心肌IK1激動劑zacopride 抗左甲狀腺素致大鼠心室重構作用的研究

郭云飛,楊 迎,劉 福,翟旭雯,張 研,李 盼,張 莉,吳博威,劉清華

(山西醫科大學 1.病理生理學教研室、2.生理學教研室，山西 太原 030001；3. 山西省兒童醫院臨床檢驗中心，山西 太原 030001)

心肌IK1激動劑zacopride 抗左甲狀腺素致大鼠心室重構作用的研究

郭云飛1,楊 迎1,劉 福1,翟旭雯2,張 研1,李 盼1,張 莉3,吳博威2,劉清華1

(山西醫科大學 1.病理生理學教研室、2.生理學教研室，山西 太原 030001；3. 山西省兒童醫院臨床檢驗中心，山西 太原 030001)

目的 探討心肌內向整流鉀通道(IK1)激動劑zacopride對左甲狀腺素致大鼠心室重構的抑制作用及可能的機制。 方法 SD大鼠，隨機分為對照組，左甲狀腺素模型組，zacopride 5、15、50 μg·kg-1干預組，zacopride (15 μg·kg-1)+ 氯喹(7.5 μg·kg-1)組和卡托普利陽性對照組。連續給藥10 d。超聲測量大鼠左室舒張期內徑(LVIDd)、左室收縮期內徑(LVIDs)、室間隔厚度(IVS)、左室射血分數(EF)和左室短軸縮短率(FS)；測心肌肥厚指數；Langendorff急性分離成年大鼠單個心室肌細胞，全細胞膜片鉗技術測量各組IK1電流、L-型鈣通道(ICa-L)電流的變化； Fluo-4 激光共聚焦顯微鏡觀察細胞形態，測胞內游離鈣離子濃度([Ca2+]i)。 結果 與對照組比，左甲狀腺素模型組全心和左心肥厚指數明顯增加，LVIDd、LVIDs增大，IVS增厚， EF和FS明顯降低(P<0.01)；IK1電流減小，ICa-L增加(P<0.01)；心室肌細胞增寬、肥大，[Ca2+]i增高(P<0.01)。Zacopride干預后，各指標均明顯改善，15 μg·kg-1為最適效應劑量。氯喹7.5 μg·kg-1作為IK1通道相對特異性阻斷劑，可阻斷zacopride對IK1通道的激動效應，明顯逆轉zacopride的減輕鈣超載和抗心室重構作用。結論 Zacopride可能通過選擇性激動心肌IK1，減輕細胞內鈣超載而逆轉左甲狀腺素誘發的心室重構。

內向整流鉀通道；zacopride；左甲狀腺素；心室重構；心肌肥大；鈣超載

心衰是許多心血管疾病的最終病程，也是臨床患者的主要致死原因。近年來，很多學者認為心室重構是心衰的標志性特征。心室肥大是心室重構進程中出現的結構改變，可作為一個獨立的臨床死亡危險因素，包括細胞、分子、代謝的一系列適應性變化到失代償性改變，最終導致心衰。在心室重構的進程中，往往伴有某些離子通道、交換體和離子泵的變化，即電重構，如心肌電壓門控鈣通道電流 (L-Ca2+current,ICa-L) 的變化，瞬時外向鉀電流(transient outward K+current,Ito)、ATP敏感性鉀電流(ATP-sensitive potassium current,IKATP)和內向整流鉀電流(inward rectifier potassium current,IK1)下調，鈉鈣交換電流[Na+-Ca2+exchanger (NCX) current,INa/Ca]增強及鈉鉀泵的抑制等[1-2]。因此，通過調節離子通道或轉運體功能，進而逆轉心室重構已成為當前心血管領域中重要的研究內容之一。

以往研究抗心室重構藥物時，內向整流鉀通道(IK1)是一個被忽視的靶點。IK1是心肌最主要的背景外向電流，參與靜息電位(resting membrane potential，RMP) 的維持和心肌動作電位(action potential，AP) 3期終末的復極。其分子基礎主要是內向整流鉀通道基因Kir2.x亞家族。以往由于缺乏IK1通道特異性激動劑/阻斷劑，極大限制了該通道功能的研究。我們首次報道了一個IK1通道特異性激動劑——zacopride[3]，利用這一藥理學工具藥，本研究希望通過觀測zacopride對左甲狀腺素鈉致心室重構模型的作用，觀察其是否能抗心室重構并改善心功能，同時，用IK1通道相對特異性阻斷劑氯喹證實該設想，并與臨床治療藥卡托普利做比較，評估其治療效果。

