HPLC法測定肝達康膠囊中芍藥苷的含量

黨貴玲 董蕙 杜洪亮 張文世 張景平 張曉雪

130062吉林省醫療器械檢驗所(長春)1

130051長春市中心醫院2

HPLC法測定肝達康膠囊中芍藥苷的含量

黨貴玲1董蕙1杜洪亮1張文世1張景平1張曉雪2

130062吉林省醫療器械檢驗所(長春)1

130051長春市中心醫院2

目的：建立肝達康膠囊中芍藥苷含量的高效液相檢測方法。方法：Agilent HC-C18柱；乙腈-水(15：85)為流動相；檢測波長230 nm；柱溫30℃；流速0.8 mL/min。結果：芍藥苷進樣量在0.072 7～0.654 μg范圍內峰面積積分值與進樣量呈良好線性關系，平均加樣回收率99.4%。結論：該方法易于操作，結果準確，重現性良好，可用于肝達康膠囊質量控制。

高效液相色譜法；肝達康膠囊；芍藥苷

肝達康膠囊系具有疏肝健脾、化瘀通絡功能的復方制劑，用于肝郁脾虛血瘀所致的脅痛腹脹、脅下痞塊、疲乏納差、大便溏稀及慢性乙型肝炎見上述癥狀者。收載于國家藥品標準[1]，原標準中白芍的含量測定，供試品前處理步驟十分繁瑣。本研究對供試品制備方法進行修改，未經正己烷脫脂和中性氧化鋁柱凈化的樣品仍可以得到較好的色譜分離，且含量測定準確度較原方法高，為肝達康膠囊質量標準的改進積累了實驗數據。

儀器與試藥

島津UV2550紫外可見分光光度計；Agilent 1100 series高效液相色譜儀；試劑：乙腈為色譜純，水為純化水，其他試劑均為分析純；芍藥苷對照品，批號111736-201035，購自中國藥品生物制品檢定所。樣品為肝達康膠囊3批(批號：1003001、1005001、1007001)。

含量測定

色譜條件：色譜柱：Agilent HC-C18 (250×4.6 mm，5 μ)；流動相為乙腈-水(15:85)；檢測波長230 nm；柱溫30℃，流速0.8 mL/min。理論塔板數以芍藥苷峰計算，應不得低于3 500。

溶液的制備：①對照品溶液制備：取芍藥苷對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每l mL中含35 μg的溶液。②供試品溶液制備：取本品裝量差異項下的內容物，研細，取0.6 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70%甲醇50 mL，稱定重量，超聲處理30 min(功率250 W，頻率50 Hz)，放冷，再稱定重量，用70%甲醇補足減失的重量，濾過，取續濾液，即得。

測定方法：吸取對照品及供試品溶液各10 μL，注入液相色譜儀進行測定。

空白試驗：采用相同的工藝制成無芍藥苷的陰性對照品，采用相同的方法進行測定，測定結果顯示，在芍藥苷色譜峰相應保留時間處，未檢測出干擾峰，見圖1。

線性關系考察：取芍藥苷對照品適量，加甲醇制成每1 mL含0.075 3 mg的溶液(純度96.5%)。精密吸取上述溶液1 μL、3 μL、5 μL、7 μL、9 μL，分別注入液相色譜儀。以峰面積為縱坐標，對照品進樣量為橫坐標繪制標準曲線。測得回歸方程Y=1 466.85X+24.88(r= 0.999 4)；說明芍藥苷進樣量在0.072 7～0.654 μg范圍內呈良好的線性關系。

圖1 HPLC色譜圖

表1 回收率試驗結果

穩定性試驗：取供試品溶液10 μL (批號：1003001)，分別在0 h、12 h、15 h、63 h，依法測定，按芍藥苷面積計算RSD為0.64%，結果未發生明顯變化，表明供試品溶液穩定。

精密度試驗：取同一供試品溶液(批號：1003001)，連續進樣6次，測得峰面積積分值RSD為0.69%，結果表明，本方法所用儀器精密度良好。

重復性試驗：取同一供試品(批號：1003001)6份，依法獨立測定，結果芍藥苷平均含量3.432 mg/g，RSD 0.60%，說明可重復性良好。

回收率試驗：取經同法測定的已知含量的樣品(批號：1003001，含量3.432 mg/g)6份，每份0.3 g，精密加入芍藥苷對照品溶液(每1 mL含芍藥苷0.016 7 mg) 50 mL，依法測定，計算回收率，測定結果見表1。

樣品含量測定：依法測定樣品3批，批號為1003001、1005001、1007001，含量分別為1.03 mg/粒、1.12 mg/粒、1.06 mg/粒。

討論

選擇色譜柱：該項試驗性研究考察了3根色譜柱：Luna C18(4.6×250 mm，5 μm)柱；Venusil C18(4.6×250 mm，5 μ m)柱；Agilent Extend C18(4.6×250 mm，5 μm)柱。在上述色譜條件下，所得色譜峰皆為正態峰，柱效分別為13 384、4 473、3 535，3根色譜中測得含量結果分別為1.034 mg/g、1.030 mg/g、1.039 mg/g，RSD 0.44%，利用以上3根色譜柱都能夠將芍藥苷分離，并且3根色譜柱測定出的含量差異無統計學意義，說明該色譜系統下測定芍藥苷并無色譜柱選擇性。

理論塔板數選擇：中國藥典白芍項下規定理論塔板數規定為2 000[2]，考慮到本品為中成藥，成分較藥材復雜，根據選用3根色譜柱測試結果，理論板數為3 535時，芍藥苷能與相鄰峰完全分離，故參照藥典和實驗實際情況，規定理論塔板數以芍藥苷峰計算，應不得低于3 500。

本研究分別用原標準和修改后的標準考察了3批肝達康膠囊，結果原標準測定為0.82 mg/粒、0.88 mg/粒、0.83 mg/粒，新方法測定結果高于原方法，且較原方法簡便易行，準確度高，重現性好，可用肝達康膠囊的質量控制。

[1]國家藥典委員會.國家食品藥品監督管理局國家藥品標準[S].第61冊,2008:61-68.

[2]國家藥典委員會.中國藥典[S].北京:中國醫藥科技出版社,2010.

Determination of paeoniflorin in liver Dakang capsules by HPLC

Dang Guiling1,Dong Hui1,Du Hongliang1,Zhang Wenshi1,Zhang Jingping1,Zhang Xiaoxue2
Medical Equipment Inspection Institute of Jilin Province(Changchun City)1300621
The Central Hospital of Changchun City 1300512

Objective:To establish a high performance liquid chromatography method for detection of paeoniflorin content in liver Kang capsule.Methods:Agilent HC-C18 column and acetonitrile water(15:85)as mobile phase,the detection wavelength was 230 nm and the column temperature was about 30℃;the flow rate was 0.8 mL/min.Results:There was a good linear relationship between the peak area integral value and the amount of sample in the range of 0.072 7 to 0.654 μg.The average recovery rate was about 99.4%.Conclusion:This method is easy to operate,accurate,with good reproducible,and it can be used for the quality control of liver Kang capsule.

High performance liquid chromatography;Liver Kang capsule;Herbaceous peony

10.3969/j.issn.1007-614x.2017.6.3