丹參素鈉對大鼠壓瘡缺血再灌注損傷ICAM-1，TNF-α，MPO表達的影響研究

吳 靜，沈翠珍

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丹參素鈉對大鼠壓瘡缺血再灌注損傷ICAM-1，TNF-α，MPO表達的影響研究

吳 靜，沈翠珍

[目的]探討丹參素鈉(SDSS)對大鼠壓瘡缺血再灌注損傷(I/RI)的保護作用及機制。[方法]將50只雄性SD大鼠隨機分為空白組、模型組及SDSS低劑量組、中劑量組、高劑量組，對低劑量、中劑量、高劑量組大鼠預防性使用丹參素鈉1周后，利用自制壓力裝置建立缺血再灌注損傷模型，應用酶聯免疫吸附法觀察各組大鼠細胞間黏附分子-1(ICAM-1)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)和髓過氧化物酶(MPO)的表達水平。[結果]與空白組相比，SDSS不同劑量組大鼠ICAM-1、TNF-α和MPO濃度顯著增高(P<0.05)；與模型組相比，注射丹參素鈉的大鼠ICAM-1、TNF-α和MPO含量均明顯降低(P<0.05)，且與劑量呈依賴關系。[結論]預防性使用丹參素鈉對壓瘡缺血再灌注損傷具有保護作用，能有效預防皮膚組織的炎性及氧化應激損害。

壓瘡；缺血再灌注損傷；丹參素鈉；大鼠；ICAM-1；TNF-α；MPO

壓瘡是由于皮膚和皮下組織通過長期受壓，血液循環不良，致使受壓部位組織缺血而腐敗乃至壞死[1]。目前，關于壓瘡的發生機制存在多種假說，其中缺血再灌注損傷(ischemia reperfusion injury，I/RI)是壓瘡發生的重要機制之一，是當前國內外關于壓瘡發生機制研究的熱點。缺血再灌注損傷學說認為[2]：機體受壓后，毛細血管被阻斷，可造成組織缺血缺氧，機體由此產生代償反應，在機體血流恢復后，組織器官的損傷反而加重，是外科常見的一種損傷，本實驗將選擇缺血再灌注損傷作為壓瘡模型進行實驗。丹參具有活血化瘀、涼血消腫、養陰生肌的作用[3]，臨床上已廣泛應用。丹參提取物丹參素鈉(sodium danshensu， SDSS)對于大鼠、小鼠以及細胞的缺血再灌注模型具有潛在的抗氧化、抑制炎癥反應、促進血管內皮生長[4]和抑制細胞凋亡的作用[5-6]，對于瘡面修復具有重要的促進作用。本研究將對大鼠預防性使用丹參素鈉后模擬缺血再灌注損傷模型，對丹參素鈉作用于壓瘡缺血再灌注損傷大鼠模型的細胞間黏附分子-1(ICAM-1)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)和髓過氧化物酶(MPO)的表達水平進行研究。

1 對象與方法

1.1 實驗動物 選取SPF級健康雄性SD大鼠50只，月齡12周～14周，體重220 g±20 g，由浙江中醫藥大學動物實驗中心提供。大鼠單籠飼養，自由進食、飲水，室內溫度維持在22 ℃～30 ℃，相對濕度50%～70%，明暗周期12 h。大鼠在恒溫恒濕條件下適應性喂養1周后開始實驗。將大鼠隨機分為空白組、模型組、低劑量組、中劑量組、高劑量組5組 ，每組10只，各組體質量比較，差異無統計學意義(P>0.05)。

1.2 施壓材料 依據蔡福滿等[7]的研究，利用自制壓力裝置，根據公式F=Mg，P=F/S(P指作用于大鼠大腿股薄肌處的壓強；F指作用于大鼠大腿股薄肌處的壓力；S指受壓面積，S=πr2；g=9.8 N/kg)。1.3 主要試劑 丹參素鈉(每支20 mg，批號JS90062-20mg)，購于上海金穗生物科技有限公司。