1 材料與方法

1.1 動物 SPF級健康SD大鼠，♂，體質量(200～250)g，由山西醫科大學實驗動物中心提供，許可證號：SYXK(晉)2015-0001。

1.2 藥品與試劑 Zacopride hydrochloride購自TOCRIS，批號：3A/178109。優甲樂(左甲狀腺素鈉，L-thyroxine，L-thy)，規格為每片0.064 μmol，德國默克公司生產。氯喹(批號：BCBG0245V)、卡托普利(captoril)、牛磺酸(taurine)、L-谷氨酸(L-glutamicacid)、HEPES (N-2-hudroxyethylpiperazine-N′-2-ethane-sulfonic acid) 購自美國Sigma公司。膠原酶P購自瑞士Roche公司。其余均為國產分析純產品。

優甲樂的有效成分為T4。將優甲樂片劑研磨后用生理鹽水配制成1 g·L-1的混懸液，使用時按1 mg·kg-1·d-1取用。Zacopride原液：用去離子水配制為1 mmol·L-1儲存液，使用時按需要稀釋。氯喹(chloroquine)原液：用去離子水配制為1 mmol·L-1儲存液，使用時按需要稀釋。卡托普利(captoril)：用自來水溶解卡托普利，每天新鮮配制，使用時按100 mg·kg-1·d-1取用。臺氏液(mmol·L-1)：NaCl 140， KCl 5.4，NaH2PO40.33，HEPES 5.0，Glucose 10，MgCl21.0，CaCl21.8，用NaOH調節pH至7.38。酶液(mmol·L-1)：NaCl 125，KCl 5.4，CaCl275，MgCl21.0，NaH2PO40.33，HEPES 10，Glucose 10，Taurine 20，Collagenase P 0.1 g·L-1。KB液(mmol·L-1)：KOH 85，L-谷氨酸 50，KCl 30，Taurine 20，KH2PO430，MgCl21.0，HEPES 10，葡萄糖 10，EGTA 0.5，用KOH調節pH至7.4。

1.3 儀器 GE Vivid 7 Pro彩色超聲診斷儀，10S探頭，探頭頻率8.0 MHz，配備二維應變成像軟件，Echo PAC工作站；Olympus FV1000激光共聚焦顯微鏡；Axopatch 200B膜片鉗放大器(Molecular Device，USA)。

1.4 方法

1.4.1 實驗分組 健康SD大鼠隨機分為正常對照組、左甲狀腺素模型組、zacopride 5、15、50 μg·kg-1干預組、zacopride (15 μg·kg-1) + 氯喹(7.5 μg·kg-1)組和卡托普利陽性對照組。

1.4.2 動物模型建立 方法根據吳曉冬等[4]修改。SD大鼠稱重。除正常對照組外，其余各組動物均以混懸的優甲樂(1 mg ·kg-1·d-1)灌胃，正常對照組以等量的蒸餾水灌胃。Zacopride不同劑量組分別腹腔注射5、15、50 μg·kg-1zacopride，zacopride+氯喹組同時腹腔注射15 μg·kg-1zacopride和7.5 μg·kg-1氯喹，卡托普利陽性對照組按100 mg·kg-1·d-1飲水給予卡托普利。連續10 d。所有大鼠均飼以常規固體飼料和自來水，于停藥24 h禁食過夜，然后觀察相應指標。

1.4.3 超聲心動圖(ultrasound cardiograph, UCG)檢查 用GE Vivid 7 Pro 超聲儀配備的10S 探頭并配備嚙齒動物模式對大鼠心臟進行掃查，探查角度和深度盡量小，以提高幀頻率，一般為15 °～30 °，深度為2 cm～3 cm，幀頻 > 250·s-1，最高幀頻可達400·s-1。在左心長軸切面上測量并記錄大鼠心臟的左室內徑(LVID)、室間隔厚度(IVS)，通過M型超聲獲得左室射血分數(EF)和左室短軸縮短率(FS)，所有數據均測量3次，取其平均值。為了減小大鼠個體大小差異造成的誤差，模型大鼠采用體表面積指數進行比較，其中LV指數=LVID·體表面積-1，IVS指數=IVS·體表面積-1。大鼠體表面積計算公式: 體表面積/m2=0.09 ×[體質量(kg)]2/3。

