吸波面積法測定烏頭注射液中堿性物質的含量

楊霖，范哲賢，李孝棟（福建中醫藥大學藥學院，福建福州350122）

吸波面積法測定烏頭注射液中堿性物質的含量

楊霖，范哲賢，李孝棟
（福建中醫藥大學藥學院，福建福州350122）

目的測定烏頭注射液中堿性物質的含量，考察吸波面積法的可行性。方法以烏頭堿為對照品，用吸波面積法獲得烏頭注射液提取物中的堿性物質在200～600 nm波長下的吸光度-波長曲線下面積，計算含量。結果線性方程為：Y＝0.14542 X＋3.2404，r＝0.9993，平均加樣回收率為109.08%，RSD為1.63%，3批樣品平均含量為4 502.560 μg／mL。結論吸波面積法可用于烏頭注射液堿性物質的含量測定。

烏頭注射液；吸波面積法；烏頭注射液；堿性物質；含量測定

前期研究表明吸波面積和中藥復方中整體成分的總濃度呈正比［1-7］，本實驗采用吸波面積法測定烏頭注射液中堿性物質的含量。

1 材料

1.1 儀器TU-1901雙光束紫外-可見分光光度計（北京普析通用儀器有限責任公司）；AR-2140十萬分之一電子天平（梅特勒-托利多儀器上海有限公司）；VXH-3型微型旋渦混合器（上海躍進醫療器械廠）；TDL-4低速臺式離心機（上海安亭科學儀器廠）；HH-2型數顯恒溫水浴鍋（國華電器有限公司）。

1.2 試藥烏頭注射液（中藥制劑，實驗室自制）；烏頭堿對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號：110720-200410，質量分數≥98%）；其它試劑為分析純。

2 方法與結果

2.1 烏頭注射液的制備取川烏50.02 g，草烏50.01 g，粉碎，用3倍量乙醇冷浸提取2次，每次8 h，合并乙醇提取液，備用。藥渣加5倍量水（用0.1 mol／L的鹽酸調pH至4～5）煎煮3次，每次1 h，合并煎液，濾過，濾液濃縮至200 mL，加入乙醇提取液，攪勻，放置24 h，濾過，回收乙醇并濃縮至無醇味，加水至200 mL（用0.1 mol／L的鹽酸調pH至3），煮沸1 h，冷卻，濾過，用氫氧化鈉調節pH值至6.5～7.0，加入0.15%活性炭，煮沸10 min，濾過，加注射用水至200 mL，灌封，滅菌，即得。

2.2 對照品溶液的制備稱取烏頭堿對照品5 mg，精密稱定，置25 mL瓶中，加三氯甲烷溶解，定容，即得濃度為200 μg／mL對照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備精密移取烏頭注射液1 mL，用10%氨水調pH值至10～11，靜置，加4 mL三氯甲烷，渦旋2 min，3 800 r／min離心10 min，取三氯甲烷層，即得供試品溶液。另取注射用水1 mL，同法操作，即為空白參比溶液。

2.4 全波長掃描圖取對照品溶液與供試品溶液，在紫外200～600 nm波長下進行掃描，得全波長掃描圖譜，結果見圖1、圖2。

2.5 標準曲線的制備精密移取烏頭堿對照品溶液0.25、0.5、1、1.5、2、3、5 mL于5 mL瓶中，加三氯甲烷定容至刻度，即得質量濃度梯度的對照品溶液：10、20、40、60、80、120、200 μg／mL。以三氯甲烷作空白對照，在200～600 nm波長下進行紫外掃描，用Origin 8.0軟件計算吸波面積。以吸波面積為縱坐標（Y），質量濃度為橫坐標（X），建立烏頭堿線性方程：

