內皮型一氧化氮合酶基因+894G/T多態性與偏頭痛發病的meta分析

蕫 晗， 國 琦， 郭志恒， 王 哲， 劉松巖

內皮型一氧化氮合酶基因+894G/T多態性與偏頭痛發病的meta分析

蕫 晗1， 國 琦2， 郭志恒3， 王 哲1， 劉松巖2

目的 分析內皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase，eNOS)基因+894G/T多態性與偏頭痛發病風險之間的相關性。 方法 本研究檢索時間從建庫至2016年10月。納入評估eNOS多態性(+894G/T)與偏頭痛發病風險之間相關性的病例對照研究。初篩得到365篇全文，經篩選后最終5篇納入meta分析。異質性分析采用I2檢驗，文獻質量評估采用英國牛津循證醫學中心文獻嚴格評價項目。結果 與GG+GT基因型相比，TT基因型增加有先兆偏頭痛(migraine with aura，MA)的發生風險(OR=1.56，95%CI1.11～2.20；I2= 0%，P=0.01)。在非高加索人群中，GT+TT基因型可增加偏頭痛發病風險(OR=1.53，95%CI1.08～2.16；I2= 0%，P=0.02)。結論 本研究提示內皮型一氧化氮合酶基因+894G/T多態性與偏頭痛發病風險之間有一定的關系，并且可能因人群遺傳背景的不同與偏頭痛亞型有一定關聯。

內皮型一氧化氮合酶； 基因多態性； 偏頭痛； 易感性

偏頭痛(migraine)是一種常見的慢性神經血管性疾病，可伴有惡心、嘔吐、畏聲、畏光等先兆癥狀。根據2004年國際頭痛協會(International Headache Society，IHS)分類標準，偏頭痛分為有先兆偏頭痛(migraine with aura，MA)和無先兆偏頭痛(migraine without aura，MO)。研究表明一氧化氮(nitric oxide，NO)與偏頭痛發病有關[1，2]，而一氧化氮合酶(nitric oxide synthase，NOS)是催化L-精氨酸生成NO的催化酶，其與偏頭痛發病的相關性也受到越來越多學者的重視[3，4]。NOS包括三種同工酶，即內皮型NOS(endothelial，eNOS)、誘導型NOS(inducible NOS，iNOS)與神經元型NOS(neuronal NOS，nNOS)。人類eNOS基因位于第7號染色體長臂(7q36)，全長約21 kb，含26個外顯子和25個內含子，現已發現eNOS基因存在多個多態性位點，其中第7號外顯子核苷酸894處G被T所代替，導致編碼產物第298位氨酸酸由Glu變為Asp(Glu298Asp)，后者可導致NO生成減少[3]。目前有關eNOS基因894G/T多態性與偏頭痛關系的研究結論不一[3～7]。本研究通過meta分析探究eNOS基因894G/T多態性與偏頭痛發病的相關性。

1 材料與方法

1.1 文獻檢索 本研究以“偏頭痛、一氧化氮合酶、多態性”為主題詞，計算機檢索中國期刊全文數據庫(CNKI)、中國生物醫學文獻數據庫(CBM)、維普中文科技期刊全文數據庫(VIP)、萬方數據庫；以“migraine，endothelial nitiric oxide synthase，eNOS，NOS3，polymorphism，migraine disorder”為主題詞檢索Pubmed、Embase、Cochrane、Web of Science等英文數據庫，并手工檢索納入研究的參考文獻。檢索時間從建庫至2016年10月。

1.2 文獻納入和排除標準 納入標準包括：(1)公開發表的一氧化氮合酶基因多態性與偏頭痛發熱相關性的病例對照研究(文種不限)；(2)研究對象均為偏頭痛患者及對照人群，民族不限；(3)研究方法均為聚合酶鏈式反應(PCR)或PCR-限制性片段長度多態性(PCT-RFLP)技術；(4)對照組基因型分布經Hardy-Weinberg(H-W)定律檢驗。排除標準為統計學方法不恰當，數據不全文，基礎性研究、綜述、病例報道、單臂研究。

