肝癌患者血液中VEGF—C、VEGF—D和受體VEGFR—3的表達及意義

廖文勝+胡虞乾+何陽陽+李西融+唐澄海+杜延召+李江發

[摘要] 目的 探討肝細胞性肝癌患者血液中血管內皮生長因子-C（VEGF-C）、血管內皮生長因子-D（VEGF-D）和血管內皮生長因子受體-3（VEGFR-3）的表達及意義。 方法 以2012年8月～2014年8月經南溪山醫院病理科確診為肝細胞性肝癌的40例患者為肝癌組，以同期10例非肝癌患者為非肝癌組。應用酶聯免疫吸附測定法檢測患者外周靜脈血VEGF-C、VEGF-D和VEGFR-3的表達，統計分析VEGF-C、VEGF-D和受體VEGFR-3的表達與肝癌發生的關系。 結果 VEGF-C、VEGF-D和VEGFR-3在肝癌組術前血液中的表達顯著高于肝癌組術后和非肝癌組（P < 0.05），并且VEGFR-3的表達與VEGF-C、VEGF-D的表達呈顯著正相關（r = 0.982、0.975，均P < 0.01）。 結論 VEGF-C、VEGF-D和受體VEGFR-3在肝細胞性肝癌患者血液中的表達明顯增高，其可能與肝癌的發生發展有關。

[關鍵詞] 肝細胞性肝癌；血管內皮生長因子-C；血管內皮生長因子-D；血管內皮生長因子受體-3

[中圖分類號] R735.7 [文獻標識碼] A [文章編號] 1673-7210（2017）03（b）-0099-03

Expression and significance of VEGF-C， VEGF-D and VEGFR-3 in the blood of patients with hepatocellular carcinoma

LIAO Wensheng1 HU Yuqian1 HE Yangyang1 LI Xirong1 TANG Denghai1 DU Yanzhao1 LI Jiangfa2

1.Department of Hepatopancreat Obliliary Surgery， Nanxishan Hospital， Guangxi Zhuang Autonomous Region， Guilin 541000， China； 2.Department of Hepatopancreat Obliliary Surgery， Affiliated Hospital of Guilin Medical University， Guangxi Zhuang Autonomous Region， Guilin 541000， China

[Abstract] Objective To explore the expression and significance of vascular endothelial growth factor-C （VEGF-C）， vascular endothelial growth factor-D （VEGF-D） and vascular endothelial growth factor receptor-3 （VEGFR-3） in the blood of patients with hepatocellular carcinoma. Methods Forty HCC patients diagnosed at the Department of Pathology of Nanxishan Hospital from August 2012 to August 2014 were selected as hepatoma group， and 10 non-hepatoma patients at the same time were selected as non-hepatoma group. The expression of VEGF-C， VEGF-D and VEGFR-3 in blood samples was determined by enzyme-linked immune-sorbent assay. The relationship between VEGF-C， VEGF-D and VEGFR-3 with the occurrence of hepatocellular carcinoma was analyzed statistically. Results The expression of VEGF-C， VEGF-D and VEGFR-3 in the blood of pre-operative hepatoma group was significantly higher than those in the blood of post-operative hepatoma group and non-hepatoma group （P < 0.05）. The expression of VEGFR-3 showed a significant positive correlation with the expression of VEGF-C， VEGF-D （r = 0.982， 0.975， all P < 0.01）. Conclusion The expression of VEGF-C， VEGF-D and VEGFR-3 are increased in the blood of patients with hepatocellular carcinoma， which may be associated with the occurrence and development of hepatocellular carcinoma.

[Key words] Hepatocellular carcinoma； Vascular endothelial growth factor-C； Vascular endothelial growth factor-D； Vascular endothelial growth factor receptor-3

肝細胞性肝癌（hepatocellular carcinoma，HCC）在男性患者各種腫瘤的病死率中排列第2位[1]，HCC具有易轉移、預后差、易復發等特點，腫瘤組織所具有的侵襲轉移的特點正是肝癌預后差、易復發的病理學基礎，其轉移的分子機制還不明確，研究原發性HCC的機制和轉移規律具有重要臨床價值。目前研究發現腫瘤的發生進展：生長、浸潤、轉移和復發都是依靠腫瘤新生血管和淋巴管的形成，如果控制腫瘤的新生血管的出現和淋巴管生成就能夠有效地控制腫瘤的生長及進展[2]。血管內皮生長因子（VEGF）通過促淋巴管及血管生長的作用，從而對肝癌的發生、發展產生影響。VEGF家族及其受體（VEGFR），通過與其受體結合發揮促淋巴管及血管生長的作用，在腫瘤中促進新生毛細血管生成，介導血管內皮細胞生成、增殖和遷移，并且誘導淋巴管生成，增加血管通透性，是腫瘤淋巴管和血管生成的重要因子[3]，與腫瘤的侵襲和轉移密切相關。通過對肝癌患者及正常人群的肝臟組織中血管內皮生長因子-C（VEGF-C）、血管內皮生長因子-D（VEGF-D）和血管內皮生長因子受體-3（VEGFR-3）的表達進行研究，發現在肝癌中這些因子表達明顯高于非肝癌組[4-5]，它們的高表達有可能促進了新生血管的形成和新生淋巴管的出現，進而加快了腫瘤的生長及轉移，從而影響HCC患者的預后[5-10]。同時，相關研究也發現，VEGF-C參與了肝惡性腫瘤轉移及淋巴轉移過程[11]。研究發現在HCC中可發現VEGFR-3顯著上調[12]。那么在患者血液中是否也存在這樣的情況，本研究對此進行了相關研究。

