注射用血栓通(凍干)及三七二醇皂苷、三七三醇皂苷不同配比對體外靜脈血栓形成的影響

王金鑫，伊麗孜熱·亞熱買買提，郭 虹，柴麗娟，王少峽，胡利民

(天津中醫(yī)藥大學中醫(yī)藥研究院，天津市現(xiàn)代中藥重點實驗室-省部共建國家重點實驗室培育基地，方劑學教育部重點實驗室，天津 300193)

注射用血栓通(凍干)及三七二醇皂苷、三七三醇皂苷不同配比對體外靜脈血栓形成的影響

王金鑫，伊麗孜熱·亞熱買買提，郭 虹，柴麗娟，王少峽，胡利民

(天津中醫(yī)藥大學中醫(yī)藥研究院，天津市現(xiàn)代中藥重點實驗室-省部共建國家重點實驗室培育基地，方劑學教育部重點實驗室，天津 300193)

血栓形成一般是指血液在變流狀態(tài)下，導致止血機制過度激活的一種病理性的機體反應[1]。血栓形成是心、腦血管疾病的病理基礎，因此抑制血栓的形成有助于減少心、腦血管病變的發(fā)生[2]。三七為五加科植物三七[Panaxnotoginseng(Burk.)F.H.Chen]的干燥根和根莖。其主要功效為化瘀止血、消腫定痛，現(xiàn)代藥理研究表明三七具有止血、保護心腦組織、降血脂等作用[3]。注射用血栓通(凍干)是由三七主根提取三七總皂苷制成的靜脈注射劑，具有活血祛瘀、通脈活絡的功效。其主要成份為三七總皂苷，其中二醇三七皂苷(以下簡寫為二醇苷)有人參皂苷Rb1和人參皂苷Rd，三醇三七皂苷(以下簡寫為三醇苷)包括人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、三七皂苷R1[4-5]。本文旨在探討注射用血栓通對體外血栓形成的影響，并考察其主要成分二醇苷和三醇苷配比對體外血栓形成影響，為血栓通的臨床應用、明確作用物質(zhì)基礎提供實驗依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實驗動物 健康♂ SPF級SD大鼠80只，體質(zhì)量290～310 g，由北京維通利華實驗動物技術有限公司提供(科學研究用SPF級SD大鼠，合格證號：11400700091178)。

1.1.2 藥品、試劑與儀器 注射用血栓通(凍干)：廣西梧州制藥(集團)股份有限公司生產(chǎn)(批號：14090715)，注射用賴氨匹林(來比林)：國藥集團國瑞藥業(yè)有限公司生產(chǎn)(批號：14090083)，二醇苷、三醇苷由廣西梧州制藥股份有限公司提供。體外血栓形成儀:中國中醫(yī)研究院西苑醫(yī)院監(jiān)制。

1.2 方法

1.2.1 分組及給藥

1.2.1.1 注射用血栓通對體外血栓形成的影響 8周齡SD大鼠適應環(huán)境3 d后，按照體質(zhì)量隨機分為5組：對照組、來比林組、注射用血栓通共3組(高、中、低劑量組)，每組7只。適應環(huán)境后開始給藥，連續(xù)給藥3 d。來比林及注射用血栓通用注射用生理鹽水配制，高劑量組血栓通注射液100 mg·kg-1，中劑量組血栓通注射液50 mg·kg-1，低劑量組血栓通注射液25 mg·kg-1；來比林組90 mg·kg-1；進行尾靜脈注射(iv)，對照組注射等量的生理鹽水。

1.2.1.2 二醇苷及三醇苷不同配比對體外血栓形成的影響 8周齡SD大鼠適應環(huán)境3 d，然后按照體質(zhì)量隨機分為8組：對照組、來比林組、注射用血栓通組、二醇苷 ∶三醇苷不同配比(相同濃度按體積配比)5組(3 ∶0、2 ∶1、1 ∶1、1 ∶2、0 ∶3)，每組8只。適應環(huán)境后開始給藥，連續(xù)給藥3 d。來比林及注射用血栓通用注射用生理鹽水配制，三七皂苷用注射用生理鹽水溶解后，過0.22 μm微孔濾膜，進行尾靜脈注射(iv)。注射用血栓通組100 mg·kg-1,來比林組90 mg·kg-1,不同配比三七皂苷組100 mg·kg-1，對照組注射等量的生理鹽水。

GroupDose/mg·kg-1Length/mmWetweight/mgDryweight/mgWatercontent/mg·mm-1Control-45．6±13．79132．9±40．8152．0±30．812．4±0．42LBL9021．6±7．98??88．2±44．3829．7±19．54??3．0±0．84XST10020．4±3．26??64．7±11．00??17．9±5．63??2．1±0．555024．3±8．22??82．9±18．4532．4±20．402．6±0．492522．5±8．32??63．4±17．58??27．5±6．43??1．7±0．92

**P<0.01vscontrol

GroupDose/mg·kg-1Length/mmWetweight/mgDryweight/mgWatercontent/mg·mm-1Control-41．6±22．10159．7±91．4051．5±5．462．7±0．51LBL9023．4±1．63??113．7±12．49??23．7±5．07??3．9±0．64XST10019．3±4．31??84．6±8．9??16．7±3．55??3．5±0．37PDS∶PTS3∶010068．2±15．92??284．4±101．82??90．3±28．1??2．9±0．452∶110023．8±4．22??130．5±68．3530．2±7．084．2±0．751∶110022．2±4．86??113．8±54．4433．5±10．603．7±0．631∶210025．5±3．89??129．4±48．4530．2±8．563．8±0．460∶310014．8±4．03??67．3±17．09??15．6±3．81??3．5±0．55