1.4.4 心肌肥厚指數的測定 停藥24 h后稱重(BW)。打開胸腔，快速取出心臟，置于4 ℃預冷的生理鹽水，由主動脈逆行沖洗心臟血液后，用雙層濾紙吸干水分，電子天平準確稱量全心濕質量(HW)，去除心房及瓣膜組織，沿室間隔剪開左心室(包括室間隔)和右心室，去除大血管及心包組織，稱量左心室(包括室間隔)質量(LVW)，最后計算全心質量·體質量-1(HW·BW-1，mg·g-1)比，左心室質量·體質量-1(LVW·BW-1，mg·g-1)比，分別記為全心肥厚指數、左心室肥厚指數。

1.4.5 分離單個左心室肌細胞，記錄IK1電流，ICa-L電流 造模成功10 d后，各實驗組動物分別取3只，在術前15 min腹腔注射肝素(1 000 U· kg-1)，戊巴比妥鈉(65 mg·kg-1, ip)麻醉后頸動脈放血，迅速開胸取出心臟，置于4 ℃用100%氧氣飽和的無鈣臺氏液中修剪，然后將心臟懸掛在Langendorff灌流裝置上，經主動脈逆行灌流。先用無鈣臺氏液灌流8～10 min，再用酶液循環灌流15～20 min。灌流過程中保持37 ℃恒溫，灌流壓6.86 kPa，并持續通以100%氧氣。待心室肌組織變大、變軟后，選取左心室，置于KB液中剪碎，輕輕吹打得到分散的左心室肌細胞，經150 μm孔徑的濾網過濾后，保存于KB液中，室溫放置2 h后，用含鈣臺式液梯度復鈣，記錄IK1和ICa-L電流。

1.4.6 測定心室肌細胞內游離鈣離子濃度 心肌細胞用PBS液沖洗2遍，用100 μL含5 μmol·L-1鈣離子探針Fluo-4-AM滴于蓋玻片上，37 ℃避光40 min，PBS液沖洗玻片3遍，洗去多余染料，保留少許PBS液平衡細胞10 min，于20 min內進行細胞內[Ca2+]i檢測。加載好熒光染料的細胞置于共聚焦激光掃描鏡的載物臺上，進行形態觀測，隨機選取心肌細胞，計算心肌細胞表面積，測定胞內游離鈣的熒光值。

2 結果

2.1 扎考比利對左甲狀腺素模型大鼠心肌肥厚的影響

2.1.1 超聲心動圖結果 與正常對照組相比，左甲狀腺素模型組大鼠左室收縮期內徑(LVIDs)、舒張期內徑(LVIDd) 、室間隔厚度(IVS)均明顯增加(P<0.01)，射血分數(EF)和左室短軸縮短率(FS)明顯降低(P<0.01)，提示心室肥厚和左心功能降低。大鼠經zacopride (15 μg·kg-1)預防性給藥后，左室收縮期內徑、舒張期內徑、室間隔厚度均較模型組明顯降低(P<0.01)，EF、FS明顯升高(P<0.01)，心功能恢復至正常或接近正常水平。應用低劑量氯喹(7.5 μg ·kg-1，IK1通道相對特異性阻斷劑)阻斷zacopride對IK1通道的激動效應，則可明顯抑制zacopride的抗心室重構作用，提示zacopride可能通過激動心肌IK1通道而發揮抗心室重構效應。見Tab 1、Fig 1。

Fig 1 Echocardiography of L-thyroxine-induced cardiac hypertrophy in rats

A：Control; B：L-thyroxine; C:L-thyroxine+zacopride; D：L-thyroxine+zacopride+chloroquine.

2.1.2 大鼠心肌肥厚指數變化 大鼠灌胃給予左甲狀腺素鈉連續10 d后，全心肥厚指數(P<0.01)、左心室肥厚指數(P<0.01)較正常對照組明顯增加，說明心肌肥厚模型復制成功。5～50 μg ·kg-1zacopride可劑量依賴性拮抗心肌肥厚，其全心肥厚指數、左心室肥厚指數均較模型組降低。15 μg·kg-1為zacopride最適效應劑量(P<0.01)，其效應與卡托普利組相比差異無顯著性(P>0.05)；而同時應用低劑量氯喹(7.5 μg·kg-1，IK1通道相對特異性阻斷劑)則可明顯抑制zacopride的抗心室重構作用，提示zacopride可能通過激動心肌IK1通道而發揮抗心室重構效應。見Tab 2。

