黔產大菟絲子中綠原酸的定性與定量分析

馮 華 石尚友 羅秀瓊 王世俊 鄭凰雅 王祥培

1.遵義市食品藥品檢驗所，貴州 遵義 563002；2.貴陽中醫學院，貴州 貴陽 550002

黔產大菟絲子中綠原酸的定性與定量分析

馮 華1石尚友1羅秀瓊1王世俊1鄭凰雅1王祥培2

1.遵義市食品藥品檢驗所，貴州 遵義 563002；2.貴陽中醫學院，貴州 貴陽 550002

目的：對黔產大菟絲子中綠原酸進行定性與定量分析。方法：采用TLC色譜法，以綠原酸為對照，建立定性鑒別方法；采用HPLC色譜法，建立其含量測定方法。結果：TLC法能很好分離各成分；高效液相色譜法綠原酸在0.0102～0.1142mg范圍內與峰面積響應值呈良好的線性關系(r=0.9998)，平均加樣回收率為 99.0%。結論：本法簡便可行，重復性好，為評價大菟絲子質量提供實驗依據，可用于大菟絲子藥材的有效鑒別。

黔產大菟絲子；綠原酸；定性與定量

大菟絲子為旋花科植物大菟絲子(CuscutaJaponicaChoisy)的干燥成熟種子，收載于2003版貴州省《中藥材、民族藥材質量標準》[2]。本品為少數民族藥材，性辛、甘、平，具有滋補肝腎、固精縮尿、安胎、明目、止瀉功效，臨床用于腎虛腰痛、陽痿遺精、目昏耳鳴、胎動不安、尿頻等。大菟絲子藥材中含新綠原酸、綠原酸、隱綠原酸、咖啡酸、3,4-二咖啡?？鼘幩帷?,5-二咖啡酰奎寧酸、4,5-二咖啡?？鼘幩岬扔袡C酸類成分[3]，其中綠原酸具有抗病毒、保肝利膽作用。筆者查閱相關文獻資料，目前尚無對大菟絲子中綠原酸薄層鑒別和HPLC法含量測定方法的報道，筆者對大菟絲子中綠原酸薄層和含量測定進行研究，建立了綠原酸的薄層鑒別與含量測定方法，為大菟絲子藥材質量標準提升和控制提供參考。

1 儀器與材料

1.1 儀器 Agilent LC-1260高效液相色譜議(包括四元泵，DAD，柱溫箱，自動進樣器，工作站)；AB204-S型梅特勒電子天平；KQ-500DV型數控超聲波清洗機(昆山市超聲儀器有限公司)。

1.2 材料 綠原酸對照品(批號：110753-20314，中國食品藥品檢定研究院)。聚酰胺薄膜(購于青島海洋化工有限公司)，乙睛為色譜純，水為純凈水，其它試劑均為分析純。

大菟絲子采集于貴州省各地區，經遵義市食品藥品檢驗所鄧順超副主任中藥師鑒定為旋花科植物大菟絲子的干燥成熟種子，樣品來源見表1。

表1 樣品來源

2 方法與結果

2.1 薄層鑒別[1]取本品粉末約1.0g，置具塞量瓶中，加甲醇10mL，超聲30min，濾過，濾液水浴上濃縮約1mL，作為供試品溶液。另取綠原酸對照品，加甲醇溶液制成每1mL含0.1mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2015年版四部附錄)試驗，吸取上述兩種溶液各5μL，分別點于同一聚酰胺薄膜板上，以甲醇-冰醋酸-水(4∶1∶5)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以三氯化鋁乙醇溶液，置紫外光燈(365nm)下檢視，供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。結果表明，分離度好，斑點顯色清晰，陰性無干擾，見圖1。

2.2 綠原酸的含量測定[3]

2.2.1 色譜條件[2-3]色譜柱：Eclipse XDB-C18(5μm，4.6mm×250mm)；流動相：乙睛-0.1%磷酸溶液(12∶88)，流速為：1.0mL/min，柱溫30℃，檢測波長為325nm。進樣量10μL，分離度為2.4，理論塔板數按綠原酸峰計，應不低于3500，色譜圖見圖2、圖3。

2.2.2 對照品溶液的制備 精密稱取綠原酸對照品10.60mg，置25mL容量瓶中，加甲醇溶解至刻度，搖勻，精密吸取2mL置10mL容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。

2.2.3 供試品溶液制備 精密稱取大菟絲子藥材粉末(過二號篩)約1.0g，置具塞瓶中，加甲醇25mL，稱定重量，超聲50min，放置至室溫，用甲醇補足重量，過濾，取續濾液，即得。

2.2.4 檢測波長確定 照紫外-可見分光光度法，在200～400nm的波長范圍內對對照品溶液、供試品溶液以及陰性對照品溶液進行掃描。結果顯示，綠原酸和樣品在325nm波長處有最大吸收，因此選擇檢測波長為325nm。