**P<0.01vscontrol

1.2.2 體外血栓形成方法 末次給藥30 min后，采用10%的水合氯醛(3 mL·kg-1)麻醉，沿腹中線開腹，用干棉球剝離小腸及筋膜，使下腔靜脈暴露。用一次性注射器穿刺下腔靜脈取血2.5 mL，按照Chandler體外法[6]，立刻將血注入旋轉環(huán)內(nèi)，注入的血量充滿旋轉環(huán)1/2以下(1 mL),迅速密封，置體外血栓形成儀上，37℃旋轉15 min，傾出血栓，生理鹽水洗滌，測量長度，吸干表面液體稱量濕重，再將血栓條置64℃烘箱恒溫烘烤1 h，恒重后稱其干重。

2 結果

2.1 注射用血栓通對體外血栓形成的影響 通過對體外血栓形成儀上形成的靜脈血栓進行分析，統(tǒng)計其長度、濕重、干重和單位含水量(Tab 1)。從表中可以看出各個劑量的血栓通均能明顯降低血栓形成的長度(P<0.01)，其作用和來比林無明顯差異；高劑量和低劑量的血栓通還可以明顯降低形成血栓的濕重和干重(P<0.01)，其作用略優(yōu)于來比林，高劑量作用更為明顯；但是各組血栓的含水量之間無明顯差異。

2.2 二醇苷及三醇苷不同配比對體外血栓形成的影響 從Tab 2中可以看出，除二醇苷 ∶三醇苷為3 ∶0比例的配比明顯增加了血栓形成的長度、濕重及干重(P<0.01)；其余各個配比均能明顯降低血栓形成的長度(P<0.01)；二醇苷 ∶三醇苷為0 ∶3比例配比，不僅明顯降低血栓形成的長度，也明顯減輕了其濕重和干重(P<0.01)，并且效果優(yōu)于陽性藥來比林和注射用血栓通；各組血栓的含水量無明顯的差異。

3 討論

血栓的形成包括血液流變學的改變和相關因子的變化，本實驗通過體外血栓形成儀，在塑料環(huán)中注入血液模擬體內(nèi)血液流動狀態(tài)，由于血液流變學發(fā)生變化，血液凝固性增加，以這種形式形成的靜脈血栓相似于體內(nèi)血栓的形成。在近些年的實驗和臨床都已經(jīng)證實了注射用血栓通具有抑制血小板和紅細胞的過度聚集，溶解血栓，并能抑制IL-1、IL-6、TNF-α等的作用[7-8]。也有研究證明，注射用血栓通可以在體外不同程度抑制ADP、AA、PAF誘導的家兔血小板聚集[9]。我們的的實驗表明，注射用血栓通能降低體外血栓形成的長度、濕重及干重，表現(xiàn)出良好的抑制血栓形成作用。

血栓通主要成分為三七二醇皂苷和三七三醇皂苷，在注射用血栓通中的含量大約為1 ∶2。已有研究顯示，三醇苷能抑制大鼠血栓素A2釋放，從而抑制血管收縮、血小板聚集和血栓形成[10]，而其二醇苷及不同配比對血栓形成的影響未見報道。本文研究二醇苷和三醇苷及其不同配比之間對體外血栓形成的影響。結果發(fā)現(xiàn)，二醇苷明顯增加體外靜脈血栓的長度、濕重及干重；而三醇苷組明顯降低體外靜脈血栓的長度、濕重及干重，兩者的作用相反；二者不同配比之間均能抑制血栓的形成，但各個配比之間沒有明顯的差異。這為闡明血栓通抗血栓形成的藥效物質(zhì)基礎提供了實驗依據(jù)。

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Impact on formation of venous thrombosisinvitrowith Xueshuantong injection (lyophilized) andPanaxNotoginsengsaponins including panaxadiol saponins and panaxatriol saponins in different mixture ratio

WANG Jin-xin, YareMehmet Ilizire, GUO Hong, CHAI Li-juan, WANG Shao-xia, HU Li-min

[InstituteofTraditionalChineseMedicine,TianjinUniversityofTraditionalChineseMedicine,TianjinStateKeyLaboratoryofModernChineseMedicine,KeyLaboratoryofPharmacologyofTraditionalChineseMedicalFormulae(TianjinUniversityofTraditionalChineseMedicine),MinistryofEducation,Tianjin300193,China]

注射用血栓通；三七二醇皂苷；三七三醇皂苷；配比；血栓；長度；濕重；干重

Xueshuantong injection; panaxadiol saponins; panaxatriol saponins; mixture ratio; thrombus; length; wet weight; dry weight

2016-12-15，

2017-01-25

國家科技部“重大新藥創(chuàng)制”科技重大專項資助項目(No 2012ZX09101201)；國家自然科學基金資助項目(No 8157140605)；天津市應用基礎與前沿技術研究計劃資助項目(No 14JCYBJC28900)；廣西科學研究與技術開發(fā)計劃資助項目(No 14125008-2-5)

王金鑫(1990- )，男，碩士生，研究方向：腦血管病及糖尿病并發(fā)癥，E-mail: 982944144@qq.com； 王少峽(1978-)，男，博士，副研究員，研究方向：中藥學，通訊作者， E-mail: wangshaoxia1@163.com

時間：2017-4-24 11:21

http://kns.cnki.net/kcms/detail/34.1086.R.20170424.1121.058.html

10.3969/j.issn.1001-1978.2017.05.029

A

1001-1978(2017)05-0737-03

R-332；R282.71；R284.1；R364.15；R944.11