通絡祛風貼質量標準研究

陳韻姿，陳淑映，黃 健，何寶凝，梁秀清

(廣東省佛山市中醫院，廣東 佛山 528000)

·檢驗檢測·

通絡祛風貼質量標準研究

陳韻姿，陳淑映，黃 健，何寶凝，梁秀清

(廣東省佛山市中醫院，廣東 佛山 528000)

目的建立通絡祛風貼的質量標準。方法 采用薄層色譜法對貼膏中的腫節風、山茱萸進行定性鑒別，采用氣相色譜法測定冰片、樟腦的含量。結果腫節風、山茱萸特征斑點清晰，分離度好，陰性無干擾。冰片、樟腦質量濃度分別在0.125～0.60 g／L和 0.115～0.69 g／L范圍內與各自峰面積線性關系良好，平均加樣回收率分別為99.90%和 99.85%，RSD分別為0.12%和0.05%(n＝5)。結論 該方法簡便、準確、重復性好，可作為通絡祛風貼的質量標準。

通絡祛風貼；冰片；樟腦；質量標準

中醫將類風濕關節炎（RA）歸屬于“痹病”范疇， “痹”即閉阻不通之意。中醫理論認為，風、寒、濕、熱、毒、勞傷、產后及七情失調均為RA發病的誘因，而“正氣存內，邪不可干”，發病主要內因是肝腎不足或勞累過度耗損正氣，致素體正氣虧虛，正氣既虛外邪易入侵，復感風寒濕，氣血痹阻不行，關節閉澀，或風、寒、濕、熱之邪留滯筋骨關節，久之損傷肝腎陰血，筋骨失養，故見關節腫痛、僵硬、屈伸不利、活動障礙，即為痹癥[1－4]。通絡祛風貼的處方中含腫節風、山茱萸、冰片、樟腦等藥材，能祛風化濕、活血化瘀、消腫除痹止痛，用于跌打腫痛、風濕腰腿痛、關節痛、筋骨痛、肌肉酸痛等。為保證制劑質量和療效的穩定性，本研究中采用薄層色譜(TLC)法對貼膏中的腫節風、赤芍進行定性鑒別，采用氣相色譜法對冰片、樟腦進行含量測定。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

HWM－226型電熱恒溫水浴鍋（上海赫田科學儀器有限公司）；ZF－90型暗箱式紫外投射儀 (上海顧村電光儀器廠)；DHG－9146A型電熱恒溫鼓風干燥箱（上海浦東榮豐科學儀器有限公司）；AS2060B型超聲儀（北京康科瑞檢測有限公司）；6890N型氣相色譜儀（安捷倫公司），包括7683B自動進樣器，BALSTON Gas Generator 9150。

1.2 試藥

通絡祛風貼（自制，規格為7 cm×10 cm，批號分別為1451410，1451411，1451412）；馬錢苷對照品（批號為110736－200833），異嗪皮啶對照品（批號為110837－200304），樟腦對照品（批號為110747－200507），冰片對照品（批號為110743－200504），均購自中國食品藥品檢定研究院；其余試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 定性鑒別[5－6]

2.1.1 腫節風

取樣品1貼，剪成小塊，除去蓋襯，加甲醇40 mL，超聲處理30 min，濾過，濾液置水浴上蒸至體積不再減少，殘渣加水25 mL使溶解，將溶液移入分液漏斗中，加乙酸乙酯振搖提取2次，每次25 mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，殘渣加甲醇1 mL使溶解，作為供試品溶液。另取異嗪皮啶對照品，加甲醇制成每1 mL含0.5 mg的溶液，作為對照品溶液。取不含腫節風的陰性樣品1貼，按供試品溶液的制備方法制備陰性對照品溶液。照2010年版《中國藥典（一部）》附錄TLC法試驗，吸取供試品溶液4 μL、對照品溶液2 μL、陰性對照品溶液4 μL分別點于同一硅膠G薄層板上，以正己烷－乙酸乙酯－甲酸（6∶4∶0.8）為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（365 nm）下檢視。供試品溶液色譜中，在與對照品溶液色譜相應位置上，顯相同顏色的熒光斑點，陰性對照無干擾。詳見圖1 A。

