梅毒聯合檢測在梅毒首診中的應用

蒲濤

摘要：目的 通過梅毒酶聯免疫吸附試驗（ELISA）、梅毒甲苯胺紅不加熱血清試驗（TRUST），梅毒螺旋體明膠顆粒凝集試驗（TPPA）3種方法的對比，評價梅毒聯合檢測在梅毒首診中的運用。方法 收集住院及門診7224例血清標本同時用3種方法檢測。結果 7224例血清標本中TP-ELISA陽性325例，陽性檢出率4.50%；TRUST法陽性260例，陽性檢出率3.60%；TPPA陽性檢出率320例，陽性檢出率4.43%。結論 3種檢測方法在方法學上各有其優缺點，同時3種檢測技術可以互補方法學上的缺點，減少梅毒診斷和治療中的誤差。

關鍵詞：梅毒；ELISA；TRUST；TPPA；誤差

梅毒是由蒼白螺旋體蒼白亞種即梅毒螺旋體引起的一種慢性性傳播疾病，可以侵犯皮膚、粘膜及其他多種組織器官，可有多種多樣的臨床表現，病程中有時呈無癥狀的潛伏狀態。目前我院采用ELISA、TRUSAT、TPPA三種血清學試驗聯合檢測梅毒，這3種檢測方法在梅毒的診療過程中各有不同的作用，常需聯合檢測才能滿足臨床的診療需求。

1 資料與方法

1.1標本來源 標本來源于醫院門診梅毒疑似患者和住院感染性疾病篩查患者血清樣本。

1.2檢測試劑

1.2.1 ELISA 檢測試劑與儀器：上海萬泰生物藥業有限公司 上海科華ST-36W型酶標儀（450 nm和630 nm雙波長）及洗板機。

1.2.2金標法 英科新創科技有限公司。

1.2.3 TRUSAT檢測試劑 上海榮盛生物藥業有限公司。

1.2.4 TPPA檢測試劑 日本富士賽樂迪亞TP-PA。

2 結果

7224例梅毒聯合檢測結果中，TP-ELISA法檢測出325例陽性標本，陽性檢出率4.50%；TRUST法檢出陽性260例，陽性檢出率3.60%；TPPA法檢測出陽性320例，陽性檢出率4.43%。三種血清學方法檢測梅毒結果的臨床意義見表1。

3 討論

我院以往臨床醫師為了減少患者就診的經濟負擔，要求對梅毒感染者只用ELISA一種方法或和TRUSAT同時對患者血清標本進行篩查，二者陽性再用TPPA確診。但是單一梅毒項目的檢測常由于假陰性或假陽性結果引起診斷誤差導致漏診和誤診，引起不必要的醫療糾紛。現在我院對門診疑似梅毒感染者和住院患者做感染性疾病篩查時，均采用TP-ELISA、TRUST和TPPA法三種方法同時檢測，提高了梅毒的診斷率，降低誤診率和漏診率。常用的梅毒檢測方法都存在技術性和生物性的假陽性和假陰性，如何有效避免和控制需要我們不斷探索。我們只有了解每一種實驗方法的優缺點和適用范圍，了解假陽性和假陰性的影響因素才能有效避免差錯事故的發生。

梅毒螺旋體侵入人體后，機體可針對梅毒螺旋體產生非特異性抗心磷脂抗體和特異性抗梅毒螺旋體抗體。非特異性抗心磷脂抗體是螺旋體半抗原與宿主蛋白結合，刺激機體產生抗磷脂的自身IgM和IgG抗體，即反應素。特異性抗梅毒螺旋體抗體主要是IgM和IgG抗體，IgM抗體出現時間早持續時間短，IgG抗體較IgM抗體出現時間晚且持續時間長，因此梅毒IgG抗體在有效的抗梅毒治療后相當長時間仍可持續存在，有些患者甚至終身抗體陽性，適用于梅毒的早期診斷和治療，但其抗體濃度較低不能預防再次感染為非保護性抗體。現在臨床實驗室常用的血清學試驗主要就是針對這兩種抗體的非螺旋體抗原試驗和螺旋體抗原試驗[1]。非密螺旋體抗原試驗為非特異性試驗，多用牛心類脂質作為抗原，測定患者血清中的反應素（抗脂質抗體）。密螺旋體抗原試驗是用密螺旋體抗原檢測患者血清中的特異性抗梅毒螺旋體抗體[1]。因此，為了提高梅毒的檢出率，降低梅毒假陽性和假陰性結果，我們針對這兩種抗體采用ELISA，TRUSAT，TPPA三種方法來協助臨床梅毒的輔助診斷和治療以及療效觀察。

