肝細胞癌中RhoE和基質金屬蛋白酶-9的表達及意義

丁 峰 楊 夙 王 巍 白 光

(錦州醫科大學附屬第一醫院普外肝膽微創外科，遼寧 錦州 121001)

肝細胞癌中RhoE和基質金屬蛋白酶-9的表達及意義

丁 峰 楊 夙1王 巍 白 光

(錦州醫科大學附屬第一醫院普外肝膽微創外科，遼寧 錦州 121001)

目的 探討肝細胞癌中RhoE和基質金屬蛋白酶(MMP)-9的表達及其臨床意義。方法 57例肝細胞癌患者的臨床資料及術后蠟塊組織作為觀察組，選擇距腫物邊緣>3 cm的正常肝組織32例作為對照組。應用免疫組化方法檢測兩組RhoE和MMP-9的表達。結果 兩組RhoE和MMP-9的表達有統計學差異。觀察組RhoE和MMP-9的表達與腫瘤的脈管累犯密切相關，RhoE的表達與腫瘤數量密切相關，MMP-9的表達與轉移密切相關。相關分析顯示觀察組RhoE和MMP-9具有負相關性。結論 肝細胞癌中RhoE低表達、MMP-9高表達對腫瘤的形成和進展有一定作用。RhoE和MMP-9可能有一定的協同作用。

肝細胞癌；RhoE；基質金屬蛋白酶(MMP)-9

肝細胞癌的病因涉及因素較多，轉移相關基因在腫瘤中常高表達〔1〕。RhoE為Rnd家族成員之一，參與細胞調節骨架重組、細胞生長、增殖和轉移〔2，3〕。RhoE能夠抑制RhoA下游重要效應因子Rho相關激酶1活性，從而抑制細胞骨架蛋白重組，影響細胞的極化和遷移能力〔3〕。基質金屬蛋白酶(MMP)-9在惡性腫瘤中常高表達，尤其在高轉移潛能的腫瘤中表達更高〔4〕。MMP-9高表達可以引起基底膜的溶解和細胞外基質的降解，使腫瘤轉移的屏障消失，引發腫瘤細胞遷移〔5〕。本文擬探討肝細胞癌中RhoE和MMP-9的表達及其臨床意義。

1 材料與方法

1.1 一般資料 2013年1月至2015年12月我院診斷為肝細胞癌并行手術治療的患者57例作為觀察組。術后均常規留取蠟塊組織，年齡40～71歲，平均(56.7±6.9)歲，其中男32例，女25例。均按WHO中的標準明確并分型。選擇上述病例中距腫物邊緣>3 cm的正常肝組織32例作為對照組，年齡43～65歲，平均(54.5±5.8)歲，其中男16例，女16例。兩組常規資料無明顯差異，具有可比性。

1.2 RhoE和MMP-9的檢測 RhoE和MMP-9的檢測均應用免疫組化SP法，行二氨基聯苯胺(DAB)染色，操作均由同一技師完成，嚴格按實驗步驟進行，做好質控工作。

1.3 RhoE和MMP-9結果的判定 RhoE和MMP-9陽性均定位于細胞質中，以染成淺黃色至深棕色為陽性細胞，先在低倍鏡下選擇上皮細胞染色集中的區域(熱點區)，選擇3個400倍視野計算陽性率，取平均值，以陽性細胞<10%為陰性，≥10%為陽性。

1.4 統計學處理 應用SAS6.12軟件進行χ2檢驗或線性相關分析。

2 結 果

2.1 兩組RhoE和MMP-9陽性率的比較 觀察組和對照組RhoE〔23例(40.35%)、30例(93.75%)〕和MMP-9的陽性率〔35例(61.40%)、1例(3.13%)〕差異顯著(χ2=24.260 8,28.297 0,均P<0.000 1)。

2.2 觀察組中不同臨床特征患者RhoE和MMP-9表達陽性率的比較 觀察組RhoE和MMP-9的表達與腫瘤的脈管累犯密切相關，RhoE的表達與腫瘤數量密切相關，MMP-9的表達與淋巴結轉移密切相關。見表1。

