瑞舒伐他汀鈣的質量實驗研究方法

朱海萍+藍艷萍

摘 要：建立高效液相色譜（HPLC）法對瑞舒伐他汀鈣片的含量、有關物質（包含3個已知雜質：非對映異構體，5-酮酸，內酯）的檢測方法。方法：色譜柱為Shimadzu shim-pack VP-ODS（4.6×150mm，4.6μm），柱溫為30℃，流速為1.2ml/min，檢測波長為254nm，進樣量為10μl，樣品室溫度為6℃，溶劑為乙腈：水=9：1。流動相A為0.2%甲酸（v/v）：乙腈=65：35，流動相B為0.2%甲酸（v/v）：乙腈=10：90。結論：本法簡便，合理嚴謹，精密度好，重復性好，檢測靈敏度高，可有效用于瑞舒伐他汀鈣含量、有關物質檢測。

關鍵詞：瑞舒伐他汀鈣片；HPLC；含量；有關物質

瑞舒伐他汀鈣片作為第二代他汀類強效降脂藥物，在臨床上主要用于原發性高膽固醇血癥、家族性高膽固醇血癥及其他原因引起的脂質紊亂等的治療[1]。藥品中的有關物質是否能得到合理、有效的控制，直接關系到藥品質量的可控性和安全性。本實驗主要采用HPLC法對瑞舒伐他汀鈣片中的含量及有關物質（非對映異構體、5-酮酸和內酯等）進行測定，本法靈敏度高，分離度好，結果準確，適用于瑞舒伐他汀鈣片含量及有關物質的測定。

1 色譜條件

流動相A：0.2%甲酸（v/v）：乙腈=65：35。流動相B：0.2%甲酸（v/v）：乙腈=10：90。

柱溫：30℃，流速：1.2ml/min，波長：254nm，進樣量：10ul，樣品室溫度：6℃，溶劑：乙腈：水=9：1。

2 溶液的配制

分離度貯備溶液：稱取標準品和其非對映異構體各4mg，內酯和5-酮酸各1mg，置100ml的量瓶中，以溶劑溶解，定容，搖勻。

光降解貯備溶液：稱取25mg瑞舒伐他汀鈣于50ml量瓶中，加水30ml溶解，于15000～25000Lux下照射2小時。

系統適應性溶液：取光降解貯備溶液1ml于10ml量瓶中，用分離度貯備液定容，搖勻。

2.1 系統適應性試驗

取系統適應性溶液，注入色譜儀。瑞舒伐他汀鈣和其非對映異構體的分離度為1.86，5-酮酸與光降解雜質1的分離度為1.34，光降解雜質1與光降解雜質2的分離度為3.53，光降解雜質2和內酯之間的分離度為3.00。表明該方法中各雜質峰與主峰能夠達到完全分離。

3 方法的驗證[2，3]

3.1選擇性

3.1.1 溶液配制

稱取瑞舒伐他汀鈣標準品、非對映異構體、內酯、5-酮酸各約37.5mg；空白輔料1約324mg，空白輔料2約648mg置25ml的量瓶中，加溶劑溶解、定容、搖勻，作為選擇性溶液。取續濾液測試。分別移取上述選擇性溶液各1ml分別置3個25ml量瓶中，再向這3個量瓶中分別加光降解貯備溶液1ml；加光降解貯備溶液1ml和空白輔料1溶液1ml；加光降解貯備溶液1ml和空白輔料2溶液1ml；加溶劑定容、搖勻，作為加樣混合溶液1、2、3。

