菏澤市牡丹區238例手足口病病例核酸檢測分析

劉芳+卞學麗

[摘要] 目的 掌握菏澤市牡丹區手足口病病原學流行特征，為疫情研判和防控提供科學依據。 方法 應用實時熒光定量PCR對2013年1月～2016年12月采集的238例手足口病標本進行檢測，并對結果進行分析。 結果 238例手足口病病例標本中，腸道病毒核酸陽性184例（77.31%）。其中EV71陽性95例，占陽性標本總數的51.63%（95/184）；CoxA16陽性32例，占17.39%（32/184）；其他腸道病毒57例，占30.98%（57/184）。EV71型病毒在2013年和2015年呈高發流行，2014年和2016年呈低發流行。CoxA16型病毒在2013年和2015年未檢測到，2014年和2016年均有一定程度的流行。184例實驗室確診病例中1～3歲年齡散居兒童占67.39%。男女性別的比例為2.02。 結論 EV71型病毒是牡丹區HFMD的主要病原體。

[關鍵詞] 牡丹區；手足口病；實時熒光定量PCR；EV71

[中圖分類號] R512.5 [文獻標識碼] B [文章編號] 1673-9701（2017）08-0143-03

[Abstract] Objective To understand the epidemiological characteristics of hand-foot-mouth disease in Mudan district of Heze city， and provide scientific evidence for evaluation and prevention of epidemic situation. Methods The samples of 238 hand-foot-mouth disease cases collected from January 2013 to December 2016 were analyzed by real-time fluorescence quantitative PCR， and the results were analyzed. Results Of the 238 cases of hand-foot-mouth disease， 184 cases（77.31%） were positive for nucleic acid of enteroviruses. Among them， EV71 was positive in 95 cases， accounting for 51.63%（95/184） of the total number of positive cases； CoxA16 was positive in 32 cases， accounting for 17.39%（32/184）； other enteroviruses were in 57 cases， accounting for 30.98%（57/184）. EV71 virus was highly prevalent in 2013 and 2015， and was lowly prevalent in 2014 and 2016. CoxA16 virus was not detected in 2013 and 2015， and was prevalent in 2014 and 2016 to a certain degree. Among 184 laboratory confirmed cases， scattered children with 1～3 years of age accounted for 67.39%. The sex ratio of male to female was 2.02. Conclusion EV71 virus is the main pathogen of HFMD in Mudan District.

[Key words] Mudan district； Hand-foot-mouth disease； Real-time fluorescence quantitative PCR； EV71

手足口病（hand-foot-mouth disease，HFMD）是全球范圍廣泛流傳的一種傳染病，容易出現一定程度的暴發，造成社會、醫療和家庭的嚴重負擔[1]。HFMD發病以5歲以下嬰幼兒常見，是我國法定報告管理丙類傳染病[2]。引起HFMD的病毒屬于小RNA病毒科腸道病毒屬，有二十多種，人腸道病毒71型（Human enterovirus 71，EV71）、柯薩奇病毒A組（CoxA）中的16型最為常見，另外CoxA4、5、9、10型及B組的2、5型也較常見[3]。CoxA16感染的癥狀較輕，EV71感染性最強，并且除引發手、足、口腔等部位的皮疹或皰疹癥狀外，還可引起腦膜炎、腦炎、弛緩型癱瘓等嚴重的神經系統并發癥[4]。近年來，牡丹區手足口病持續高發，是當前嚴重的公共衛生問題之一。本文對2013年1月～2016年12月間在牡丹區區域內采集的238例HFMD病例標本的核酸檢測結果進行分析，探討其流行規律，為今后更科學的防控HFMD提供依據。

1 資料與方法

1.1 一般資料

牡丹區疾病預防控制中心從定點醫院菏澤市傳染病醫院對HFMD臨床診斷病例隨機采樣，2013年1月～2016年12月共采集居住地為牡丹區的病例標本共238份。

1.2 方法

發病3 d內采集患者的肛拭子標本，在低溫條件下運送至菏澤市疾病預防控制中心手足口病檢測實驗室，-20℃保存，需長期保存的標本存于-70℃冰箱。肛拭子樣本充分震蕩，4℃下高速離心，吸出上清液提取核酸。采用瑞士 Roche公司Roche High Pure Viral RNA Kit試劑盒提取標本病毒核酸，達安生物科技有限公司腸道病毒通用（EV）型、腸道病毒71（EV71）型、柯薩奇病毒A16（CoxA16）型熒光測定試劑盒配制反應體系，實時熒光定量PCR儀（ABI，StepOnePlus）進行核酸擴增反應。反應如下：逆轉錄50℃ 15 min；預擴增95℃ 15 min；擴增94℃ 15s→55℃ 45 s（收集熒光），40個循環。反應結束后，待檢樣品FAM通道呈典型S型擴增曲線且Ct值≤38，則報告為陽性；無典型S型擴增曲線或Ct值>38，則報告為陰性。

