液質聯用檢測白酒中的微量甜蜜素

王鳳芹　伊芳　汪秀月

摘要 采用液質聯用建立了分析白酒中微量甜蜜素的方法，以0.1%甲酸和甲醇（80∶20）為流動相，樣品用水直接稀釋2倍測定，采用多反應方式（MRM）進行檢測。最低檢出限為2 ng/mL，最低定量限為10 ng/mL，在10～1 000 ng/mL時相關系數為0.999 9，平均回收率為102.9%～106.6%，最大相對標準偏差為2.5%。采用2種類型白酒做加標回收，重復性良好，且能在3 min內完成一次進樣分析，該方法簡單快捷，結果可靠，可用于白酒中微量甜蜜素的檢測。

關鍵詞 液質聯用；白酒；甜蜜素

中圖分類號 TS202.3 文獻標識碼 A 文章編號 1007-5739（2017）04-0246-02

Abstract A method for trance sodium cyclamate in liquor was established by HPLC-MS/MS.The solvent system was composed of water with 0.1% methane acid and methanol by 80∶20.Samples diluted 2 times with water were detected by multiple reaction monitoring mode（MRM）.The minimum detection limit was 2 ng/mL and the minimum quantification limit was 10 ng/mL.The correlation coefficient was higher than 0.999 9 from 10 ng/mL to 1 000 ng/mL，and the average recoveries were range from 102.9% to 106.6%.Maximum relative standard deviation was 2.5%.Using two types liquor for doing standard addition recoveries showed good reproducibility and finished a sample analysis within 3 min.The method is simple，quick and reliable，and can be used for analysis of trance sodium cyclamate in types of liquor.

Key words UPLC-MS/MS；liquor；sodium cyclamate

甜蜜素是一種人工合成甜味劑，具有高效的甜味特性。不法商家為改善酒的口味，欺騙消費者，存在違法添加的可能[1-3]。打擊違法添加，保障酒的飲用安全是監管部門的職責。因此，建立一種快捷、可靠的檢測甜蜜素的方法很有必要[4-5]。現在參照執行的檢測方法是《進出口食品中環己基氨基磺酸鈉的檢測方法液相色譜-質譜/質譜法》（SN/T 1948—2007）[6]，蒸餾白酒中甜蜜素的測定并沒有相應的國標檢測方法。因此，本試驗探究白酒中微量甜蜜素的檢測方法，以期為白酒中微量甜蜜素檢測國標方法的建立提供參考。甜蜜素檢測運用比較多的是氣相色譜法，但檢出限偏高，容易出現假陽性[7-9]。而液質聯用方法以其準確、檢測限低的特點正在白酒中微量甜蜜素的檢測中發揮重要作用[10-12]。

1 材料與方法

1.1 儀器與設備

1260型超高液相色譜/6460三重四級桿質譜聯用儀（美國Agilent公司），液相色譜儀配備Agilent G4226A自動進樣器，Agilent G1316C柱溫箱，Agilent G4220B泵，質譜儀配備電噴霧離子源（ESI，美國Agilent公司），數據處理采用Agilent MassHunter工作站進行，分析天平（型號：AL204/01，美國梅特勒-托利多公司）。

1.2 材料與試劑

酒樣：50種成品白酒，市售。甜蜜素標準品GBW（E）100173樣品編號為15090173，標準值10.00 mg/mL，相對擴展不確定度為1%；甲醇（色譜級，DIKMA公司），甲酸（色譜級，aladdin公司），蒸餾水（屈臣氏公司）。

1.3 試驗方法

1.3.1 貯備液。用移液槍精密移取100 μL標準品于10 mL容量瓶中，蒸餾水定容，配制出為100 μg/mL的貯備液。

1.3.2 標準使用溶液。用移液槍精密移取1 mL貯備液于10 mL容量瓶中，蒸餾水稀釋定容制成10 μg/mL的中間標準工作液。精密吸取10、25、50 μL的中間標準工作液于50 mL容量瓶中，制成2、5、10 ng/mL的標準工作溶液，精密吸取50、200、400、500 μL貯備液于50 mL容量瓶中，制成100、400、800、1 000 ng/mL的標準工作溶液，過0.45 μm濾膜，濾液待機分析。