1 資料與方法

1.1 一般資料

以2012年8月～2014年8月經南溪山醫院病理科確診為HCC（診斷標準參見文獻[13]）的40例患者為肝癌組，以同期10例非肝癌患者為非肝癌組。肝癌組，男30例，女10例，平均年齡（52.5±11.5）歲；非肝癌組，男8例，女2例，平均年齡（54.0±11.6）歲。兩組性別、年齡比較差異無統計學意義（P > 0.05），具有可比性。對所有受試者在試驗前履行知情同意告知并獲同意后入選本研究。肝癌組患者根據原發性肝癌TMN系統：Ⅰ期14例，Ⅱ期15例，ⅢA期11例。

1.2 方法

非肝癌組取一次外周靜脈血液。肝癌組分別于術前1 d和術后1周采取外周靜脈血，外周靜脈血于清晨空腹采集靜脈血10 mL，取5 mL注入加有10% EDTA Na2 30 μL和抑肽酶40 μL的試管中，混勻；另5 mL加入空白試管中。以上標本均在10 min內于4℃低溫情況下以離心半徑10 cm、3000 r/min離心10 min，取上清置于-78℃冰箱保存，待標本收集完后行VEGF-C、VEGF-D和VEGFR-3檢測，并收集患者的一般臨床資料。

用酶聯免疫吸附測定（ELISA）法嚴格按試劑盒（人VEGF-C ELISA測定試劑盒、人VEGF-D ELISA測定試劑盒、人VEGFR-3 ELISA測定試劑盒）說明書測定血清VEGF-C、VEGF-D、VEGFR-3水平。

1.3 統計學方法

使用SPSS 19.0進行統計分析，計量資料以均數±標準差（x±s）表示，兩樣本比較使用t檢驗；等級資料相關分析用Spearman等級相關性分析，以P < 0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 VEGF-C、VEGF-D、VEGFR-3在肝癌組、非肝癌組血液中的表達

肝癌組術前血液中VEGF-C、VEGF-D、VEGFR-3的表達顯著高于肝癌組術后和非肝癌組，差異均有統計學意義（P < 0.05）。見表1。

2.2 VEGF-C、VEGF-D、VEGFR-3相關性分析

VEGFR-3的表達與VEGF-C、VEGF-D的表達呈顯著正相關（r = 0.982、0.975，均P < 0.01）。

2.3 術前VEGF-C、VEGF-D、VEGFR-3與肝癌患者分期的關系

術前血液中VEGF-C、VEGF-D、VEGFR-3的表達與患者臨床分期相關（P < 0.05）。見表2。

3 討論

本研究發現在肝癌組術前血清中VEGF-C、VEGF-D、VEGFR-3的表達顯著高于非肝癌組，與其他的研究結果一致[14-16]；Meta分析發現HCC患者組織中VEGF的表達明顯高于健康正常人，差異有統計學意義[17-20]；這意味著肝癌細胞分泌了大量的VEGF-C、VEGF-D、VEGFR-3，增進了腫瘤血管的生成，進而為腫瘤細胞生長提供所需的營養物質，并且為腫瘤轉移提供了可能的條件[21-22]。張紹武等[15]研究發現肝癌患者血清VEGF水平顯著高于對照組血清（P < 0.01）。

本研究發現肝癌組術后血清中VEGF-C、VEGF-D、VEGFR-3的表達較術前顯著下降。介入栓塞可以降低肝癌患者血清VEGF，改善患者預后[23-26]。手術切除腫瘤后，解除了肝癌對機體及血管生成的影響，使得肝癌刺激新生血管生成也減少，在一定程度上抑制了腫瘤的進展[14]。血液中這幾個因子的動態監測有可能作為判斷手術療效及預后的指標。

本研究發現VEGF-C、VEGF-D、VEGFR-3的表達與患者臨床分期密切相關，結果與其他研究相似，有轉移與復發的患者血清VEGF水平顯著高于無轉移與復發的患者[15]。這提示可以通過對VEGF-C、VEGF-D、VEGFR-3的檢測對患者是否有轉移進行預判。

研究發現VEGF-C、VEGF-D和受體VEGFR-3在肝癌患者血液中表達增高，表明VEGF與HCC可能存在的關系；術后表達較術前顯著降低，這幾個因子有可能用于判斷手術療效的監測。

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