2.2.5 線性關系的考察 分別配制6個不同濃度綠原酸對照品溶液，濃度分別為0.0102、0.0204、0.0408、0.0816、0.0979、0.1142mg/mL，進樣量為10μL，注入高效液相色譜儀，測定峰面積，以綠原酸濃度(mg)為橫坐標，峰面積積分值(A)為縱坐標，計算綠原酸回歸方程為：Y=68.654X+0.0560(r=0.9998)。結果表明，在0.0102～0.1142mg范圍內線性關系良好。

2.2.6 精密度試驗 精密吸對照品溶液10μL，注入高效液相色譜儀中，測定6份，平均峰面積657.836，RSD=0.4%，表明儀器精密度良好。

2.2.7 穩定性試驗 取同一批藥材粉末約1.0g，精密稱定，按供試品溶液項下方法制備供試品溶液，精密吸取供試品溶液10μL，注入高效液相色譜儀中，分別在0、2、4、8、12h測定一次，平均峰面積為682.360，RSD為0.8%，表面供試品溶液在12h內穩定。

2.2.8 重復性試驗 取同一批藥材粉末約1.0g6份，精密稱定，照“2.2.3”項下制備方法制備成供試品溶液。進樣10μL，平均含量為0.12%，RSD為1.1%，表明重復性良好。

2.2.9 加樣回收試驗 稱取已測定S1號樣品粉末5份(含量為0.12%)，每份約0.5g，精密稱定，加入綠原酸對照品濃度為0.30mg/mL溶液2mL，按“2.2.3”項下的方法制備供試品溶液，在“2.2.1”項下色譜條件進樣測定，計算綠原酸平均回收率為99.0%，RSD為0.6%,結果見表2。

2.2.10 含量測定 分別測定大菟絲子藥材不同產地樣品，測定其含量，計算結果見表3，圖譜見圖4。

表2 加樣回收試驗結果

表3 不同產地大菟絲子藥材綠原酸含量測定結果(n=3)

3 討論

3.1 綠原酸的TLC鑒別 采用乙醇、甲醇溶劑提取后，乙醇提取溶液的斑點分離效果不佳，甲醇提取的各斑點能有效分離。按正文方法操作，供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。置紫外光燈(365nm)下檢視，供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。結果表明，分離度好，斑點顯色清晰。以甲醇-冰醋酸-水不同比例為展開劑，在聚酰胺薄膜上展開，經過不同比例調整。以甲醇—冰醋酸-水(4∶1∶5)溶液為展開劑，在聚酰胺薄膜上展開，斑點清晰，分離完全，。所以選擇聚酰胺薄膜板，甲醇—冰醋酸-水(4∶1∶5)溶液為展開劑。

3.2 綠原酸提取條件的優選 選用甲醇、80%甲醇、50%甲醇作為提取溶劑，超聲、回流提取時間為40、50、60min?；亓髋c超聲提取綠原酸含量沒有差異，選擇甲醇25mL超聲50min，藥材中綠原酸提取完全，選用甲醇為溶劑比較好；對色譜條件進行選擇，以乙睛-0.1%磷酸溶液(12∶88)，流速為1.0mL/min；柱溫30℃；檢測波長為325nm，各組分峰達到完全分離。

綜上，本法簡便、快速，準確度高，可用于大菟絲子的質量控制。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(四部)[M].北京：中國醫藥科技出版社，2015：57.

[2]貴州省食品藥品監督管理局編.《貴州省中藥材、民族藥材質量標準》[S].貴陽：貴州科技出版社，2003：39.

[3]瞿燕,李瓊, 魏文龍,等.大菟絲子生品和鹽炙品HPLC-UV特征圖譜及7個有機酸含量變化研究[J].藥物分析，2014,34(5)：824-829.

Quality and Quantity Analysis or Identificayion of Chorogenic AcidCuscutaJaponicaChoisy in Guizhou

FENG Hua1SHI Shangyou1LUO Xiuqiong1WANG Shijun1ZHENG Huangya1WANG Xiangpei2

1.Zunyi Institute for Food & Drug Control,Zunyi 563002,China；2.Guiyang College of Traditional Chinese Medicine, Guiyang 550002, China

Objective The TLC identification method and content determination of chlorogenic acid is established.Methods quality and quantity analysis and identificayion to Cuscuta Japonica Choisy by TLC and HPLC.Results The established TLC method had a good separation effect on each component.The amount pof inlet chlorogenic acid had a good linearity with the response value of peak area in the rang of 0.0102～0.1142mg(r=0.9998)，the average recovery of baicalin was 99.00%.Conclusion The method is simple，reproducible and may be used for quality control and identify toCuscutaJaponicaChoisy.

Cuscuta Japonica Choisy in Guizhou；Chlorogenic Acid；Quality and Quantity Analysis

貴州省高層次創新型人才培養項目(遵市科合人才(2015)35號)；遵義市創新人才團隊培養項目(遵市科合(2016)07號)。

馮華(1977-)，男，土家族，碩士，副主任藥師，從事藥品檢驗及新藥研究。E-mail: fenghua781014@163.com

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1007-8517(2017)05-0014-03

2016-12-27 編輯：穆麗華)