2.2IK1和ICa-L的變化

2.2.1IK1的變化 左甲狀腺素致心室重構模型中，IK1通道內、外向電流均被抑制，其中外向電流(-60 mV)減少25.7%[由(3.31 ± 0.36) pA·pF-1減少至(2.46 ± 0.19) pA·pF-1,P<0.01]；zacopride可使外向電流恢復至 (3.19 ± 0.29) pA·pF-1(P<0.01)，提示zacopride可以逆轉模型組IK1電流的減少；zacopride的效應可以被低劑量氯喹消除，外向電流(-60 mV)降低17.9%，由(3.19 ± 0.29) pA·pF-1減少至(2.62 ± 0.13) pA·pF-1(P<0.01)，見Fig 2。

Fig 2 Effect of zacopride on IK1in hypertrophic rat ventricular myocytes

The dose of zacopride is 15 μg·kg-1.**P<0.01vscontrol;△△P<0.01vsL-thy;##P<0.01vsL-thy+Zac+Chlo.

2.2.2ICa-L的變化ICa-L通道的變化則與IK1通道完全相反。左甲狀腺素致心室重構模型中ICa-L通道在0 mV處電流增加59.5%，由(-8.03 ± 0.56) pA·pF-1增至(-12.81 ± 0.53) pA·pF-1(P<0.01)； zacopride可使ICa-L降低至(-9.29 ± 0.52) pA·pF-1(P<0.01)，提示zacopride可以逆轉模型組ICa-L電流的增加；zacopride的效應可以被低劑量氯喹消除，0 mV處ICa-L電流增至(-11.63 ± 0.28) pA·pF-1(P<0.01)。見Fig 3。

nLVIDd/mm·m-2LVIDs/mm·m-2IVS/mm·m-2EF/%FS/%Control6118．92±19．62 75．37±11．81 51．63±4．40 73．0±0．82 36．5±0．58 L?thy8181．5±19．60??140．68±12．97??68．23±4．13??60．8±4．66??28．3±3．3??L?thy+Zac8126．33±25．00△△##86．55±13．92△△##53．14±5．02△△##78．5±6．45△△##41．5±6．86△△##L?thy+Zac+Chlo6157．08±27．29??113．56±12．28?64．58±3．47??62．3±7．15??25．5±6．36??

L-thy:L-thyroxine; Zac: zacopride; Chlo: chloroquine. The dose of zacopride is 15 μg·kg-1. LVIDd: left ventricular dimension in diastole; LVIDs: left ventricular dimension in systole; IVS: interventricular septum thickness; EF: ejection fraction; FS: fractional shortening.*P<0.05,**P<0.01vscontrol;△△P<0.01vsL-thy;##P<0.01vsL-thy+Zac+Chlo

Fig 3 Effect of zacopride on ICa-L in hypertrophic rat ventricular myocytes

The dose of zacopride is 15 μg·kg-1.**P<0.01vscontrol;△△P<0.01vsL-thy;##P<0.01vsL-thy+Zac+Chlo.

2.3 單個心室肌細胞形態觀察及胞內游離鈣濃度的變化 在鏡下可見左甲狀腺素模型大鼠左心室肌細胞寬度明顯增加，細胞表面積明顯增大(P<0.01)，胞內游離鈣離子濃度增加明顯(P<0.01)，15 μg·kg-1zacopride干預后，細胞形態和胞內鈣濃度恢復至正常或接近正常水平(P<0.01)，低劑量氯喹可以消除zacopride的效應(P<0.01)。見Tab 3、Fig 4。

Fig 4 Zacopride inhibited L-thyroxine-induced intracellular calcium-overload in rat ventricular myocytes

A: Control; B:L-thy; C:L-thy+Zac; D:L-thy+Zac+Chlo.The dose of zacopride is 15 μg·kg-1.

nBW/gHW·BW-1/mg·g-1LVW·BW-1/mg·g-1Control6233．6±12．42．53±0．041．51±0．07L?thy8243．8±10．74．56±0．65??3．17±0．24??L?thy+Zac5μg·kg-16245．5±14．33．94±0．22△△2．79±0．16△△L?thy+Zac15μg·kg-18248．3±9．03．96±0．27△△2．74±0．23△△L?thy+Zac50μg·kg-16243．0±5．14．29±0．23△2．90±0．20△L?thy+Zac15μg·kg-1+Chlo6231．5±19．64．60±0．35##3．10±0．31##Captopril6229．3±12．24．05±0．15△2．80±0．16△△