1.4 實驗方法 各組大鼠在恒溫恒濕條件下適應性喂養1周，參照權偉等[8]應用丹參素鈉的使用劑量，空白組和模型組大鼠腹腔注射生理鹽水2 mL/(kg·d)，低劑量組大鼠給予15 mL/(kg·d)丹參素鈉注射液腹腔注射；中劑量組大鼠給予30 mL/(kg·d)丹參素鈉注射液腹腔注射；高劑量組大鼠給予60 mL/(kg·d)丹參素鈉注射液腹腔注射，給藥期間大鼠正常進食、活動。給藥7 d后應用缺血再灌注循環來促進壓力性潰瘍的形成。模型組和SDSS組大鼠均于清潔級動物手術室內對一側后肢腹部及腿部皮膚進行剃毛，腹腔注射10%水合氯醛300 mg/kg進行麻醉后，選擇大鼠后肢有較大接觸面且皮下組織淺薄的股薄肌處施壓，造成局部組織缺血，每次缺血2 h后再將裝置取下，讓局部血流恢復30 min，如此循環。每只大鼠進行5個連續的循環，整個實驗過程中按需補充麻醉藥，且每2.5 h腹腔注射2 mL～3 mL葡萄糖鹽水(2.5%葡萄糖注射液加0.45%氯化鈉注射液)1次以保證麻醉期間正常水合。12 h后將裝置移去，心臟取血后處死實驗大鼠。

1.5 檢測方法 采用酶聯免疫吸附法(ELISA)檢測血清ICAM-1，TNF-α，MPO的表達水平，嚴格按照各檢測試劑盒說明書操作。

2 結果

2.1 丹參素鈉對缺血再灌注損傷大鼠模型ICAM-1濃度的影響 與空白組大鼠相比，各實驗組大鼠ICAM-1濃度顯著升高；與模型組相比，注射丹參素鈉組大鼠ICAM-1濃度較低，且與劑量呈依賴關系(P<0.05)。詳見表1。

表1 各組大鼠ICAM-1濃度比較(±s) ng/mL

2.2 丹參素鈉對缺血再灌注損傷大鼠模型MPO濃度的影響 與空白組相比，各實驗組大鼠MPO濃度顯著增高；與模型組相比，注射丹參素鈉的大鼠MPO濃度較低，且與劑量呈依賴關系。詳見表2。

表2 各組大鼠MPO濃度比較(±s) U/L

2.3 丹參素鈉對缺血再灌注損傷大鼠模型TNF-α濃度的影響 與空白組相比，各實驗組大鼠TNF-α濃度顯著增高；與模型組相比，注射丹參素鈉組大鼠TNF-α濃度較低，且與劑量呈依賴關系。詳見表3。

表3 各組大鼠TNF-α濃度比較(±s) ng/mL

3 討論

皮膚缺血再灌注損傷是導致壓瘡的重要因素，但發生機制尚未完全闡明，目前認為與炎癥反應、細胞凋亡等因素有關。因此，尋找有效的預防壓瘡缺血再灌注損傷的藥物是研究的熱點之一。目前關于丹參防治缺血再灌注損傷的研究多集中于心、腦、腎、肝、腸道等器官[9-12]，對丹參防治早期壓瘡缺血再灌注損傷的研究較少，對其療效和作用機制則更不明確。TNF-α是在缺血再灌注損傷早期就產生的一種炎性因子，對免疫反應、炎癥反應具有重要的調節和介導作用，可刺激單核巨噬細胞和其他細胞分泌炎性因子，還能增加細胞黏附分子的表達，促進中性粒細胞與內皮細胞的黏附，加劇缺血區的微血管阻塞。MPO為中性粒細胞的標志酶，是一種可靠的評價組織中中性粒細胞浸潤程度的指標，通過檢測MPO水平可反映壓瘡缺血再灌注時炎癥反應程度。ICAM-1是免疫球蛋白超家族黏附分子之一，ICAM-1同受體結合后可介導細胞與細胞、細胞與細胞外基質間黏附作用和炎癥反應[13-14]。研究發現：黏附分子介導的白細胞與內皮細胞相互黏附是白細胞聚集、活化和釋放炎性介質的關鍵，在缺血再灌注損傷中起著重要作用[15-16]。