表1 觀察組中不同臨床特征患者RhoE和 MMP-9表達陽性率的比較〔n(%)〕

2.3 觀察組RhoE和MMP-9的相關性 RhoE和MMP-9呈負相關(r=-0.45，P=0.045 1)。

3 討 論

肝細胞癌常見的病因學因素包括肝炎病毒的感染。腫瘤形成后其大體特點隨著腫瘤的大小和有無肝硬化而變化〔6〕。多數與肝硬化有關的腫瘤趨向于呈膨脹性生長，伴有纖維包膜和腫瘤內分隔，而無肝硬化的腫瘤趨向于呈巨塊型和無包膜。不同程度的浸潤性生長、門靜脈瘤栓和肝內轉移在進展期腫瘤很常見。部分情況下，大量的微小腫瘤結節廣泛分布于肝。肝細胞癌的一個特點是侵犯血管，尤其是門靜脈，肝外轉移多為血行性的，肺是最常受累的器官，局部淋巴結轉移常見，而遠處淋巴結則很少累及。因此探討與轉移相關蛋白的表達有一定價值〔7〕。MMPs家族是與轉移相關的一組基因和表達的蛋白，是一組鋅離子依賴性內肽酶，其在正常機體中表達較少或低表達，當病變發生時，尤其是進展期腫瘤性病變形成時，家族中的部分成員分泌增多，幾乎能降解細胞外基質的所有成分〔8〕。MMP-9作用主要是針對Ⅳ型膠原、層黏連蛋白和彈性硬蛋白等，使細胞外基質的結構和形態出現明顯變化，使腫瘤轉移的屏障受到破壞，腫瘤細胞易于遷移〔9〕。也有研究認為MMP-9的作用可能更加具有多元性，如對細胞增殖的調控、對血管生成因子的激活、對間質血管生成的促進作用等〔10〕。RhoE又稱為Rnd3，是Rho家族的主要成員之一，其分子結構與其他Ras鳥苷酸結合蛋白相同，只有一條多肽鏈，屬于單體G蛋白，RhoE的氨基酸序列高度保守，但是32、79、81位點的氨基酸序列與傳統的小G蛋白相比發生突變，并且含有較長的羧基端和氨基端〔11，12〕。近來研究認為RhoE可以誘導細胞發生改變、抑制細胞的增殖、調節細胞的遷移能力及細胞凋亡〔13〕。也有研究認為RhoE可以調節細胞的分化過程〔14〕。

RhoE在腫瘤中低表達，起抑癌基因的作用，RhoE可能通過對肝細胞癌的增殖進行抑制而發揮作用。研究認為RhoE雖然可以結合GTP，卻并沒有GTP 酶活性從而不能水解GTP，這種特性賦予RhoE許多不同于Rho蛋白家族其他成員的獨特功能〔15〕，例如通過調控肌動蛋白細胞骨架重組來增強細胞的運動能力和腫瘤細胞的遷移及侵襲能力〔16，17〕。而MMP-9高表達，起癌基因樣的作用，對腫瘤的侵襲有促進作用。本文結果提示RhoE和MMP-9參與腫瘤的脈管侵犯及脈管播散，促進腫瘤進展。RhoE與腫瘤的播散有關，尤其是肝內的播散及肝內的侵襲性生長相關。MMP-9是轉移相關的促進蛋白，促進腫瘤進展。本文結果提示RhoE和MMP-9具有一定的協同作用，也提示RhoE在正常肝組織中高表達時，可以在一定程度上抑制MMP-9的分泌，當腫瘤形成時，RhoE表達下降或丟失，對MMP-9分泌的抑制作用可能減弱或直接促進腫瘤細胞產生MMP-9，進而使細胞外基質形成降解，腫瘤轉移的屏障減弱或消失，細胞易于遷移，形成轉移灶〔18〕。MMP-9高表達時還可以引起間質的血管生成，使腫瘤的血供豐富，腫瘤細胞繁殖能力增強，腫瘤細胞生長活躍〔19，20〕。

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〔2015-12-11修回〕

(編輯 杜 娟)

白 光(1959-)，男，教授，主要從事微創肝膽胰脾手術研究。

丁 峰(1981-)，男，博士在讀，主治醫師，主要從事微創肝膽胰脾手術研究。

R735.7

A

1005-9202(2017)04-0916-02；

10.3969/j.issn.1005-9202.2017.04.059

1 心腦血管外科