦中年齡越大其染色體異常率明顯越高， 這是一種母齡效應， 首先高齡本身就是一種妊娠高危因素， 不論是自然妊娠還是輔助生殖技術妊娠， 都增加流產的風險。隨著年齡的增長， 機體生理功能也發生一定程度的退化， 女性尤其體現在生殖系統方面， 卵子發生衰老， 衰老的卵子影響染色體間的相互關系和分裂行動， 導致染色體融合。卵巢功能退化， 可能導致雌激素水平下降， 會促使卵泡紡錘體老化， 影響有絲分裂的正常進行。自然妊娠和輔助生殖技術獲得妊娠， 胚胎染色體異常都是早期妊娠流產的主要原因[13-16]， 因此， 對發生了自然流產患者進行流產染色體遺傳學檢查有重要意義。

綜上所述， 輔助生殖技術并不增加妊娠早期流產胚胎染色體異常的發生率， 但絨毛細胞染色體異常與育齡婦女的年齡有明顯的關系， 年紀≥40歲的患者采用輔助生殖技術妊娠更容易導致妊娠早期流產。

參考文獻

[1] 孔舒， 賴煒強， 衛冠輝， 等. 輔助生殖技術致妊娠的早期流產絨毛染色體異常分析. 廣東醫學， 2015， 36（17）：2722-2724.

[2] 段程穎， 李紅， 劉敏娟， 等. 輔助生殖技術治療后自然流產胚胎的遺傳學分析及其臨床效應. 國際生殖健康/計劃生育雜志， 2014（3）：162-164.

[3] 李躍萍， 徐雯， 黎明紅， 等. 輔助生殖技術治療后孕早期自然流產的絨毛細胞染色體分析. 昆明醫科大學學報， 2011， 32（5）：50-53.

[4] 李躍萍， 金松， 胡春霞. 自然妊娠與ART妊娠孕早期自然流產的絨毛細胞染色體分析. 中國婦幼保健， 2013， 28（23）：3819-3822.

[5] 董毅飛， 張征， 彭海英， 等. 3505例不育癥患者細胞遺傳學分析及其與輔助生殖技術臨床結局的關系.武漢大學學報（醫學版）， 2012， 33（5）：742-745.

[6] 孔舒， 賴煒強， 衛冠輝， 等. 輔助生殖技術致妊娠早期流產的絨毛細胞遺傳學分析. 中國優生與遺傳雜志， 2015（11）：48-50.

[7] 董自江， 盧守蓮， 孫麗洲， 等. 輔助生殖妊娠流產與自然妊娠流產絨毛核型分析比較. 山東醫藥， 2013， 53（41）：78-80.

[8] 邵小光， 熊曙康， 馮麗云， 等. 輔助生殖技術中的早期流產胚胎染色體分析. 現代婦產科進展， 2002， 11（4）：274-276.

[9] 吳彤華， 尹彪， 朱元昌， 等. 輔助生殖和自然妊娠中早期自然流產胚胎染色體數目異常的研究. 生殖與避孕， 2013， 33（10）： 658-664.

[10] 郭楠， 劉雨生， 周桂香， 等. 129例自然妊娠與ART術后妊娠早期流產胎兒絨毛染色體核型分析. 安徽醫科大學學報， 2013， 48（2）：163-166.

[11] 張燕， 張鳳， 周亞東， 等. 自然妊娠和ART妊娠早期流產絨毛細胞遺傳學檢查的臨床應用價值. 南京醫科大學學報（自然科學版）， 2012（7）：937-941.

[12] 王磊， 邵小光， 李曉霞， 等. ICSI妊娠后流產與自然妊娠流產的絨毛染色體分析. 中國婦幼保健， 2008， 23（30）：4275-4276.

[13] 高瑞花， 陳雷寧， 倪郝， 等. ART中自然流產后胚胎染色體異常的初步研究. 廣東醫學， 2010， 31（19）：2486-2488.

[14] 胡曉東， 尹彪， 朱元昌， 等. 女性年齡與早期自然流產胚胎染色體數目異常的關系. 生殖與避孕， 2014， 34（9）：735-741.

[15] 潘麗華， 韓華， 賈艷敏， 等. 自然妊娠和輔助生殖技術妊娠孕婦胚胎停育絨毛染色體異常的研究. 寧夏醫科大學學報， 2014， 36（12）：1353-1355.

[16] 王厚照， 馬芳芳. ART術后妊娠與自然妊娠自然流產的絨毛細胞染色體分析. 中國優生與遺傳雜志， 2015（2）：23-24.