1.3 統計學方法

利用Microsoft Excel軟件建立數據庫，對標本資料和結果進行錄入及分析處理。

2 結果

2.1 檢測結果

2013年1月～2016年12月牡丹區共采集238份HFMD臨床診斷病例標本，EV核酸檢測陽性184例，檢出率77.31%（184/238）。其中EV71陽性95例，占陽性標本總數的51.63%（95/184）；CoxA16陽性32例，占17.39%（32/184）；其他腸道病毒57例，占30.98%（57/184）。

2.2 年度分布

2013年1月～2016年12月采集樣品的陽性率各年分別為90.32%（56/62），64.41%（38/59），71.43%（35/49）和80.88%（55/68）。2013年85.71%（48/56）的陽性病例是EV71型病毒感染，占絕對優勢；其他腸道病毒陽性占14.29%（8/56）；未檢測到CoxA16型病毒陽性。2014年EV71型和CoxA16型均有陽性感染，比例分別為28.95%（11/38）和26.32%（10/38），另有44.74%（17/38）的陽性病例是其他腸道病毒感染。2015年EV71型再次成為優勢病毒株，占77.14%（27/35）；其他腸道病毒占22.86%（8/35）；無CoxA16型陽性病例。2016年EV71型陽性占16.36%（9/55）；CoxA16型陽性占40.00%（22/55）；其他腸道病毒陽性占43.64%（24/55）。見表1。

2.3 人群分布

184例腸道病毒陽性病例中，男123例，占66.85%；女61例，男占33.15%。男女性別的比例為2.02。年齡最大9歲，最小3個月。以1～組和2～組病例最多，1～3歲幼童占67.39%（124/184），5歲以下兒童共占97.28%（179/184）。見表2。

3討論

1957年新西蘭首次報道HFMD，1958年分離出CoxA16型腸道病毒，1959年提出HFMD命名，1972年美國首次確認EV71型病毒，此后這兩種病毒型別交替出現成為HFMD的主要病原體[5]。

對HFMD病病原體各型別的感染情況進行監測與分析，以掌握當地HFMD病原體的流行趨勢，可對該病的治療和防控提供準確可靠的實驗室依據[6]。通過臨床癥狀和體征難以確定病原體類型，目前，HFMD的病原學檢測技術主要包括病毒分離、血清學檢測、RT-PCR和實時熒光定量PCR等方法。實時熒光定量PCR方法避免了前兩種方法不能滿足標本量大、時間緊迫的問題，又因省去了常規RT-PCR擴增后產物要進行電泳分析的步驟，所以無論從敏感性、特異性與速度上都是最具有優勢的HFMD的病原學檢測技術[7，8]。

應用實時熒光定量PCR方法檢測采集的238例HFMD臨床診斷病例樣本，EV核酸檢測陽性184例，檢出率77.31%。其中EV71占陽性標本總數的51.63%，CoxA16占17.39%，其他腸道病毒占30.98%。EV71型病毒在2013年和2015年呈高發流行，2014年和2016年呈低發流行。CoxA16型病毒在2013和2015年未檢測到，2014年和2016年均有一定程度的流行。這表明EV71型病毒是牡丹區HFMD的主要病原體，并且EV71型和CoxA16型病毒的流行程度均具有隔一年一變化的特征。這與周邊相鄰地區的流行特征相似[9，10]。這一間隔式流行特征對本區HFMD的流行趨勢判斷具有重要意義。

對健康人群的研究表明[11，12]，約44%新生兒體內具有從母體獲得的EV71抗體，1個月后抗體水平迅速降低，1～23月齡的嬰幼兒抗體陽性率僅為0.8%，2～5歲兒童抗體陽性率每年提高約12%，15歲以上人群血清抗體陽性率超過50%，因此5歲以下（尤其是3歲以下）兒童是HFMD的高發人群。牡丹區的184例實驗室確診病例中，1～3歲幼童占67.39%，5歲以下共占97.28%。男女性別的比例為2.02，表明男童比女童更易感染HFMD，這可能是和男童活動量大且衛生習慣較差有關。這些人群分布的特征與其他地區的研究結果一致[13，14]。對菏澤市HFMD兒童病例EV71型抗體水平的檢測分析表明[15]，男童EV71 IgM抗體陽性率顯著高于女童，男童的EV71急性感染發病率顯著高于女童。

目前手足口病疫苗雖已上市，但因屬二類疫苗且價格較高，接種率有限，而且此疫苗僅用于預防EV71型病毒感染的HFMD，所以手足口病的預防和控制工作需繼續保持警惕性，在傳染源、傳播途徑和易感人群等各個環節采取積極有效的防控措施，不能掉以輕心。

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