本實驗對大鼠進行預防性腹腔注射丹參素鈉，觀察大鼠血清ICAM-1，MPO，TNF-α的表達水平。結果顯示：與空白組相比，各實驗組大鼠ICAM-1，TNF-α和MPO濃度顯著增高；與模型組相比，注射丹參素鈉的大鼠ICAM-1，TNF-α和MPO濃度較低，且與劑量呈依賴關系(P<0.05)。說明丹參素鈉能有效抑制缺血再灌注損傷大鼠血清TNF-α的產生和釋放，抑制炎癥因子則具有皮膚保護作用；能降低大鼠血清中MPO的水平，減輕壓瘡缺血再灌注時的炎癥反應程度；能有效下調壓瘡缺血再灌注損傷模型大鼠血清ICAM-1的表達，有效拮抗ICAM-1與炎性因子的黏附，從而抑制炎癥反應的發生，減輕皮膚損傷程度。因此，丹參素鈉對皮膚的保護作用與其顯著的抗炎密切相關。

4 小結

預防性使用丹參素鈉對壓瘡有保護作用，可降低大鼠血清中ICAM-1，TNF-α和MPO濃度，說明丹參素鈉可能通過抑制缺血再灌注損傷的炎癥反應來發揮皮膚保護作用，且在本研究中隨著給藥劑量的增加，血清中ICAM-1，TNF-α和MPO濃度水平減低，提示丹參素鈉減輕炎癥反應的作用與劑量存在一定的關系，其機制可能同減少炎癥反應對皮膚損害有關，但具體的分子機制有待進一步研究。

本研究結果為臨床治療壓瘡提供了新思路、新方法，在今后的研究中可進一步明確丹參素鈉的最佳劑量，并將實驗結果應用于臨床。若將預防性使用丹參素鈉這一概念應用于臨床工作中，醫護人員可有意識地對壓瘡高危人群進行篩查并預防性用藥，以預防壓瘡的發生，達到減輕病人痛苦、提高病人生活質量的目的。

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(本文編輯李亞琴)

Study on influence of sodium Darshensu on expression of ICAM-1，TNF-α and MPO in rats with pressure ischemia-reperfusion injury

Wu Jing，Shen Cuizhen

(College of Nursing，Zhejiang Chinese Medical University，Zhejiang 310000 China)

Objective:To explore the protective effect and mechanism of Salvianolic acid A sodium (SDSS) on rats with pressure ischemia-reperfusion injury.Methods:A total of 50 male SD rats were randomly divided into the blank group，model group，and SDSS low-dose group，middle-dose group and high-dose group.The rats in the low-dose，middle-dose and high-dose groups received the preventative use of SDSS.After a week，using the self-made pressure device was used to establish a model of ischemia-reperfusion injury，the expression level of ICAM-1，TNF-α，and MPO in each group were observed by enzyme-linked immunosorbent assay(ELISA).Results:Compared with the blank group，the levels of ICAM-1，TNF-α，and MPO in all experimental groups were significantly higher than those in blank group (P<0.05).Compared with the model group，the level of ICAM-1，TNF-α，and MPO in rats injected with SDSS were significant lower (P<0.05)，which was depended on the dose.Conclusion:Preventative use of SDSS had a protective effect on pressure sore ischemia-reperfusion injury，and it could effectively prevent inflammatory and oxidative stress damage of skin tissue.

pressure sores；ischemia-reperfusion injury；sodium Danshensu,SDSS；rats；ICAM-1；TNF-α；MPO

浙江省中醫藥科技計劃項目，編號：2016ZA051。

吳靜，碩士研究生在讀，單位：310000，浙江中醫藥大學護理學院；沈翠珍(通訊作者)單位：310000，浙江中醫藥大學護理學院。

R471

A

10.3969/j.issn.1009-6493.2017.13.011

1009-6493(2017)13-1576-03

2016-10-12；

2017-04-16)

引用信息 吳靜，沈翠珍.丹參素鈉對大鼠壓瘡缺血再灌注損傷ICAM-1，TNF-α，MPO表達的影響研究[J].護理研究，2017，31(13)：1576-1578.