1.3 文獻質量評價 參考英國牛津循證醫學中心文獻嚴格評價項目(Oxford critical appraisal skill program，Oxford CASP，2004)評價納入病例對照研究的文獻質量[8]。包括：(1)樣本量是否充足；(2)診斷標準是否清楚；(3)分組情況是否匹配；(4)對照組與病例組是否可比；(5)基因檢測方法是否合理；(6)數據是否充分。由2名研究者采用統一數據表獨立提取數據，而后交叉核對，必要時聯系原文獻作者，以確定試驗的具體實施過程。在數據提取過程中如有爭議，有第三位研究者一起參考原文討論后上協商解決。

1.4 統計學方法 對納入研究的基因型分布進行H-W定律檢驗，并應用Stata軟件(12.0版本)分析敏感性。采用RevMan 5.2軟件進行Meta分析。采用卡方檢驗對研究結果的異質性進行檢驗，用I2評價異質性大小(I2=0%～25%，無異質性；I2=0%～25%，中度異質性；I2=50%～75%，高異質性；I2=75%～100%，超高異質性)。若I2<50%采用固定效應模型，I2≥ 50%采用隨機效應模型進行數據合并，并計算OR值及95%CI。采用Stata分析發表偏移。P<0.05認為有統計學差異。

2 結 果

2.1 入選文獻基本情況 初檢共獲得到395篇文獻，排除綜述、系統評價、研究位點非一氧化氮合酶基因G894T、重復發表及數據不全文獻，最終納入5篇文獻[3～7]，文獻篩選過程(見圖1)。文獻質量評價結果顯示納入研究的診斷標準明確，樣本量充足，病例組與對照組匹配具有可比性，采用的基因檢測方法合理，實驗結果數據明確。納入研究的對照組基因型分布均符合H-W定律。納入文獻的基本特征(見表1)。本研究共納入偏頭痛患者997例，對照組805例，基因型分布及基因頻率(見表2)。

2.2 Meta分析 894G/T基因多態性與偏頭痛發病相關性(見表3)。GG/GT+TT、TT/GT+GG基因型及G/T等位基因與偏頭痛發病無明顯相關。亞組分析發現：與GT+GG基因型相比，TT基因型增加MA的發生風險(見圖2)，而GT+TT基因型與偏頭痛及其亞型的發病風險無關(見表3)。T等位基因亦與偏頭痛及其亞型的發病風險無關(見表3)。

對人群進行分析發現，在高加索(OR=1.32，95%CI0.93～1.86；I2=0%，P=0.12)及非高加索人群(OR=1.98，95%CI0.91～4.31；I2=0%，P=0.91)中，TT基因型與GT+GG基因型相比，并不增加偏頭痛發病風險。在非高加索人群中，GT+TT基因型可增加偏頭痛發病風險(OR=1.53，95%CI1.08～2.16；I2=0%，P=0.02)。

2.3 異質性分析 由于本研究初始文獻合并過程中異質性較大，因而需進行異質性分析。通過Galbraith圖確定異質性來源(見圖3)，發現文獻[7]存在異質性，進一步發現該研究患者與對照組性別構成有差異。分析T與G等位基因及GT+TT與GG基因型與偏頭痛發病關系時，發現文獻[7]剔除后，剩余文獻合并時異質性很小。T與G等位基因相比偏頭痛發病風險并不增加(OR=1.03，95%CI0.89～1.20；I2=0%，P=0.68)。GT+TT基因型與GG型者相比偏頭痛發病風險相當(OR=1.21，95%CI0.98～1.50；I2=3%，P=0.38)。進一步分析發現GT+TT基因型與MO發作風險高有關(OR=1.31，95%CI1.03～1.68；I2=0%，P=0.03)。

2.4 發表偏移 Begg’s及Egger’s檢驗均未發現明顯發表偏移存在，P分別為1.000與0.198。Begg’s檢驗漏斗圖(見圖4)。

圖1 文獻篩選流程圖

圖2 內皮型一氧化氮合酶多態性與偏頭痛亞型的相關性

圖3 Galbraith圖評估納入研究的異質性

圖4 Begg’s漏斗圖評估發表偏移

文獻年份地域例數偏頭痛對照組年齡(歲)偏頭痛對照組女性比例偏頭痛對照組1234520062008201120122014意大利西班牙巴西巴西土耳其1563371781501761253411179912331．4±7．6037．8±15．1##37．5±9．0532．7±9．2037．2±14．135．9±1．1036．0±1．2336．0±10．178．80%73．90%100%100%84．70%58．40%73．40%100%100%61．80%