2.1.2 山茱萸

取樣品1貼，剪成小塊，除去蓋襯，加甲醇30 mL，超聲處理30 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加水20 mL使溶解，用乙醚30 mL振搖提取，棄去乙醚液，水液用水飽和正丁醇振搖提取2次，每次20 mL，合并正丁醇液，再用正丁醇飽和水振搖洗滌2次，每次20 mL，合并正丁醇液，蒸干，殘渣加甲醇1 mL使溶解，作為供試品溶液。取馬錢苷對照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作為對照品溶液。取不含山茱萸的陰性樣品1貼，按供試品溶液的制備方法制備陰性對照品溶液。照2010年版《中國藥典（一部）》附錄TLC法試驗，供試品溶液、對照品溶液和陰性對照品溶液各 1 μL，分別點于同一硅膠G預制板上，以三氯甲烷－乙酸乙酯－甲醇－甲酸（40∶5∶10∶0.2）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，加熱至斑點顯色清晰。供試品溶液色譜中，在與對照品溶液色譜相應位置上，顯相同顏色的斑點，陰性對照無干擾。詳見圖1 B。

圖1 薄層色譜圖

2.2 含量測定[7－11]

2.2.1 溶液制備

供試品溶液：取本品5貼，剪成小塊，除去蓋襯，置燒瓶中，加水150 mL，照2010年版《中國藥典（一部）》附錄ⅩD揮發油測定法測定。自測定器上端加水使充滿刻度部分，并溢流入燒瓶為止，再加乙酸乙酯5 mL，加熱回流40 min，分取乙酸乙酯液，用鋪有無水硫酸鈉的漏斗濾過，濾液加乙酸乙酯至5 mL，作為供試品溶液。

對照品溶液：稱取冰片對照品62.50 mg、樟腦對照品57.50 mg，精密稱定，置25 mL容量瓶中，加乙酸乙酯分別制成每1 mL含冰片2.5 mg、樟腦2.3 mg的對照品溶液。

陰性對照品溶液：按處方比例及制法，不加冰片、樟腦和橡膠，制成不含冰片、樟腦的陰性樣品，照2.2.1項下方法制備陰性對照品溶液。

2.2.2 色譜條件與系統適用性試驗

色譜柱：HP－5毛細管柱（30m×0.32mm，0.25μm）；FID檢測器；載氣：氮氣，流速：1.5 mL／min；氫氣，流速：40 mL／min；色譜柱程序升溫：90℃保留7 min，5℃ ／min升至140℃；檢測器溫度：280℃，進樣口溫度：250℃；進樣量：2 μL，分流比：10∶1。分別取對照品溶液和供試品溶液各2 μL，注入氣相色譜儀，測定。供試品溶液色譜中呈現與對照品溶液保留時間相同的色譜峰，詳見圖2。

2.2.3 方法學考察

線性關系考察：分別精密量取對照品溶液 0.5，1.0，1.5，2.0，3.0 mL，置10 mL容量瓶中，加乙酸乙酯至刻度，得冰片0.125，0.25，0.30，0.40，0.60 g／L和樟腦0.115，0.23，0.345，0.46，0.69 g／L的系列對照品溶液，分別吸取2 μL注入氣相色譜儀，冰片峰面積分別為1 015.25，1 831.22，2 157.6，2 810.37，4 115.91；樟腦峰面積分別為986.40，1 609.44，2 232.49，2 855.54，4 101.63。以冰片、樟腦質量濃度（X，g／L）為橫坐標，對照品峰面積(Y)為縱坐標，進行線性回歸，得回歸方程，冰片 Y＝6 527.7 X＋199.29（r＝0.999 9，n＝5），樟腦Y＝5 417.8 X＋363.35（r＝0.999 9，n＝5）。結果表明，冰片與樟腦質量濃度分別在 0.125～0.60 g／L和0.115～0.69 g／L范圍內與峰面積線性關系良好。

精密度試驗：分別取冰片、樟腦對照品溶液各2 μL，照擬訂色譜條件連續進樣6次。結果冰片峰面積為1 009.3，1 009.1，1 009.4，1 008.3，1 010.4，1 010.7，平均為1 009.5，RSD＝0.81%(n＝6)；樟腦峰面積為1 004.6，1 005.7，1 005.2，1 004.5，1 004.4，1 004.5，平均為1 004.8，RSD＝0.47%(n＝6)。結果表明，儀器精密度良好。

穩定性試驗：依法制備供試品溶液，分別于0，2，4，8，12，24 h時進樣測定冰片和樟腦的含量。結果不同時間冰片峰面積分別為1 017.5，1 016.6，1 015.7，1 015.1，1 014.9，1 015.5，RSD＝0.90%(n＝6)，樟腦峰面積分別為1 005.8，1 005.6，1 006.4，1 004.7，1 004.9，1 004.5，RSD＝0.67%(n＝6)。結果表明，供試品溶液在24 h內穩定性良好。

