黎藥復體力湯抗疲勞和增強免疫力功能研究

李誠叢 高香奇* 周 星

海南省藥物研究所，海南 海口 570311

黎藥復體力湯抗疲勞和增強免疫力功能研究

李誠叢1高香奇1*周 星2

海南省藥物研究所，海南 海口 570311

目的：研究海南黎藥復體力湯對運動小鼠抗疲勞和增強免疫力作用，為藥物開發提參考依據。方法：使用小鼠為實驗對象進行海南黎藥復體力湯抗疲勞和增強免疫力試驗。結果：抗疲勞試驗中，高劑量組(30g/kg·bw)小鼠游泳至力竭的時間、小鼠肝組織中SOD的活性與對照組比較，均有明顯延長或增加(P<0.05)， MDA濃度顯著減少(P<0.01)；增強免疫力試驗中，高劑量組(30g/kg·bw)能極顯著提高小鼠遲發型變態反應、conA誘導小鼠淋巴細胞轉化能力、碳廓清能力和巨噬細胞吞噬雞紅細胞能力(P<0.01)。結論：海南黎藥復體力湯具有抗疲勞和增強免疫力的效果。

海南黎藥；復體力湯；抗疲勞功能；增強免疫力功能

黎藥是黎族人民傳統使用的民間藥物的簡稱，是黎族用以保健、預防和治療疾病的物質[1]。黎藥復體力湯是將多種黎藥藥材搭配做成的湯劑，處方主要由雞血藤、杜仲、千斤拔、七葉蓮、散血丹、牛大力等組成。前期對黎藥復體力湯的提取工藝和安全性進行研究評價顯示，黎藥復體力湯屬于實際無毒級，未顯示有急性、亞急性和遺傳毒性作用[2-3]。根據安全性研究結果，現進行黎藥復體力湯的抗疲勞和增強免疫力試驗，為開發具有抗疲勞和增強免疫力功能的海南黎藥復體力湯提供理論依據。

1 儀器與材料

1.1 儀器 3K-18超速離心機(美國SIGMA公司)；UV2550紫外分光光度計(日本SHIMADZU公司)；MOC-15二氧化碳培養箱(日本三洋)、ST-260酶標儀(上海科華)、SW-CJ-2FD超凈工作臺(蘇州凈化)、Nikon 50i顯微鏡(日本尼康)、YSQ-LS-50SF高壓滅菌器(江陰濱江)、XM7E-8112恒溫水浴(上海精宏)、LRH-150L生化培養箱(上海一恒)、游標卡尺(精密度0.02mm)(上海九量)、AUW220D電子分析天平(日本島津)。

1.2 藥物 牛磺酸(500mg/片，批號 012022，美國GNC健安喜)。黎藥復體力湯由海南省五指山市黎族民間醫藥研究協會提供處方和藥材。取配方量的藥材，反復加水，煎煮3次，每次3h，合并三次濾液濃縮成所需濃度。

1.3 動物 SPF級昆明種小鼠，由長沙市開福區東創實驗動物科技服務部提供，生產許可證號：SCXK(湘)2009-0012。飼養環境為屏障級。

2 方法

2.1 抗疲勞試驗 選取檢疫合格小鼠50只，按體重隨機分為復體力湯高劑量組、中劑量組、低劑量組、陰性對照組和陽性對照組，每組雌雄各半。高、中、低劑量組給藥劑量分別為生藥30g/kg、20g/kg、10g/kg(分別相當于人體推薦劑量的15、10和5倍)，陰性對照組給予等體積純化水，陽性對照組為800mg/kg牛磺酸，配制成濃度80mg/mL牛磺酸溶液使用，配制方法：取4片牛磺酸片，入研缽研碎，加入25mL氯化鈉注射液，混勻即得。各組灌胃給藥，每日1次，連續21d，灌胃體積均為0.1mL/10g體重。

2.2.1 小鼠5%負重游泳試驗[4]末次給藥1h后，將小鼠置于游泳箱中，注水保持溫度于(25±2)℃(最適宜小鼠游泳溫度)，于尾部上方負重該小鼠體重5%重量的保險絲，負重過程中不影響小鼠運動。放入水池后開始記錄時間至小鼠沉入水池底部力竭為止。力竭標準：小鼠沉入水中超過10s，且放在平面上無法完成翻整反射。記錄游泳開始到小鼠力竭的時間。

2.1.2 小鼠力竭運動后血清中SOD/MDA測定試驗[5]在小鼠5%負重游泳試驗計時結束后，將力竭小鼠眼球取血，加入離心管中，1500rpm離心10min，備用。SOD/MDA的測定按南京建成生物工程研究所提供的試劑盒給出的方法進行。

