胃癌脈管內癌栓中EGFR c-Met和Ki-67的相關性分析

王愛民， 焦海濤， 吳建龍， 張詩彤， 花海洋， 王學文， 王利民， 李建輝

(1.河北省承德市中心醫院, 河北 承德 067000 2.承德醫學院, 河北 承德 067000)

胃癌脈管內癌栓中EGFR c-Met和Ki-67的相關性分析

王愛民1， 焦海濤2， 吳建龍1， 張詩彤1， 花海洋1， 王學文1， 王利民1， 李建輝1

(1.河北省承德市中心醫院, 河北 承德 067000 2.承德醫學院, 河北 承德 067000)

目的：分析胃癌患者脈管內癌栓與EGFR、c-Met和Ki-67表達的關系及其對疾病預后影響。方法：檢測EGFR、c-Met和Ki-67在88例胃癌組織，其中包括脈管內癌栓陽性者39例中的表達情況，分析脈管內癌栓陽性組與陰性組患者1年及3年生存率的差異。結果：脈管內癌栓陽性組中EGFR、c-Met和Ki-67的強陽性表達率均高于脈管內癌栓陰性組，差異有統計學意義(P<0.05)。脈管內癌栓陰性患者1年、3年生存率高于同期陽性組，差異有統計學意義(P<0.05)。結論：EGFR、c-Met和Ki-67的表達與脈管內癌栓及患者預后密切相關，脈管內癌栓是胃癌患者預后不良的標志。

胃 癌； 脈管癌栓； EGFR

胃癌是消化道常見腫瘤,位列惡性腫瘤發病率的第2位、死亡率的第3位[1]。脈管癌栓已有研究證實是影響胃癌預后的獨立因素[2]，但脈管癌栓與哪些病理因素相關的研究見報道。本文分析胃癌患者脈管內癌栓與EGFR、c-Met和Ki-67表達的關系及其對疾病預后影響。

1 資料與方法

1.1 一般資料:收集承德市中心醫院病理科2010年10月至2012年7月經石蠟包埋的胃癌組織，所有標本均按《中國胃癌診治規范》進行處理，并按2010年美國癌癥聯合會(AJCC)發表的第7版《惡性腫瘤的TNM分期》為標準，選出Lauren分型為腸型、TNM分期為T2N1M0的胃癌標本149例，經隨訪選取其中生存時間≤1年及生存時間≥3年病例共88例進行研究。所有標本臨床病理資料及隨訪記錄齊全。胃癌病例中，男性52例，女性36例，平均年齡58.0±4.8歲，其中有脈管癌栓39例、無脈管癌栓49例，1年生存期36例，三年生存期52例。

1.2 主要試劑:甲醇、乙醇、二甲苯、3%雙氧水、PBS、氨水、枸櫞酸鈉緩沖液、蘇木素、中性樹膠等。即用型兔抗人EGFR單克隆IgG抗體、即用型兔抗人c-Met單克隆IgG抗體、即用型鼠抗人Ki-67單克隆IgG抗體均購自北京中杉金橋生物技術有限公司。即用型快捷免疫組化試劑盒(鼠)及即用型DAB顯色試劑均購自福州邁新生物技術公司。

1.3 方 法

1.3.1 標本的處理標本離體后均立即用10%中性福爾馬林充分固定后，經取材、脫水及石蠟包埋制成4μm厚度蠟塊，將蠟塊連續切片，準備用于HE染色及免疫組織化學染色。

1.3.2 免疫組織化學方法將切片后的標本用二甲苯脫蠟至水后，應用免疫組織化學方法標記胃癌組織及正常胃粘膜組織EGFR、c-Met和Ki-67的表達情況。一抗為兔抗人單克隆抗體，陰性結果對照組以PBS代替，以試劑公司所提供的陽性切片做為陽性對照。

1.3.3 免疫組化結果判定:EGFR和c-Met陽性表達部位在細胞胞膜和胞漿，呈棕黃色顆粒。采用陽性細胞數評分和染色強度評分的Volm雙評分法[3]對EGFR、c-Met的陽性表達水平進行判定，0分：陰性(-)；1～2分：弱陽性(+)；3～4分：中度陽性(++)；5～6分：強陽性(+++)。Ki-67在胃癌組織中的陽性表達部位是胞核，棕黃色顆粒狀，本研究根據Lee HE等[4]的分類方法，應用20%作為截斷值將Ki-67LI分為>20%和≤20%兩個范圍區間，并分別定義為Ki-67高表達與Ki-67低表達。

1.3.4 統計學方法:通過統計學軟件SPSS19.0完成實驗資料的統計，采用Kaplan-Meier法計算生存率，計數資料采用χ2檢驗的方法。統計學結果以P<0.05具有統計學意義。

2 結 果

2.1 EGFR、c-Met和Ki-67在胃癌患者脈管內癌栓陽性及陰性組組織中的表達:39例脈管癌栓陽性胃癌組織中，EGFR強陽性例數為32例(82.1%)，49例脈管癌栓陰性胃癌組織中，EGFR強陽性例數為5例(10.2%)(圖1)；39例脈管癌栓陽性胃癌組織中，c-Met強陽性例數36例(92.3%)，49例脈管癌栓陰性胃癌組織中，c-Met強陽性例數8例(16.3%)(圖2)；39例脈管癌栓陽性胃癌組織中，Ki-67高表達例數為37例(94.8%)，49例脈管癌栓陰性胃癌組織中，Ki-67高表達例數為9例(18.4%)(圖3)，經χ2檢驗，三者在兩組中的表達差異均具有統計學意義(P<0.05)(表1)。