**P<0.01vscontrol;△P<0.05,△△P<0.01vsL-thy;##P<0.01vsL-thy+Zac 15 μg·kg-1.

Width/μmArea/μm2[Ca2+]i(CHS1)Contro21±4．3 2369±81．5 992±115．7L?thy33±8．1??4257±101．3??2660±170．7??L?thy+Zac24±9．2△△##3179±90．2△△## 909±83．2△△##L?thy+Zac+Chlo29±7．33891±113．81477±96．0

The dose of zacopride is 15 μg·kg-1.**P<0.01vscontrol;△△P<0.01vsL-thy;##P<0.01vsL-thy+Zac+Chlo.

3 討論

心室重構包括組織重構和電重構兩部分，組織重構即心肌細胞形態，排列和間質的變化，以心肌細胞肥大及間質纖維化為特點；電重構即心肌細胞膜離子通道、交換體和離子泵的變化。K??b等[5]于1998年就報道了心衰病人動作電位時程(action potential duration，APD)延長，瞬時外向鉀電流Ito電流減少，內向整流鉀通道IK1密度下降的現象； Zobel等[6]則認為Ito的減少，鈣內流的增加，是心肌肥大電重構的主要機制。電重構不僅是心肌肥大的結果，還可先于組織重構發生，進而影響組織重構過程[7]，這提示研究者需重新探究電重構與組織重構的關系，并嘗試將離子通道作為有效干預心室重構的新靶點。

甲狀腺素是甲狀腺分泌的激素，主要有四碘甲狀腺原氨酸(thyroxine, T4)和三碘甲狀腺原氨酸(triiodothyronine, T3)兩型。甲狀腺素通過基因或非基因作用對心血管系統產生多種效應、包括心肌收縮效應、電生理功能和心肌結構改變等[8]。過量的甲狀腺激素作用于心臟上的甲狀腺素核受體-α(thyroid hormone nuclear receptor α, TR-α)，通過一系列的下游信號級聯反應，產生心肌肥大[8]。與此同時，甲狀腺素還可通過非基因組效應影響細胞膜上離子，如Ca2+、Na+、K+的轉運[9-10]。心室肥大的早期可以通過細胞肥大增強收縮功能，是一種適應性變化，又稱生理性肥大，之后心室肥大會漸變為不可逆性的破壞性變化，收縮和舒張功能受損，產生病理性肥大，最終產生心衰。在這一過程中，鈣穩態失衡被認為是心肌肥大發生的中心環節[11-12]。細胞膜上L型鈣通道、NCX交換體，肌漿網的Ca2+-ATP酶、Ryanodine受體及鈣調蛋白激酶Ⅱ(calmodulin kinase Ⅱ, CaMKⅡ)、鈣調磷酸酶(calcineurin)等鈣調蛋白的功能異常均是導致胞內鈣穩態失衡的可能機制。由于L型鈣通道介導的Ca2+內流是心肌興奮收縮偶聯的始動環節，因而在探討鈣穩態失衡致心肌肥大的機制時，鈣通道異常往往是首先考慮的因素。本研究結果顯示，左甲狀腺素誘發的心肌肥大，心肌細胞膜上內向整流鉀通道電流(IK1)被抑制，而L型鈣通道電流(ICa-L)明顯增大，胞內[Ca2+]i增多，發生了鈣超載。經zacopride干預后，IK1增大，ICa-L減小，接近正常水平，并明顯降低胞內[Ca2+]i,說明zacopride可通過減輕細胞內鈣超載而發揮抗心室重構效應。本課題組曾首次報道zacopride為心肌IK1特異性激動劑，可增大RMP，適度縮短APD，但其對心肌ICa-L無明顯影響[3]。如何解釋zacopride抑制左甲狀腺素誘發的ICa-L電流，進而減輕鈣超載呢？ 我們認為在心室重構進程中，zacopride不直接抑制心肌ICa-L，很可能通過激動IK1而增大RMP，縮短APD，兩者均可減少電壓門控Ca2+內流，減輕細胞內鈣超載，從而發揮抗心室重構效應。

