HPLC法測定腸炎安康膠囊中芍藥苷含量

張順平 張順吉.云南省曲靖市食品藥品檢驗檢測中心，云南 曲靖 655000；.云南省曲靖市第一人民醫院，云南 曲靖 655000

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HPLC法測定腸炎安康膠囊中芍藥苷含量

張順平1張順吉2
1.云南省曲靖市食品藥品檢驗檢測中心，云南 曲靖 655000；2.云南省曲靖市第一人民醫院，云南 曲靖 655000

目的：建立高效液相色譜法(HPLC)測定腸炎安康膠囊中芍藥苷的含量。方法：采用十八烷基鍵合硅膠色譜柱(4.6mm×250mm，5μm)；以乙腈-水(14：86)為流動相，流速為1.0mL/min；柱溫：30℃；檢測波長：230nm。結果：芍藥苷進樣量在0.1556～1.5560μg范圍內與峰面積呈良好線性關系(r=0.9999)；平均回收率為98.86%(RSD為0.37%)。結論：本方法準確、快速、簡便，結果穩定，可用于腸炎安康膠囊中芍藥苷的含量測定。

腸炎安康膠囊；芍藥苷；高效液相色譜法；含量測定

腸炎安康膠囊是云南省曲靖市第一人民醫院的院內制劑，處方由白芍、金蕎麥、黨參等十味藥組成，具有補中益氣、健胃化濕、消炎止痛的功效，臨床主要用于治療結腸炎和其他腸道炎癥。在現行質量標準[1]中未建立含量測定方法。白芍作為處方中的主藥，其有效成分為芍藥苷，因此本研究應用HPLC法對芍藥苷進行含量測定。

1 儀器與材料

1.1 儀器 Agilent1200型高效液相色譜儀(四元泵，自動進樣器，柱溫箱， VWD檢測器美國安捷倫科技公司)；KQ-300UDB型雙頻數控超聲清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；METTLE MS205DU電子天平(上海梅特勒-托利多儀器有限公司)；一體式超純水儀(PURELAB Flex 3，英國ELGA公司)。

1.2 試藥 腸炎安康膠囊(規格為0.4g×50粒/瓶，批號：20150502、20150711、20151119，云南省曲靖市第一人民醫院制劑室)；芍藥苷對照品(批號： 110736-201539，含量96.4%，中國食品藥品檢定研究院)；乙腈為色譜純，甲醇為分析純，水為超純水，其余試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件 色譜柱：Amethyst C18-H(200 mm×4.6，5μm)； 流動相：乙腈-水 (14∶86), 流速：1.0mL/min； 柱溫：30℃,；檢測波長：230nm；進樣量：5μL。

2.2 溶液制備

2.2.1 供試品溶液制備 取本品內容物20粒，混勻，取約0.9g，精密稱定，置25mL容量瓶中，加入甲醇約15mL，超聲(頻率：40KHz；功率：500W)40min，取出，放冷，定容至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，用0.45μm微孔濾膜濾過，即得。

2.2.2 對照品儲備液的制備 精密稱取芍藥苷對照品20.18mg，置25mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得對照品儲備溶液(濃度為：0.7781mg/mL)再精密量取上述溶液5mL置25mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得對照品使用溶液(濃度為0.1556mg/mL)。

2.2.3 陰性樣品溶液制備 按處方及工藝制備缺白芍藥材的陰性樣品(由云南省曲靖第一人民醫院提供)，再按“2.2.1”項下方法制備陰性樣品溶液。

2.3 線性關系的考察 分別精密吸取“2.2.2”項下制備的芍藥苷對照品溶液1、2、3、5、8、10μL在上述色譜條件進樣分析，分別重復進樣三次，記錄峰面積，以對照品質量X為橫坐標，峰面積平均值(Y)為縱坐標，繪制標準曲線，計算線性回歸方程：Y=1323.5000X-1.6769(r=0.9999)。結果表明芍藥苷進樣量在0.1556～1.5560μg范圍內具有良好線性關系。

2.4 重復性試驗 取同一批樣品(批號20151119)，精密稱取6份，每份約0.9g。按2.2.1”項下的方法制備供試品溶液，照上述色譜條件進樣5μL測定，記錄峰面積。結果測得每1g樣品中含芍藥苷3.3628mg，RSD=0.63%。

2.5 精密度試驗 精密吸取在“2.2.2”項下制備的芍藥苷對照品溶液在上述色譜條件下連續進樣6次，記錄峰面積。結果芍藥苷峰面積的RSD為0.47%，表明該儀器精密度良好。