2.2 增強免疫力試驗[6]選取體重18～22g的KM小鼠200 只，雄性，每40 只小鼠1 個大組，共分5 個大組。分別進行碳廓清試驗(免疫Ⅰ組)，ConA誘導的小鼠脾淋巴細胞轉化試驗、NK細胞的活性試驗(免疫Ⅱ組)，臟體比值測定、半數溶血值(HC50)的測定和抗體生成細胞數的測定(免疫Ⅲ組)，遲發型變態反應試驗(免疫Ⅳ組)，小鼠腹腔巨噬細胞吞噬雞紅細胞試驗(免疫Ⅴ組) 。每大組40 只小鼠按照體重隨機分為4 個小組，分別為對照組、低劑量組、中劑量組、高劑量組。高、中、低劑量同抗疲勞試驗，對照組給予等體積純化水。各組灌胃給藥，每日1次，連續30d，灌胃體積均為0.1mL/10g體重[7]。連續灌胃30d后測各項指標，包括細胞免疫功能指標、體液免疫功能指標、單核-巨噬細胞吞噬指標及NK細胞活性測定。

3 結果

3.1 抗疲勞試驗

3.1.1 小鼠5%負重游泳試驗 與陰性對照組比較，高劑量組小鼠負重游泳時間，有統計學差異(P<0.05)；陽性對照組有顯著統計學差異(P<0.01)；其余劑量組分別無統計學差異(P>0.05)。見表1。

表1 黎藥復體力湯對小鼠5%負重游泳時間的影響±s)

注：與陰性對照組比較，*P<0.05 ；**P<0.01。

3.1.2 小鼠力竭運動后血清中SOD/MDA測定試驗 高劑量組小鼠力竭運動后血清中SOD測定值有明顯提高、MDA測定值顯著下降，兩者分別與對照組比較，均有統計學差異(P<0.05，P<0.01)；中、低劑量組分別與對照組比較，無統計學差異(P>0.05)。見表2。

表2 黎藥復體力湯對小鼠力竭運動后血清中SOD/MDA的影響

注：與陰性對照組比較，*P<0.05 ；**P<0.01。

3.2 增強免疫力試驗

3.2.1 黎藥復體力湯對小鼠細胞免疫功能的影響 高劑量組小鼠足跖腫脹度和淋巴細胞增殖能力均明顯分別高于對照組(P<0.01)，表明受試物可提供小鼠遲發型變態反應能力和小鼠淋巴細胞轉化能力。見表3。

表3 黎藥復體力湯對小鼠細胞免疫功能的影響±s)

注：與陰性對照組比較，*P<0.05 ；**P<0.01。

3.2.2 黎藥復體力湯對小鼠體液免疫功能的影響 各劑量組小鼠溶血空斑數、半數溶血值分別與對照組比較，差異無統計學意義(P>0.05)。見表4。

表4 黎藥復體力湯對小鼠的體液免疫功能的影響±s)

3.2.3 黎藥復體力湯對小鼠單核-巨噬細胞吞噬功能的影響

3.2.3.1 巨噬細胞吞噬雞紅細胞能力 各劑量組小鼠吞噬率平方根反正弦轉換值、吞噬指數與陰性對照組比較，高劑量組有顯著統計學差異(P<0.01)，低劑量組和中劑量組差異無統計學意義(P>0.05)。見表5。

表5 黎藥復體力湯對小鼠巨噬細胞吞噬雞紅細胞能力的影響 ±s)

注：同陰性對照組比較，*P<0.05 ；**P<0.01。

3.2.3.2 碳廓清試驗 各劑量組吞噬指數與對照組的比較，高劑量組有顯著統計學差異(P<0.01)；低劑量組和中劑量組，無統計學意義(P>0.05)。見表6。

表6 黎藥復體力湯對小鼠單核—巨噬細胞碳廓清的影響 ±s)

注：同陰性對照組比較，*P<0.05 ；**P<0.01。

3.2.4 黎藥復體力湯對小鼠NK細胞活性的影響 各劑量組小鼠的NK細胞活性同對照組比較，無統計學意義(P>0.05)。見表7。

表7 黎藥復體力湯對小鼠NK細胞活性的影響 ±s)

3.2.5 黎藥復體力湯對小鼠體重的影響和臟器比值的測定

3.2.5.1 黎藥復體力湯對小鼠體重的影響各劑量組試驗前、試驗中期、試驗末期小鼠體重與對照組相比，無統計學差異(P>0.05)。

3.2.5.2 黎藥復體力湯對小鼠免疫器官臟器比值的影響 各劑量組小鼠脾臟/體重比值、胸腺/體重比值與對照組的比較，差異無統計學意義(P>0.05)。見表8。

表8 黎藥復體力湯對小鼠免疫器官臟器比值的影響

4 結論與討論

隨著社會節奏的加快，社會競爭日益激烈，疲勞已成為威脅人類健康的重要因素。因而延緩疲勞的發生和促進疲勞的恢復成為營養衛生學、航天醫學、軍事醫學、運動醫學、保健醫學、康復醫學等學科的研究重點。近年來，在民間醫學和現代科學實驗基礎上，不少學者在中藥抗疲勞方面做了大量的工作，取得了一定成效。海南黎藥復體力湯是海南黎族民間長期使用且具有良好效果的經驗方，該方對于身體虛弱者可以增強體力，緩解體力疲勞，解除人體亞健康狀態。牛磺酸具有促進有機體免疫力的增強和抗疲勞的作用，是臨床上用于抗疲勞的常用藥物之一，本課題通過與牛磺酸的抗疲勞效果比較，顯示黎藥復體力湯抗疲勞效果與牛磺酸相當，但牛磺酸過多使用會增加人體血壓和心率，影響心臟功能，但黎藥復體力湯由多種中草藥組成，具有延緩并消除疲勞、改善激素分泌，無明顯不良發應，且黎藥復體力湯還具有增強免疫力的功能。