圖1 EGFR在脈管癌栓陽性組及脈管癌栓陰性組胃癌組織中的表達(IHC×200)

圖2 c-Met在脈管癌栓陽性組及脈管癌栓陰性組胃癌組織中的表達(IHC×200)

圖3 Ki-67在脈管癌栓陽性組及脈管癌栓陰性組胃癌組織中的表達(IHC×200)

表1 EGFR、c-Met和Ki-67在脈管癌栓陽性組及脈管癌栓陰性組胃癌組織中的表達

*Ki-67高表達

2.2 胃癌患者脈管內癌栓陽性及陰性術后1年及3年生存率比較脈管內癌栓陰性組1年生存率為85.7%，陽性組1年生存率為66.7%，陰性組明顯高于陽性組，差異有統計學意義(P<0.05)；脈管內癌栓陰性組3年生存率為73.8%，陽性3年生存率為34.6%，陰性組明顯高于陽性組，差異有統計學意義(P<0.05)(表2)。

表2 脈管癌栓陽性和陰性兩組術后1年和3年生存率n(%)

3 討 論

表皮生長因子受體 (epidermal growth factor receptor，EGFR)在多種實體性腫瘤中存在過表達，如胃癌、前列腺癌、食管癌、頭頸部腫瘤等[5]。EGFR分布較廣泛，并在腫瘤的發生、發展中起重要作用，包括促進腫瘤細胞增殖，抑制腫瘤細胞凋亡，并與血管生成、黏附、侵襲和轉移關系密切[6]。已有研究證實在癌旁組織及胃癌組織中，EGFR的表達均明顯高于正常組織，且癌旁組織中EGFR的表達又明顯高于胃癌組織，提示EGFR在胃癌中的表達呈明顯正相關[7]。EGFR在腫瘤中表達增高提示患者存活率低、預后差、轉移可能性大。因此，EGFR在實體瘤中過度表達，往往提示病情惡化和病變預后不良[8]。本研究在前人基礎上進一步發現EGFR在脈管內癌栓陽性組中的表達高于脈管內癌栓陰性組，脈管內癌栓陰性組患者術后1年及3年生存率顯著高于脈管內癌栓陽性組患者，這說明EGFR的高表達與了胃癌的發生、發展密切相關，且脈管內癌栓陽性的胃癌患者預后相對較差。EGFR是腫瘤靶向治療中一重要靶點，而且針對此靶點的藥物相對成熟，已在臨床上用于肺癌患者的治療，在胃癌治療方面還尚未見報道，通過本實驗發現可為靶向藥物用于胃癌臨床治療提供一定的理論依據。

c-Met是肝細胞生長因子的受體，c-Met參與了腫瘤細胞增殖與移動的信號轉導過程，并在此過程中發揮著巨大作用[9]。研究發現c-Met在很多腫瘤如：前列腺癌、肝癌、甲狀腺癌、腎癌、乳腺癌、胰腺等都存在過表達，而且發現c-Met過表達與腫瘤轉移和局部組織的侵襲密切相關[10]。對于c-Met的表達與胃癌的關系，有研究發現c-Met的過表達能促進胃癌的侵襲和快速進展，使胃癌患者病情惡化，導致預后較差，認為c-Met是能預測胃癌患者預后標記因子。本研究發現，合并脈管癌栓的胃癌組織中c-Met的表達明顯高于無脈管瘤栓的胃癌組織，脈管內癌栓陰性組患者術后1年及3年生存率顯著高于脈管內癌栓陽性組患者，進一步說明c-Met的高表達對于胃癌患者特別是胃癌合并脈管內癌栓的患者預后能更好的進行判斷，提前針對性的給與臨床干預。

脈管癌栓的形成與多種惡性腫瘤的預后不良相關，胃癌也被包括其中。這與我們本次研究結論相符：胃癌合并脈管內癌栓患者術后1年及3年生存率均顯著低于脈管內癌栓陰性者，說明脈管癌栓與胃癌的預后不良存在明顯的相關性。EGFR、c-Met和Ki-67在胃癌合并脈管內癌栓患者中的表達均明顯高于與脈管內癌栓陰性者，因此提示胃癌及合并脈管內癌栓患者EGFR、c-Met和Ki-67的表達程度越高胃癌患者的預后可能將越差，脈管內癌栓可作為胃癌患者預后不良的標志。

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Correlation Analysis on EGFR c-Met and Ki-67 in Gastric Cancer with Intravascular Cancer Embolus

WANGAimin,etal

(TheCentralHospitalofChengde,HebeiChengde067000,China)

Objective: To analyze the expression of EGFR, c-Met and Ki-67 in gastric cancer with intravascular cancer embolus and their influence on the prognosis. Methods: The expression of EGFR, c-Met and Ki-67 in 88 gastric cancer cases and 39 cases of intravascular cancer embolus were detected and the difference between 1-year and 3-year survival rate in cancer embolus positive and negative patients group were analyzed. Results: In gastric cancer tissue with intravascular cancer embolus, the strong positive expression rates of EGFR, c-Met and Ki-67 were all higher than those in gastric cancer tissue without intravascular cancer embolus (P<0.05). The strong positive expression rates of EGFR, c-Met and Ki-67 in gastric cancer tissue without intravascular cancer embolus 1-year and 3-year survival rate were obviously higher than those of cancer embolus positive group (P<0.05). Conclusions: The expression and prognosis of EGFR, c-Met and Ki-67 are related to the gastric cancer with intravascular cancer embolus, and has rather poor prognostic significance in gastric cancer.

Gastric cancer; Intravascular cancer embolus; Epidermal growth factor receptor

1006-6233(2017)02-0218-04

A 【doi】10.3969/j.issn.1006-6233.2017.02.013