2.6 穩定性試驗 取同一樣品溶液(批號20151119)，在同1色譜條件下，分別于制備后0、2、4、8、12、24h進行分析，記錄峰面積。結果芍藥苷峰面積的RSD為0.76%，表明樣品溶液在24h較穩定。

2.7 回收率試驗 分別取同一批樣品(批號20151119)6份，每份約0.45g，精密稱定，分別精密加入對照品儲備溶液(濃度為0.7781mg/mL)2.5mL，按“2.2.1”項下的方法處理，制備供試品溶液，分別測定，計算回收率。平均回收率為98.86%，RSD為0.37%。結果見表1。

2.8 專屬性試驗 分別精密吸取供試品溶液、芍藥苷對照品使用溶液和陰性樣品溶液各5μL，在上述色譜條件下，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，結果詳見圖1。結果可見，在與對照品色譜峰相應的位置上樣品具有相同保留時間的色譜峰，陰性樣品在對應位置無吸收，供試品中主峰與其相鄰色譜峰均能達到基線分離，對本品中芍藥苷的測定無干擾。

表1 回收率測定結果 (n=6)

2.9 樣品含量測定 取不同批號的供試品3批按“2.2.1”項下的方法處理，制備供試品溶液，按上述色譜條件進樣測定，記錄峰面積，以外標法計算含量。結果見表2。

表2 樣品含量測定結果 (n=3)

3 討論

3.1 提取方法的確定 本試驗中采用稀乙醇提取[2]、超純水直接提取、甲醇直接提取。結果采用甲醇超聲40min后，芍藥苷含量較前兩種方法提取有較大提高，表面第三種方法更能將樣品中的芍藥苷提取完全，最終確定采用甲醇超聲提取(頻率：45KHz;功率：240W)時間確定為40min。

3.2 流動相的確定 參考中國藥典及相關文獻中芍藥苷的含量測定報道[3-4]，分別采用：乙腈:0.1%磷酸(14∶86，V/V) 、甲醇-0.02mol/L磷酸二氫鉀溶液(28∶72，V/V)和乙腈:水(14：86，V/V)，同時試用了不同比例進行考察，結果發現三種方法均能達到要求，綜合經濟、高效的原則，最終確定采用乙腈-水 (14∶86，V/V)保留時間合適且各成分獲得較好的分離。

3.3 在實驗過程中發現，進樣體積不易過大，當進樣體積≥15μL時，色譜峰就會出現拖尾現象，而且隨著進樣量的提高會越來越嚴重，因此考慮，進樣量盡量控制在10μL以內。

綜上，該方法準確、快速、結果穩定，可用于腸炎安康膠囊中芍藥苷的含量測定。

[1]云南省食品藥品監督管理局.云南醫院制劑標準[S].滇ZJF/2005-556.

[2] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[S].北京：中國醫藥科技出版社，2015：105，666.

[3] 郭強，王梅.HPLC法測定坤靈丸中芍藥苷的含量[J].中醫研究，2013，26(8)：69-71

[4]杜蓉，張孟佑. HPLC法測定加味逍遙丸中芍藥苷與甘草苷的含量[J].中國藥房，2015(18)2571-2572.

Determination of Paeoniflorin in Changyanankang capsule by HPLC

ZHANG Shun ping1ZHANG Shun ji2

1.Qujing Inspection Center for Food and Drug，Qujing 655000，China；2.The First People’s Hospital of Qujing，Qujing 655000，China

Objective To establish an HPLC method for the determination of Paeoniflorin in changyanankang capsule.Methods Using octadecyl bonded silica gel chromatography column (4.6mm×250mm, 5μm); With acetonitrile - water (14∶86) were as mobile phase, flow rate of 1.0mL/min; Column temperature: 30 ℃ detection wavelength 230 nm.Results Good linearity was shown in the range of 0.1556～1.5560μg.Paeoniflorin with the average recovery of 98.86%(RSD=0.37%).Conclusion This method is accurate, rapid, simple and stable results. can be used for determination the content of Paeoniflorin in Changyanankang capsule.

Changyanankang; Paeoniflorin; HPLC; Content Determination

張順平(1982-)，男，漢族，本科，主管藥師，研究方向食品藥呂質量控制。E-mail:155105657@qq.com

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1007-8517(2017)07-0021-03

2017-01-23 編輯：程鵬飛)