有研究表明，腎素-血管緊張素系統(rennin-angiotensin-system，RAS)參與了甲狀腺素增多所產生的心肌肥大的過程[13]，但具體的信號轉導機制還不明確。Zacopride選擇性激動IK1之后的下游信號機制有待進一步研究。可以嘗試聯合使用血管緊張素轉換酶抑制劑。

綜上所述，本研究建立左甲狀腺素致心室重構模型，首次利用zacopride和相對特異性IK1通道阻斷劑氯喹，證明通過選擇性激動心肌IK1通道可能通過減輕細胞內鈣超載而發揮抗心室重構效應，但其對鈣誘導的心室重構信號通路的調節作用仍需進一步研究明確。

(致謝：本研究在山西醫科大學病理生理實驗室、生理實驗室完成，感謝李夏青老師、趙錄英老師的支持和指導。)

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Effect ofIK1agonist zacopride onL-thyroxine-induced ventricular remodeling in rats

GUO Yun-fei1, YANG Ying1, LIU Fu1, ZHAI Xu-wen2, ZHANG Yan1, LI Pan1, ZHANG Li3, WU Bo-wei2， LIU Qing-hua1
(1.DeptofPathophysiology, 2.DeptofPhysiology,ShanxiMedicalUniversity,Taiyuan030001,China; 3.ShanxiProvincialChildren’sHospital,Taiyuan030001,China)

Aim To examine the effect of zacopride, a specific inward rectifier potassium channel (IK1) agonist, onL-thyroxine (T4)-induced ventricular remodeling and the underlying mechanism. Methods SD rats were randomly divided as control,L-thyroxine (L-thy, 1 mg·kg-1·d-1, ig, 10 d) model,L-thy +zacopride (5, 15, 50 μg·kg-1, respectively, ip),L-thy+zacopride (15 μg·kg-1)+chloroquine (7.5 μg·kg-1, ip) andL-thy+captopril (100 mg·kg-1·d-1, drinking water) groups. Echocardiography and cardiac hypertrophic indexes were measured to confirm the establishment of the ventricular remodeling model. The changes ofIK1and L-calcium current (ICa-L) were detected by whole cell patch clamp technique. The confocal microscopy and fluorescent indicator Fluo-4 were applied to examine the intracellular Ca2+concentration ([Ca2+]i) of isolated adult rat ventricular myocytes. ResultsL-thyroxine induced left ventricular hypertrophy with increased ratio of heart weight (HW) to body weight (HW·BW-1), ratio of left ventrical weight (LVW) to body weight (LVW·BW-1), left ventricular dimension in diastole (LVIDd), left ventricular dimension in systole (LVIDs), interventricular septum thickness (IVS) and decreased ejection fraction(EF), fractional shortening (FS) (P<0.01). Patch clamp data suggestedIK1was downregulated, whileICa-Lwas upregulated (P<0.01). In isolated adult cardiomyocytes,L-thyroxine increased the cell area and [Ca2+]i(P<0.01). Zacopride treatment obviously alleviated cardiac remodeling, improved cardiac function, reversed the changes ofIK1andICa-L, and significantly attenuated intracellular calcium overload (P<0.01). The optimum dose of zacoprideinvivowas 15 μg·kg-1at which the effect was compared favourably with captopril, a classical anti-remodeling agent. Low-doseIK1atagonist chloroquine could reverse the effect of zacopride (P<0.01). Conclusion Via activatingIK1, zacopride could significantly decrease Ca2+influx and intracellular calcium overload thereby inhibitingL-thyroxine-induced cardiac ventricular remodeling.

inward rectifier potassium channel; zacopride;L-thyroxine; ventricular remodeling; cardiac hypertrophy；calcium overload

2016-12-24，

2017-01-23

國家自然科學基金資助項目(No 31200864)；山西省回國留學人員科研資助項目(No 2016-059)

郭云飛(1989 -)，女，碩士生，研究方向：心血管生理與藥理學，E-mail：1013784511@qq.com； 劉清華(1974 -)，女，博士，副教授，碩士生導師，研究方向：心血管生理與藥理學，通訊作者，E-mail：liuqh20041206@163.com

時間：2017-4-24 11:20

http://kns.cnki.net/kcms/detail/34.1086.R.20170424.1120.022.html

10.3969/j.issn.1001-1978.2017.05.011

A

1001-1978(2017)05-0641-06

R-332；R322.11；R331.31；R541.610.5