菏澤市牡丹區(qū)238例手足口病病例核酸檢測(cè)分析

劉芳+卞學(xué)麗

[摘要] 目的 掌握菏澤市牡丹區(qū)手足口病病原學(xué)流行特征，為疫情研判和防控提供科學(xué)依據(jù)。 方法 應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR對(duì)2013年1月～2016年12月采集的238例手足口病標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)，并對(duì)結(jié)果進(jìn)行分析。 結(jié)果 238例手足口病病例標(biāo)本中，腸道病毒核酸陽(yáng)性184例（77.31%）。其中EV71陽(yáng)性95例，占陽(yáng)性標(biāo)本總數(shù)的51.63%（95/184）；CoxA16陽(yáng)性32例，占17.39%（32/184）；其他腸道病毒57例，占30.98%（57/184）。EV71型病毒在2013年和2015年呈高發(fā)流行，2014年和2016年呈低發(fā)流行。CoxA16型病毒在2013年和2015年未檢測(cè)到，2014年和2016年均有一定程度的流行。184例實(shí)驗(yàn)室確診病例中1～3歲年齡散居兒童占67.39%。男女性別的比例為2.02。 結(jié)論 EV71型病毒是牡丹區(qū)HFMD的主要病原體。

[關(guān)鍵詞] 牡丹區(qū)；手足口病；實(shí)時(shí)熒光定量PCR；EV71

[中圖分類號(hào)] R512.5 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] B [文章編號(hào)] 1673-9701（2017）08-0143-03

[Abstract] Objective To understand the epidemiological characteristics of hand-foot-mouth disease in Mudan district of Heze city， and provide scientific evidence for evaluation and prevention of epidemic situation. Methods The samples of 238 hand-foot-mouth disease cases collected from January 2013 to December 2016 were analyzed by real-time fluorescence quantitative PCR， and the results were analyzed. Results Of the 238 cases of hand-foot-mouth disease， 184 cases（77.31%） were positive for nucleic acid of enteroviruses. Among them， EV71 was positive in 95 cases， accounting for 51.63%（95/184） of the total number of positive cases； CoxA16 was positive in 32 cases， accounting for 17.39%（32/184）； other enteroviruses were in 57 cases， accounting for 30.98%（57/184）. EV71 virus was highly prevalent in 2013 and 2015， and was lowly prevalent in 2014 and 2016. CoxA16 virus was not detected in 2013 and 2015， and was prevalent in 2014 and 2016 to a certain degree. Among 184 laboratory confirmed cases， scattered children with 1～3 years of age accounted for 67.39%. The sex ratio of male to female was 2.02. Conclusion EV71 virus is the main pathogen of HFMD in Mudan District.

[Key words] Mudan district； Hand-foot-mouth disease； Real-time fluorescence quantitative PCR； EV71

手足口病（hand-foot-mouth disease，HFMD）是全球范圍廣泛流傳的一種傳染病，容易出現(xiàn)一定程度的暴發(fā)，造成社會(huì)、醫(yī)療和家庭的嚴(yán)重負(fù)擔(dān)[1]。HFMD發(fā)病以5歲以下嬰幼兒常見(jiàn)，是我國(guó)法定報(bào)告管理丙類傳染病[2]。引起HFMD的病毒屬于小RNA病毒科腸道病毒屬，有二十多種，人腸道病毒71型（Human enterovirus 71，EV71）、柯薩奇病毒A組（CoxA）中的16型最為常見(jiàn)，另外CoxA4、5、9、10型及B組的2、5型也較常見(jiàn)[3]。CoxA16感染的癥狀較輕，EV71感染性最強(qiáng)，并且除引發(fā)手、足、口腔等部位的皮疹或皰疹癥狀外，還可引起腦膜炎、腦炎、弛緩型癱瘓等嚴(yán)重的神經(jīng)系統(tǒng)并發(fā)癥[4]。近年來(lái)，牡丹區(qū)手足口病持續(xù)高發(fā)，是當(dāng)前嚴(yán)重的公共衛(wèi)生問(wèn)題之一。本文對(duì)2013年1月～2016年12月間在牡丹區(qū)區(qū)域內(nèi)采集的238例HFMD病例標(biāo)本的核酸檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行分析，探討其流行規(guī)律，為今后更科學(xué)的防控HFMD提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