圖2 氣相色譜圖

重復性試驗：取同一批（批號為1451501）樣品，分別依法制備供試品溶液6份，進樣測定。結果得6份樣品冰片含量平均值為0.5 mg，RSD＝0.79%(n＝6)；樟腦含量平均值為0.4 mg，RSD＝0.95%(n＝6)。結果表明，方法重復性良好。

加樣回收試驗：分別精密稱取陰性樣品6份，剪成小塊，除去蓋襯，分別加入一定量的冰片和樟腦對照品，依法制備供試品溶液，并進樣測定，計算回收率。結果見表1。

表1 加樣回收試驗結果（n＝6）

3 討論

3.1 處方中主要成分的探討[12－15]

腫節風為金粟蘭科腫節風的全草，又名草珊瑚、九節茶、接骨木等，是江西等省稀有的中藥材之一。其味辛、苦，性平，有抗菌消炎、清熱、解毒、祛風除濕、活血止痛、通經接骨等功效，用于治療各種炎癥性疾病、風濕關節痛、瘡瘍腫毒、跌打損傷。山茱萸含有生理活性較強的山茱萸苷、酒石酸、沒食子酸、蘋果酸、樹酯、鞣質和多種維生素等有效成分，具有增強免疫、抗炎、抗菌等藥理作用。樟腦味辛，性溫，具有通竅辟穢、溫中止痛等作用。冰片能通諸竅，散郁火，去翳明目，消腫止痛。

3.2 薄層色譜條件的選擇

腫節風的薄層鑒別曾采用甲苯－乙酸乙酯－甲酸（9∶4∶1），斑點分離不理想，認為與展開劑的極性過大有關，經多次試驗，以正己烷－乙酸乙酯－甲酸（6∶4∶0.8）為展開劑，具有良好的分離效果，斑點清晰，陰性對照無干擾，可作為本品的TLC鑒別系統。山茱萸的薄層鑒別中曾采用藥典方法，用甲醇超聲處理后的濃縮液進行點樣，發現雜質成分太多，特征斑點被掩蓋，改為超聲提取后分別用乙醚、水飽和正丁醇多次振搖提取，以正丁醇飽和的水進行提取、洗滌、處理。曾選擇藥典中三氯甲烷－甲醇（3∶1）作為山茱萸的展開劑，斑點分離不理想，改用三氯甲烷－乙酸乙酯－甲醇－甲酸（40∶5∶10∶0.2）為展開劑后，斑點分離清晰、理想。

3.3 氣相色譜方法的建立

曾用TLC法對方中的冰片樟腦進行定性鑒別，出現供試品溶液無斑點的情況，考慮到樟腦、冰片本身具有易揮發、易升華的化學性質，采用氣相色譜法對兩者進行含量測定。在提取方法的考察中，曾用乙酸乙酯浸泡貼膏1 h后超聲45 min，但此方法的回收率不及揮發油測定法高，而且揮發油測定法方法簡便快捷，故作為本研究中冰片、樟腦的提取方法。測定樟腦、冰片的含量時對柱溫進行了優選，柱溫過低時分析時間較長，柱溫過高時柱效偏低，冰片、樟腦未能完全分離。結果表明，用色譜柱程序升溫，90℃保留 7 min，5℃／min升至

140℃；檢測器溫度為280℃，進樣口溫度為250℃，分離效果最佳。

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Study on Quality Standard of Tongluo Qufeng Plaster

Chen Yunzi,Chen Shuying,Huang Jian,He Baoning,Liang Xiuqing
(Foshan Hospital of TCM,Foshan,Guangdong,China 528000)

Objective To establish the method for the quality standard of Tongluo Qufeng Plaster.M ethods Herba Sarcandrae and Fructus Corni in the Plaster were identified by TLC,while the content of borneol and camphor were determined by GC.Results The chromatographic spots were clear without interference and easy to recognize.The linear ranges of borneol and camphor were 0.125－0.60 g／L and 0.115－0.69 g／L,and the average recoveries were 99.90%(RSD＝0.12%)and 99.85%(RSD＝0.05%)respectively.Conclusion The method is easy,accurate and reproducible,which can be used as the quality standard for Tongluo Qufeng Plaster.

Tongluo Qufeng Plaster;borneol;camphor;quality standard

R284.1；R286.0

A

1006－4931(2017)05－0037－04

2016－10－23；

2016－11－22)

10.3969／j.issn.1006－4931.2017.05.010

陳韻姿（1982－），女，大學本科，主管藥師，主要從事醫院藥學及藥品檢驗工作，（電子信箱）wincechen＠163.com。