siRNA沉默Ran基因對結腸癌細胞株凋亡和Caspase-3、PARP表達的影響*

汪 鑫 耿 蕾 孫麗娜 孫利慧 盧瑗瑗 王 新

第四軍醫大學西京消化病醫院 腫瘤生物學國家重點實驗室(710032)

·論 著·

siRNA沉默Ran基因對結腸癌細胞株凋亡和Caspase-3、PARP表達的影響*

汪 鑫 耿 蕾 孫麗娜 孫利慧 盧瑗瑗 王 新

第四軍醫大學西京消化病醫院 腫瘤生物學國家重點實驗室(710032)

背景：結腸癌是常見的消化系統惡性腫瘤之一。本課題組前期研究發現結腸癌特異性抗原類硫氧還蛋白-2(Txl-2)的亞型之一Txl-2b可與Ras相關核蛋白(Ran)相互作用，但Ran在結腸癌發病過程中的作用和機制鮮有報道。目的：以RNA干擾技術靶向沉默結腸癌細胞株Ran基因，觀察該方法對細胞凋亡和半胱天冬酶-3(caspase-3)、多聚二磷酸腺苷核糖聚合酶(PARP)表達的影響。方法：設置si-1、si-2、si-3以及陰性對照(NC)組，分別將終濃度為20、40、60 nmol/L的Ran小干擾RNA(siRNA)-1、siRNA-2、siRNA-3以及NC siRNA轉染結腸癌細胞株HCT116、DLD-1。采用蛋白質印跡法檢測siRNA干擾效率以及caspase-3、PARP表達的變化；采用流式細胞儀檢測細胞凋亡情況。結果：20 nmol/L siRNA-1、siRNA-2抑制Ran表達的效果最佳。si-1組HCT116、DLD-1細胞的早期凋亡率較NC組顯著增加(19.37%±7.57%對4.83%±1.72%；16.53%±3.38%對6.27%±3.13%；P均<0.05)。si-1組、si-2組HCT116、DLD-1細胞的晚期凋亡率較NC組顯著增加(15.97%±3.31%、16.33%±5.40%對 6.40%±1.05%；22.93%±1.57%、11.50%±0.70%對6.20%±0.98%；P均<0.05)。si-1組、si-2組DLD-1細胞與NC組相比，被切割的caspase-3(活性形式)和被切割的PARP(非活性形式)表達水平顯著升高。結論：沉默Ran基因能明顯促進結腸癌細胞凋亡，其機制與調控caspase-3、PARP表達有關。

結腸腫瘤； Ras相關核蛋白； RNA，小分子干擾； 細胞凋亡； 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3； 聚ADP核糖聚合酶類

結腸癌是常見的消化系統惡性腫瘤之一，發病機制尚未完全明確。本課題組前期研究[1]采用分離自結腸癌轉移淋巴結的癌細胞免疫BALB/c小鼠，以淋巴細胞雜交瘤技術制備了一組抗結腸癌單克隆抗體，命名為結腸癌單克隆抗體(monoclonal antibodies, MCs)系列。其中，MC3所識別的抗原MC3-Ag在結腸癌組織中的陽性率達90%以上[2]，且表達水平與結腸癌TNM分期、腫瘤轉移密切相關[3]。其后本課題組進一步采用蛋白質組學研究方法鑒定并驗證了MC3-Ag為硫氧還蛋白家族新成員類硫氧還蛋白-2(thioredoxin like-2, Txl-2)[4]。……