牡丹區(qū)疾病預(yù)防控制中心從定點(diǎn)醫(yī)院菏澤市傳染病醫(yī)院對(duì)HFMD臨床診斷病例隨機(jī)采樣，2013年1月～2016年12月共采集居住地為牡丹區(qū)的病例標(biāo)本共238份。

1.2 方法

發(fā)病3 d內(nèi)采集患者的肛拭子標(biāo)本，在低溫條件下運(yùn)送至菏澤市疾病預(yù)防控制中心手足口病檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室，-20℃保存，需長(zhǎng)期保存的標(biāo)本存于-70℃冰箱。肛拭子樣本充分震蕩，4℃下高速離心，吸出上清液提取核酸。采用瑞士 Roche公司Roche High Pure Viral RNA Kit試劑盒提取標(biāo)本病毒核酸，達(dá)安生物科技有限公司腸道病毒通用（EV）型、腸道病毒71（EV71）型、柯薩奇病毒A16（CoxA16）型熒光測(cè)定試劑盒配制反應(yīng)體系，實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀（ABI，StepOnePlus）進(jìn)行核酸擴(kuò)增反應(yīng)。反應(yīng)如下：逆轉(zhuǎn)錄50℃ 15 min；預(yù)擴(kuò)增95℃ 15 min；擴(kuò)增94℃ 15s→55℃ 45 s（收集熒光），40個(gè)循環(huán)。反應(yīng)結(jié)束后，待檢樣品FAM通道呈典型S型擴(kuò)增曲線且Ct值≤38，則報(bào)告為陽(yáng)性；無(wú)典型S型擴(kuò)增曲線或Ct值>38，則報(bào)告為陰性。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

利用Microsoft Excel軟件建立數(shù)據(jù)庫(kù)，對(duì)標(biāo)本資料和結(jié)果進(jìn)行錄入及分析處理。

2 結(jié)果

2.1 檢測(cè)結(jié)果

2013年1月～2016年12月牡丹區(qū)共采集238份HFMD臨床診斷病例標(biāo)本，EV核酸檢測(cè)陽(yáng)性184例，檢出率77.31%（184/238）。其中EV71陽(yáng)性95例，占陽(yáng)性標(biāo)本總數(shù)的51.63%（95/184）；CoxA16陽(yáng)性32例，占17.39%（32/184）；其他腸道病毒57例，占30.98%（57/184）。

2.2 年度分布

2013年1月～2016年12月采集樣品的陽(yáng)性率各年分別為90.32%（56/62），64.41%（38/59），71.43%（35/49）和80.88%（55/68）。2013年85.71%（48/56）的陽(yáng)性病例是EV71型病毒感染，占絕對(duì)優(yōu)勢(shì)；其他腸道病毒陽(yáng)性占14.29%（8/56）；未檢測(cè)到CoxA16型病毒陽(yáng)性。2014年EV71型和CoxA16型均有陽(yáng)性感染，比例分別為28.95%（11/38）和26.32%（10/38），另有44.74%（17/38）的陽(yáng)性病例是其他腸道病毒感染。2015年EV71型再次成為優(yōu)勢(shì)病毒株，占77.14%（27/35）；其他腸道病毒占22.86%（8/35）；無(wú)CoxA16型陽(yáng)性病例。2016年EV71型陽(yáng)性占16.36%（9/55）；CoxA16型陽(yáng)性占40.00%（22/55）；其他腸道病毒陽(yáng)性占43.64%（24/55）。見(jiàn)表1。