3.1.2 液相分析

依次進溶劑及3.1.1配制溶液，記錄色譜圖。結果選擇性符合驗證接受標準的要求。空白輔料在HPLC中不出峰，不干擾瑞舒伐他汀鈣含量及有關物質測定。

3.2 精密度

3.2.1 系統精密度

根據2.1系統適應性試驗可知系統精密度良好。

3.2.2 方法精密度

取本品數片，精密稱定適量（約相當于瑞舒伐他汀36mg），置25ml的量瓶中，用溶劑溶解、定容、搖勻，取續濾液作為供試品溶液。稱取六份每份進樣兩針，計算含量和有關物質。瑞舒伐他汀鈣片的6份樣品含量的RSD為0.59%，非對映異構體含量的SD為0，5-酮酸含量的SD為0，內酯含量的SD為0.004%。符合實驗要求。

3.3 定量限與檢測限

以溶劑為空白， 連續進樣三次，按信噪比10：1的要求，配制溶液，進樣三次，計算定量限。結果瑞舒伐他汀鈣為0.2897μg/ml、非對映異構體為0.3463μg/ml、5-酮酸為0.2739μg/ml、內酯為0.1340μg/ml。按信噪比3：1的要求，配制溶液，進樣三次，計算檢測限。結果瑞舒伐他汀鈣為0.0869μg/ml、非對映異構體為0.1039μg/ml、5-酮酸為0.0822μg/ml、內酯為0.0402μg/ml。

3.4 線性關系

線性范圍確認：包括定量限、0.05%、0.2%、0.5%，1.0%，2.0%，5.0%，10%，50%，80%，100%，120%，150%。各濃度點（定量限→120%）各取10ul，進樣2次。以濃度（μg/ml）為橫坐標，峰面積為縱坐標進行線性回歸，r應>0.999，所得回歸方程（n=5）及線性范圍見表2。結果各樣品溶液均有良好的線性關系。

3.5 準確度

精密稱取瑞舒伐他汀鈣片約360mg三份，分別置25ml量瓶中，在這三份溶液中各加雜質定量限溶液；0.5%雜質溶液；1.0%雜質溶液；最后用溶劑溶解這三份樣品、定容、搖勻，取續濾液作為雜質準確度溶液1、2、3。每份樣品進樣1針，按定量測定方法，計算加入雜質的回收率，結果平均回收率均在95.0-105.0%之間。

3.6 溶液穩定性

取瑞舒伐他汀鈣數片，將其樣品溶液于6℃下放置4、8、12、24、48小時后，再分別測定它的標示量、非對映異構體含量、5-酮酸含量、內酯含量。標示量從0h96.82%、4h99.72%、8h98.65%、12h98.65%、24h97.68%、48h97.79%，可知標示量相對標準偏差RSD為1.02%，非對映異構體含量在這時間段內均為0.05%，5-酮酸含量均為0.05%，內酯含量均為0.06%，各雜質含量SD均≤0.1%。根據上述結果，瑞舒伐他汀鈣片樣品溶液在6℃放置48小時穩定。

3.7 方法耐用性

為了研究不同柱溫、不同流速、流動相中有機相比例改變對檢測影響。要求：分離度符合規定，正常結果和改變條件結果的含量RSD應≤2.0%，雜質SD應≤0.1%。樣品溶液配制方法同“3.2.2 方法精密度”。柱溫改為30±2℃；流速改為1.2±0.2ml/min；有機相比例改為±2%。每次實驗改變一個項目，其余條件不變。結果改變后各相鄰峰之間分離度符合實驗要求，正常結果和改變條件后結果的含量RSD應≤2.0%，雜質SD應≤0.1%。符合實驗要求。

4 結束語

根據上述結果，此方法適用于瑞舒伐他汀鈣片含量及有關物質的檢測。

參考文獻

[1]蔡偉，趙文鏡，羅永慧.高效液相色譜法測定瑞舒伐他汀鈣及其片劑的含量[J].江蘇藥學與臨床研究，2006，14（2）：97-100

[2]張軼華，郭永輝，韓彬，等.HPLC測定瑞舒伐他汀鈣片中的有關物質[J].中國現代應用藥學，2015，32（5）：582-585

[3]江莉，史道華，樓永明，等.HPLC法測定瑞舒伐他汀鈣片的含量[J].海峽藥學，2013，25（7）：74-76.