#該研究分別給出MA與MO患者年齡，與對照比均無顯著性差異

3 討 論

雖然有關偏頭痛的發病機制目前尚未完全明了，但NO在偏頭痛發病中的作用受到國內外學者的公認。應用NO供體可誘導偏頭痛患者出現偏頭痛樣頭痛發作，提示NO與偏頭痛發作有關[9]。有研究也證實偏頭痛患者頭痛發作時其腦脊液及血中NO濃度明顯升高，間歇期偏頭痛患者腦脊液及血中NO濃度也高于對照組[2]。NO是由NOS催化L-精氨酸生成，而eNOS基因第7號外顯子核苷酸894處G被T所代替，導致編碼產物第298位氨酸酸由Glu變為Asp(Glu298Asp)，后者可導致NO生成減少。因此，理論上推測T等位基因或TT基因型可能與患者偏頭痛發病風險降低有關，而G等位基因或GG基因型可能與偏頭痛發病風險高有關。

然而，Borroni等研究發現，與正常對照相比，eNOS基因TT型可使MA發病風險增加約2倍。對于偏頭痛患者，與MO患者相比，eNOS基因GG型可使MA發病風險增加約3倍，這與上述推論并不一致[3]。Eroz等也報道TT基因型與偏頭痛發病風險增加有關[7]。上述結果提示偏頭痛發病機制的復雜性。但Toriello等并未發現eNOS的894G/T基因多態性與偏頭痛及其亞型存在相關性[4]。Goncalves進行的兩項研究亦發現894G/T基因多態性與偏頭痛發病風險有關[5，6]。

表2 納入研究的基因型分布及基因頻率

MA：有先兆偏頭痛，MO無先兆偏頭痛

表3 內皮型一氧化氮合酶基因多態性與偏頭痛發病風險

本研究發現，在全部人群中，TT純合子突變體增加MA的發病風險約1.5倍，而GT+TT基因型增加偏頭痛發病風險約1.3倍。在非高加索人群中，GT+TT基因型可增加偏頭痛的發病風險約1.5倍。由于本研究部分文獻合并過程中存在一定的異質性，因此，我們采用了Galbraith分析潛在異質性較大文獻。剔除該文獻后，后續合并文獻過程中，異質性均較小。Egger’s與Begg’s檢驗均提示本研究不存在發表偏移。

綜上，本研究提示內皮型一氧化氮合酶基因+894G/T多態性與偏頭痛發病風險之間有一定的關系，并且可能與人群遺傳背景的不同及偏頭痛亞型有一定關聯。

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Endothelial nitric oxide synthase(+894G/T)polymorphism and migraine susceptibility：a meta-analysis

DONGHan，GUOQi，GUOZhiheng，etal.

(DepartmentofGeriaficMedicine，theFirstHospitalofJilinUniversity，Changchun130021，China)

Objective Aims：To evaluate the correlations between endothelial nitric oxide synthase(eNOS)polymorphism(+894G/T)and the risk of migraine. Methods A literature search was performed for case-control studies focusing on eNOS polymorphism(+894G/T)and risk of migraine through October 2016.From 395 full-text articles，5 were included in this study. Heterogeneity was assessed with theI2index and quality assessment was performed using Oxford critical appraisal skill program. Results Compared with GG+GT genotypes，TT genotype was associated with migraine with aura(OR=1.56，95%CI1.11～2.20；I2=0%，P=0.01). In non-Caucasian population，GT+TT genotypes increased migraine susceptibility compared with GG genotype(OR=1.53，95%CI1.08～2.16；I2=0%，P=0.75). Conclusion This meta-analysis indicated a linkage between eNOS polymorphism(+894G/T)and the risk of migraine，which may be associated with enthicity and migraine subtypes.

Endothelial nitric oxide synthase； Polymorphism； Migraine； Susceptibility

2017-01-10；

2017-03-05

(1.吉林大學第一醫院老年病科，吉林 長春 130021；2.吉林大學中日聯誼醫院神經內科，吉林 長春 130033；3.吉林大學第一醫院產科，吉林 長春 130021)

劉松巖，E-mail：yan1966@163.com；王 哲，E-mail：wangzhe1989@me.com

1003-2754(2017)03-0254-04

R747.2

A