1.3.3 色譜條件。色譜柱：ZORBAX SB-C18（21 mm×50 mm，1.8 μm），柱溫30 ℃，進樣量5 μL，流動相：A為0.1%（v/v）甲酸，B為甲醇，兩者比例為80∶20，流速0.2 mL/min。

1.3.4 質譜條件。離子源：ESI負離子模式，霧化器壓力45 psi，干燥器溫度350 ℃，干燥氣流速5 L/min，鞘氣流溫度350 ℃，鞘氣流流速11 L/min，毛細管電壓4 500 V，最優裂解電壓130 V，最優碰撞能30 V，多重反應監測（MRM），母離子178.1，子離子79.8，分析時長3 min，載氣為氮氣發生器制取的氮氣，碰撞氣為高純氮。

1.3.5 樣品的處理方法。用分析天平準確稱取1 mL均勻白酒于10 mL塑料離心管內，加1 mL水，蓋塞混勻，倒進一次性注射器內過0.45 μm濾膜（水相），濾液待機分析。

2 結果與分析

2.1 色譜條件的選擇

本試驗采用甲醇-0.1%（v/v）甲酸水體系作為流動相，體積比為20∶80時，甜蜜素響應值最高。流動相未引入銨鹽，對質譜起到一定的保護[13]。

2.2 質譜條件的選擇

選用400 ng/mL標準品溶液進行質譜條件的優化。首先在ESI負離子模式下進行全掃描（Scan），得到甜蜜素的一級質譜圖，確認178.1為其母離子；其次運行選擇離子監測模式（SIM）得到其最優裂解電壓為130 V；最后運行子離子掃描模式（PIS）優化其碰撞能，并得到二級質譜圖，最優碰撞能為30 V，定量子離子為79.8。再采用MRM方式監測178.1/79.8離子對，并根據優化數據調節質譜參數，進行定量分析。

2.3 樣品處理條件的選擇

將白酒樣品直接稀釋2倍，過0.45 μm濾膜（水相）過濾，直接上機分析，處理方法便捷[14-15]。

2.4 線性范圍與檢出限

配制濃度在2～1 000 ng/mL范圍的系列標準溶液，按文中所述方法測定。當甜蜜素標準溶液濃度為2 ng/mL時，S/N為3.26>3；當為10 ng/mL時，S/N為11.92>10，故此方法甜蜜素檢出限為2 ng/mL，定量限為10 ng/mL。甜蜜素在10～1 000 ng/mL有良好的線性關系，濃度點分別為10、100、400、800、1 000 ng/mL，標準曲線為y=11.054 2x+50.272 3，相關系數R2為0.999 9（圖1）。

2.5 方法精密度與加標回收率

選用2種類型白酒作為加標樣品（A和B），以驗證其重復性，稀釋2倍后作為加標基質（甜蜜素含量為0），每種均加標3個質量濃度，加標水平分別為100、400、800 ng/mL，采用上述建立的方法，每個添加水平重復測定6次，計算添加平均回收率和相對標準偏差，甜蜜素的平均回收率在102.9%～106.6%之間，相對標準偏差為0.2%～2.5%。方法精密度和加標回收率均符合殘留分析的要求。2種類型的白酒重復性良好，結果見表1。

2.6 樣品含量測定

運用本試驗建立的方法，測定市售白酒50個，每個樣品做2個平行，其中檢出2個白酒甜蜜素有響應值，但樣品260因S/N<3，未達到檢出限，視為未檢出，結果見表2，樣品261測定圖譜見圖2。

3 結論

本試驗使用超高壓液相-質譜聯用儀，以0.1%甲酸和甲醇為流動相建立的方法可以成功檢測出白酒中的微量甜蜜素。該方法樣品處理簡單，只需將酒樣稀釋2倍[16]。最低檢出限為2 ng/mL，最低定量限為10 ng/mL，在10～1 000 ng/mL時相關系數R2為0.999 9，平均回收率為102.9%～106.6%，最大相對標準偏差為2.5%（<5%）。方法精密度和加標回收率均符合殘留分析的要求，且能在3 min內完成一次進樣分析，方法快捷，結果可靠。該方法的建立可滿足監管部門的大規模監督抽驗任務，并能提供及時可靠的檢測數據，以期為白酒中甜蜜素檢測國家標準的建立提供參考。

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