ELISA：梅毒血清學的初篩試驗。現在ELISA采用雙抗原夾心法，主要是用基因重組體外表達的梅毒螺旋體特異抗原包被，包括螺旋體四種膜抗原檢測患者血中的特異性抗梅毒螺旋體抗體，由于ELISA檢測的是梅毒IgG和IgM混合抗體，因此該檢測方法對早晚期梅毒有較高的診斷特異性和敏感性，但陽性結果只能解釋病原體曾經感染過或正在感染機體，不能對梅毒疾病活動情況做出判斷，所以不能作為抗梅毒治療效果的監測手段[1]。同時血清中高濃度的梅毒特異性抗體常引起前帶現象，導致ELISA檢測的假陰性結果，此血清標本經倍數稀釋后可出現陽性反應，若同時用TRUAT和TPPA方法檢測結果均為陽性，這種情況常常出現在二期梅毒患者中，應該引起我們高度重視。檢測中還發現5例老年人假陽性結果，可能是少數老年人血清中存在干擾ELISA反應的白蛋白抗體或一些異常蛋白[5]。

梅毒金標法是新近發展起來的快速體外診斷技術，根據雙抗原夾心免疫層析原理，檢測梅毒螺旋體特異性抗體，操作簡單快速[2]。我們主要用于ELISA法陽性結果的復查，特別是前帶現象引起的ELISA法假陰性結果的確定。缺點是梅毒特異性抗體滴度較低的標本，由于測定值低于試劑的測定下線金標法結果往往為陰性。

TRUSAT：主要用于檢測血清中的反應素，操作簡單快速常作為梅毒的篩查試驗。但是此試驗特異性不高，檢測結果易受多種因素影響，除感染梅毒和其他螺旋體感染出現陽性外，某些自身免疫性疾病和生理狀況的改變如急慢性感染、懷孕、麻風、吸毒、系統性紅斑狼瘡、類風濕性關節炎等也可能產生低滴度的抗類脂質抗體引起交叉反應，造成生物學假陽性[4]，一般滴度小于1∶8，因此不能單獨根據此項檢測結果陽性診斷梅毒，可以用特異性較強的TPPA法來證實結果。同時為了避免TRUST假陰性或弱陽性結果，我們在檢測過程中梅毒TRUSA滴度常做到1∶8。另外肉眼觀察結果，其漏檢率也較高，故特異性和敏感性較低。同時由于抗心磷脂抗體較特異性抗體出現晚，而在梅毒晚期可以轉陰，因此該方法不適合一期和三期梅毒診斷[4]。TRUST滴度在臨床上主要用于患者驅梅治療后的療效觀察，有效治療后其檢測滴度表現為逐漸下降甚至轉陰，復發時又可出現，滴度變化與梅毒有效治療呈正關系。因此，該方法既可用于梅毒病原診斷，又可用于梅毒療效觀察、隨訪和復發的輔助診斷[2]。

TPPA：具有較高的特異性和敏感性，并且檢測方法快速、簡便。梅毒特異性抗體在感染梅毒螺旋體后血中出現時間及1、2期梅毒中的檢出率幾乎等同于非特異性抗體，感染者一旦感染后該抗體有可能終身檢測為陽性，因此不能作為梅毒的療效評估、復發和再感染診斷。梅毒特異性抗體生物學假陽性極低，可以利用此試驗排除非梅毒螺旋體抗原血清試驗所致的生物學假陽性。總之，在梅毒抗體檢測方法特異性上優于TRUST法，適用于梅毒ELISA和TRUST測定陽性后的確診試驗[4]，但不適合大批量標本的篩查。

由此可見，不同梅毒血清學檢測方法聯合運用能夠提高梅毒檢出的準確率[3]，同時在臨床工作中對待特殊結果應積極與醫生和患者溝通，做出合理的解釋。在操作過程中，除了生物學影響因素外，標本的溶血、細菌污染、保存不當、洗板時洗液溢孔污染等都會引起結果假陽性，這些情況都要注意避免。梅毒血清學檢查是診斷梅毒的重要依據，但不是唯一依據。因此，為了避免梅毒檢測方法學上的誤差，我們針對上述情況與醫生協商溝通，要求醫生對于疑似患者最好進行三種方法的聯合檢測，以提高梅毒血清學檢測結果的準確性，同時對梅毒的診斷除依據化驗結果外，更要詳細了解患者的生活史和既往病史，結合患者臨床表現、年齡等因素綜合分析后慎重做出判斷，這樣才能從根本上減少實驗方法學缺陷造成的假陽性和假陰性誤差，降低梅毒個體的漏檢和誤診。

參考文獻：

[1]張會平.聯合檢測方法檢測梅毒的效果評價[J].實用預防醫學，2012，19（9）：1141-1142.

[2]王華，李代渝，雷剛明.梅毒螺旋體血清學檢測方法比較[J].中華檢驗醫學雜志，2007，30（6）：660-661.

[3]鐘曉芬，毛凌哲.不同梅毒血清學試驗聯合運用價值分析[J].檢驗醫學，2016，31（3）：217-219.

[4]曹龍古，歐陽丹明，周志雄，等.梅毒螺旋體四種血清學檢測方法比較及檢測模式初探[J].實驗與檢驗醫學，2015，33（5）：571-573.

[5]王紅楓，方芳.老年梅毒155例臨床分析[J].皮膚性病學雜志，2015，29（1）：58-60.

編輯/王海靜