經過21d連續灌胃海南黎藥復體力湯，高劑量組(30g/kg)和陽性對照組小鼠的力竭游泳時間比陰性對照組明顯延長(P<0.05，P<0.01)，能顯著提高小鼠肝組織中SOD的活性(P<0.05，P<0.01)、降低MDA濃度(P<0.01)，表明該方可阻止細胞膜的脂質過氧化，有利于運動耐力的提高，減少有氧代謝產物的生成，從而降低體內能源物資的消耗，延緩疲勞的發生，有明顯的抗疲勞和抗氧化功能。中、低劑量組的力竭游泳時間、SOD活性和MDA濃度與陰性對照組比較，均無統計學差異(P>0.05)，高劑量組的與牛磺酸陽性對照組抗疲勞作用效果相當，提示該方具有開發意義。

經口灌胃給予小鼠10、20、30g/kg·bw劑量的復體力湯30d后，與對照組比較，高劑量組(30g/kg·bw)能提高小鼠遲發型變態反應、conA誘導小鼠淋巴細胞轉化能力、碳廓清能力和巨噬細胞吞噬雞紅細胞能力(P<0.01)；各劑量復體力湯對小鼠體重增長、胸腺/體重比值、脾臟/體重比值、半數溶血值、抗體細胞生成數和NK細胞活性均無統計學差異(P>0.05)。根據《保健食品檢驗與評價技術規范》(2003年版) 中增強免疫力功能的判斷標準，本實驗中細胞免疫功能和單核巨噬細胞功能結果均為陽性，表明復體力湯具有增強免疫力的功能。

[1]鄭才成.黎族藥物是海南民族醫學和民間用藥的傳統特色[J].海南首屆黎族藥物學術交流會論文，2008.

[2] 中藥、天然藥物急性毒性試驗技術指導原則[S].國家食品藥品監督管理局, 2005.

[3]中華人民共和國衛生部中國國家標準化管理委員會.鼠傷寒沙門氏菌/哺乳動物微粒體酶試驗[S].GB15193.4-2003.

[4] 趙珺彥，翟鵬貴.復合氨基酸制劑抗疲勞作用的實驗研究[J].中國衛生檢驗雜志，2010,20(5)：1068-1070.

[5] 余杰，唐武.牛磺酸對力竭運動小鼠抗疲勞效果及其機理研究[J].汕頭大學學報(自然科學版)，2008,23(4)：30-34.

[6]中華人民共和國衛生部.保健食品檢驗與評價技術規范[S].2003，22-34，225-228.

[7] 李羽.鱈魚肝油增強免疫力實驗研究[J].華南預防醫學，2012,38(5)：69-72.

Study on the Anti-Fatigue and Immunity-Enhancing Effect of Recovery Physical Decoction from Hainan Li-Nationality Herbal

LI Chengcong1GAO Xiangqi1*ZHOU Xing2

PharmaceuticalInstitute of Hainan Province,Hainan, 570311,China

Objective To study the anti-fatigue and immunity-enhancing effect of recovery physical decoction from Hainan Li-nationality herbal in mice, and to provide references for drug development.Methods The anti - fatigue and immunity - enhancing test of recovery physical decoction from Hainan Li-nationality herbal were performed in mice.Results In the anti-fatigue test, as compared with the control group, Hainan Li-nationality herbal at dose of 30g/kg·bw could significantly prolong time that the mice spent in trying to swim to exhaust and significantly increase the activity of SOD in the liver tissue (P<0.05), could significantly decrease the concentration of MDA(P<0.01).In the enhanced immunity test, as compared with the control group, Hainan Li-nationality herbal at dose of 30g/kg·bw could markedly enhance the DTH in mice, the lymphocyte transformation capacity induced by conA in mice, the carbon clearance ability and macrophage phagocytosis of chicken red blood cell capacity(P<0.01).Conclusion In our test condition, the anti-fatigue effect of recovery physical decoction from Hainan Li-nationality herbal is very significant,and it could enhance the immune function in mice.

Hainan Li-nationality Herbal ; Recovery Physical Decoction ; Anti-Fatigue Effect; Immune Function

海南省中藥現代化專項(瓊科函[2011]261號)。

李誠叢(1987-)，男，漢族，本科，實習研究員，研究方向為藥理毒理和藥效學。E-mail:176009938@qq.com

高香奇(1988-)，女，漢族，本科，實習研究員，研究方向為藥理毒理和藥效學。E-mail:419357272@qq.com

R96

A

1007-8517(2017)05-0060-03

2016-12-29 編輯：程鵬飛)