子宮病毒感染研究

葉 榮

（湖北省十堰市鄖西縣疾控中心，湖北 十堰 442000）

1 實驗

我們隨機抽取50個切片樣本，請醫學中心病理科專科醫師再次檢查子宮頸切片檢體。從子宮頸剝落上皮細胞檢體中偵測人類乳突狀病毒感染。以Nest-PCR偵測高危險性及低危險性人類乳突狀病毒感染(HPV)檢體及DNA萃取:

以子宮頸拭樣棉棒取得子宮頸剝落上皮細胞后，將子宮頸拭樣棉棒先浸潤在5ml(PBS)緩沖液。然后，以酚－氯仿萃取檢體DNA。首先，將含有子宮頸剝落上皮細胞的緩沖液加以攪拌以釋出細胞，在室溫下離心1500rpm15分鐘，取細胞沉淀后加入500ul細胞溶解液(10mMTris-HCl,150mMNaCl,and10mMEDTA)至于室溫下約5分鐘。接著，加入500ul酚－氯仿，于室溫下離心1500rpm15分鐘，倒掉上清液，然后以絕對(100%)酒精將DNA沉淀真空抽干后溶于無菌水中[2]。

2 Nest-PCR

為了確保萃取足夠的DNA樣本，實驗中將β-globin 172bp片段擴大當作internalcontrol。β-globin primer是：5’-ACACAACTGTGTTCACTACC-3’及5’-TCTATTGGTCTGGTTAAA CC-3’[3]。接著，將確定萃取足夠DNA的每個DNA樣本置入含有10mMTris-HCl(PH=8.3),1.5mMMgCl2,10μggelatin,250μMdNTP,1.2 5UTaqDNApolymerase(Promega)及30pmoleprimers的50μl reactionmixture中。PCR的條件為：首先以95C持續3分鐘以使雙股DNA分開，接著設立條件在94C，15秒，42C，2分鐘，72C，20秒，72C，7分鐘，35個循環。此步驟共重復3次，直到這些樣本無法再被擴大(amplified)為止。所有的PCR產物以3%的agarosegel進行電泳后，將gel予ethidiumbromide染色后在ultra-violettranslluminator下分析結果。為預防樣本被污染或有PCR殘留物，實驗前需將實驗用具予以滅菌及避免重復使用舊吸管。此外，每次進行PCR時都應包含有positivecontrol及negativecontrol。

3 結 果

皮細胞，以偵測有無人類乳突狀病毒感染的個案后，共有137位子宮頸抹片檢查結果為≥CIN1的潛在性陽性個案參與此部分的研究。137位潛在性陽性個案中有43位未接受切片追蹤，有94位個案接受切片追蹤。接受切片追蹤的94位個案平均年齡(±SD)為46.2(±13.2)歲，未接受切片追蹤的43位個案平均年齡(±SD)為43.6(±10.8)歲，二組間的平均年齡并無統計上的差異。接受切片檢查的個案中，有3位切片結果為正常，32位切片結果為發炎反應，26位為CIN1，12位為CIN2，及21位為≥CIN3。最后，將172位子宮頸抹片檢查結果為正常的對照組與3位切片結果為正常的個案合并為本研究的健康對照組。以Fisher’sexacttest檢測結果，在健康對照組、子宮頸發炎反應、CIN1、CIN2、及≥CIN3個案中，其抽煙狀態、子宮頸抹片檢查次書、性伴侶人數皆有顯著的差異。而家屬是否曾患子宮頸癌，在各組間有些微的差異，但未達統計上的差異。其他社會人口學變項在各組間則無統計上的差異。

4 總 結

結果發現，高危險性人類乳突狀病毒感染率在正常對照組只有11%，在子宮頸發炎反應個案中有72%個案感染高危險性人類乳突狀病毒，而CIN1、CIN2、及≥CIN3個案中，其高危險性人類乳突狀病毒的感染率則逐漸增加為81%，84%，及90%。以健康對照組為基準，在控制抽煙狀態、子宮頸抹片檢查次數、性伴侶人數及家屬是否曾患子宮頸癌等干擾因素后發現，子宮頸發炎個案有19.3倍(95%信賴區間=7.6-48.9)的危險性會感染高危險性人類乳突狀病毒，CIN1、CIN2、及≥CIN3患者，則分別有32.2倍(95%信賴區間=10.4-99.5)、37.2倍(95%信賴區間=7.4-187.6)、及68.3倍(95%信賴區間=14.1-328.5)的危險性會感染高危險性人類乳突狀病毒。以nested-PCR實驗方法檢驗個案有無感染高危險性或低危險性人類乳突狀病毒，實驗結果，亦有相似的趨勢。

[1] 涂志華.液基細胞學聯合人乳頭瘤病毒檢測在宮頸癌篩查中的應用[J].中國民族民間醫藥,2014,12(17):52, 54.

[2] 李風艷.高危型人乳頭瘤病毒載量與宮頸癌前病變及宮頸癌的相關性分析[J].中國婦幼保健. 2017(16):489-491.

[3] 李艷芳.宮頸癌患者人乳頭瘤病毒與巨細胞病毒和單純皰疹病毒Ⅱ型感染的相關性研究[J].中華醫院感染學雜志,2017(16):3757-3761.