2.3 人群分布

184例腸道病毒陽(yáng)性病例中，男123例，占66.85%；女61例，男占33.15%。男女性別的比例為2.02。年齡最大9歲，最小3個(gè)月。以1～組和2～組病例最多，1～3歲幼童占67.39%（124/184），5歲以下兒童共占97.28%（179/184）。見(jiàn)表2。

3討論

1957年新西蘭首次報(bào)道HFMD，1958年分離出CoxA16型腸道病毒，1959年提出HFMD命名，1972年美國(guó)首次確認(rèn)EV71型病毒，此后這兩種病毒型別交替出現(xiàn)成為HFMD的主要病原體[5]。

對(duì)HFMD病病原體各型別的感染情況進(jìn)行監(jiān)測(cè)與分析，以掌握當(dāng)?shù)豀FMD病原體的流行趨勢(shì)，可對(duì)該病的治療和防控提供準(zhǔn)確可靠的實(shí)驗(yàn)室依據(jù)[6]。通過(guò)臨床癥狀和體征難以確定病原體類型，目前，HFMD的病原學(xué)檢測(cè)技術(shù)主要包括病毒分離、血清學(xué)檢測(cè)、RT-PCR和實(shí)時(shí)熒光定量PCR等方法。實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法避免了前兩種方法不能滿足標(biāo)本量大、時(shí)間緊迫的問(wèn)題，又因省去了常規(guī)RT-PCR擴(kuò)增后產(chǎn)物要進(jìn)行電泳分析的步驟，所以無(wú)論從敏感性、特異性與速度上都是最具有優(yōu)勢(shì)的HFMD的病原學(xué)檢測(cè)技術(shù)[7，8]。

應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法檢測(cè)采集的238例HFMD臨床診斷病例樣本，EV核酸檢測(cè)陽(yáng)性184例，檢出率77.31%。其中EV71占陽(yáng)性標(biāo)本總數(shù)的51.63%，CoxA16占17.39%，其他腸道病毒占30.98%。EV71型病毒在2013年和2015年呈高發(fā)流行，2014年和2016年呈低發(fā)流行。CoxA16型病毒在2013和2015年未檢測(cè)到，2014年和2016年均有一定程度的流行。這表明EV71型病毒是牡丹區(qū)HFMD的主要病原體，并且EV71型和CoxA16型病毒的流行程度均具有隔一年一變化的特征。這與周邊相鄰地區(qū)的流行特征相似[9，10]。這一間隔式流行特征對(duì)本區(qū)HFMD的流行趨勢(shì)判斷具有重要意義。

對(duì)健康人群的研究表明[11，12]，約44%新生兒體內(nèi)具有從母體獲得的EV71抗體，1個(gè)月后抗體水平迅速降低，1～23月齡的嬰幼兒抗體陽(yáng)性率僅為0.8%，2～5歲兒童抗體陽(yáng)性率每年提高約12%，15歲以上人群血清抗體陽(yáng)性率超過(guò)50%，因此5歲以下（尤其是3歲以下）兒童是HFMD的高發(fā)人群。牡丹區(qū)的184例實(shí)驗(yàn)室確診病例中，1～3歲幼童占67.39%，5歲以下共占97.28%。男女性別的比例為2.02，表明男童比女童更易感染HFMD，這可能是和男童活動(dòng)量大且衛(wèi)生習(xí)慣較差有關(guān)。這些人群分布的特征與其他地區(qū)的研究結(jié)果一致[13，14]。對(duì)菏澤市HFMD兒童病例EV71型抗體水平的檢測(cè)分析表明[15]，男童EV71 IgM抗體陽(yáng)性率顯著高于女童，男童的EV71急性感染發(fā)病率顯著高于女童。

目前手足口病疫苗雖已上市，但因?qū)俣愐呙缜覂r(jià)格較高，接種率有限，而且此疫苗僅用于預(yù)防EV71型病毒感染的HFMD，所以手足口病的預(yù)防和控制工作需繼續(xù)保持警惕性，在傳染源、傳播途徑和易感人群等各個(gè)環(huán)節(jié)采取積極有效的防控措施，不能掉以輕心。

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