圖1 對照品紫外全波長掃描圖

圖2 供試品紫外全波長掃描圖

結果表明，烏頭堿在10～200 μg／mL呈良好的線性關系。

2.6 精密度試驗取80 μg／mL的烏頭堿對照品溶液，在200～600 nm波長下連續測定6次，RSD為1.05%，表明儀器精密度良好。

2.7 重復性試驗取烏頭注射液樣品，按2.3項操作，分別制得6份，于200～600 nm波長下進行紫外掃描，RSD為2.36%，表明該方法的重復性良好。

2.8 穩定性試驗取烏頭注射液樣品，按2.3項操作，在0、2、4、6、8、10 h進行紫外掃描，RSD為2.98%，表明供試品溶液在10 h內穩定性良好。

2.9 加樣回收率試驗取烏頭注射液樣品溶液，加入烏頭堿對照品303 μg，混勻，按2.3項操作，制得6份，在200～600 nm波長下掃描，計算加樣回收率和RSD值，結果見表1。平均加樣回收率為109.08%，RSD為1.63%。

2.10 樣品含量測定取3批樣品測定烏頭注射液中堿性物質的含量，結果見表2。

3 討論

渦旋能使溶劑與溶質混合更充分，有利于堿性物質的提取［8］。在吸波面積法測定中，烏頭注射液供試品溶液在進行紫外掃描時，其在241 nm處的A值大于10，故利用移液管精密吸取并將其稀釋6倍后進行測定。吸收光譜體現了所有紫外-可見波長內有吸收的所有成分的總和，在堿性條件下，經有機溶劑萃取得到的為堿性部分［9］。圖1中掃描所得供試品曲線與烏頭堿對照品較為類似，但又稍有不同。針對現有烏頭或附子類制劑的標準中，多采用比色法進行生物堿限量測定可能不夠完整，如果增加吸波面積法對制劑中整體堿性物質的含量測定，將對現有標準具有良好的補充作用。

表1 加樣回收實驗（n＝6）

表23 批樣品含量

［1］李孝棟，李素云，張麗紅，等.吸光度-波長曲線下面積和藥物濃度的線性關系及其在中藥藥動學中的應用［J］.福建中醫藥大學學報，2012，22（6）：26-31.

［2］張麗紅，肖曉金，楊真真，等.吸波面積法對養血注射液在大鼠體內藥代動力學的研究［J］.中醫臨床研究，2013，5（22）：9-11.

［3］ZHANG L H，XIAO X J，YANG Z Z，et al.A New Method of Area under the Absorbance-Wavelength Curve for Rats Total Metabolomic Pharmacokinetics from Yangxue Injection with Multicomponents［J］.Journal of Spectroscopy，2013，2013（4）：4142-4146.

［4］賴宏強，胡悅，李孝棟.基于吸波面積法對川芎組分片整體成分溶出度的考察及其體內外相關性的研究［J］.藥學學報，2015，50（6）：788-792.

［5］賴宏強，胡悅，李孝棟.吸波面積法與HPLC法同步測定川芎組分制劑大鼠體內絕對生物利用度［J］.中草藥，2015，46（16）：2421-2427.

［6］胡悅，賴宏強，范哲賢.白花蛇舌草組分膠囊2種方法對大鼠體內藥代動力學［J］.中國實驗方劑學雜志，2015，21（16）：42-46.

［7］范哲賢，胡悅，賴宏強，等.透骨消痛膠囊單次與多次給藥對大鼠體內藥代動力學行為的影響［J］.中國實驗方劑學雜志，2016，22（15）：92-95.

［8］楊真真，姜夢麗，張麗紅，等.酸性染料渦旋比色法測定大鼠口服麻黃湯后血漿總生物堿［J］.中草藥，2015，46（2）：231-235.

［9］匡海學.中藥化學［M］.北京：中國中醫藥出版社，2011：23.

R284.2

B

1000-338X（2017）01-0043-02

2016-11-30

楊霖（1990—），男，2015級藥劑學碩士研究生，主要從事中藥制劑及質量控制研究。

李孝棟（1969—），男，教授。E-mail：lxdtcm@163.com