蒸發(fā)光法檢測(cè)蒙藥胡芪降脂膠囊中黃芪甲苷的含量

趙俊蘋(píng)

(內(nèi)蒙古自治區(qū)呼和浩特市食品藥品檢驗(yàn)所，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010020)

蒸發(fā)光法檢測(cè)蒙藥胡芪降脂膠囊中黃芪甲苷的含量

趙俊蘋(píng)

(內(nèi)蒙古自治區(qū)呼和浩特市食品藥品檢驗(yàn)所，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010020)

目的：建立高效液相色譜法測(cè)定胡芪降脂膠囊中黃芪甲苷含量的方法。方法： MGⅡ C18柱(5μm、4.6×250mm)， 流動(dòng)相：乙睛-水(35∶65)，檢測(cè)器：蒸發(fā)光散射檢測(cè)器，柱溫30℃。結(jié)果：黃芪甲苷在0.5082～5.0825μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。回歸方程為y=1.874x+11.20 ,r=0.9992，平均回收率為102.07%，RSD為0.95(%)。結(jié)論：本法簡(jiǎn)便、可靠，可作為該藥的質(zhì)量控制方法。

胡芪降脂膠囊;黃芪甲苷;高效液相色譜法

胡芪降脂膠囊由黃芪、當(dāng)歸、蓽茇3味藥組成，是內(nèi)蒙古自治區(qū)國(guó)際蒙醫(yī)醫(yī)院臨床使用處方，具有清血、降血脂、增加免疫力等功效，主治冠心病、肝炎、高血壓、高血脂等疾病。為了保證臨床用藥安全質(zhì)量可控原則，對(duì)此品種進(jìn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究。

本文參照《中國(guó)藥典》2010年版一部 “補(bǔ)中益氣丸(水丸)”項(xiàng)下蒸發(fā)光散射器檢測(cè)含量測(cè)定方法[1-2]，以黃芪甲苷作為指標(biāo)成分，進(jìn)行含量測(cè)定方法研究。經(jīng)分析方法驗(yàn)證，該方法重現(xiàn)性好，專(zhuān)屬性強(qiáng)，方法中其它成分對(duì)黃芪的測(cè)定無(wú)干擾，專(zhuān)屬性較強(qiáng)。結(jié)果報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器: Waters高效液相色譜儀1525，蒸發(fā)光散射檢測(cè)器(ELSD)2424，Empower 色譜工作站。

1.2 試劑與試藥：黃芪甲苷對(duì)照品(批號(hào)110781-200613，供含量測(cè)定用)中國(guó)藥品生物制品檢定所；樣品胡芪降脂膠囊(批號(hào)：20130822、20131022、20131208)、黃芪、當(dāng)歸、蓽茇均由內(nèi)蒙古國(guó)際蒙醫(yī)醫(yī)院提供；乙腈為色譜純，水為高純水，其它試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

2.1.1 色譜柱：色譜柱填充劑為十八烷基硅烷鍵合硅膠，本實(shí)驗(yàn)研究采用 資生堂 MGⅡ C18柱 (5μm，4.6×250mm)及Alltima C18柱(5μm ，4.6×250mm)。

2.1.2 供試品溶液提取方法：取裝量差異項(xiàng)下的本品內(nèi)容物，研細(xì)，取3g，精密稱(chēng)定，置索氏提取器中，加入甲醇適量，加熱回流提取7h，提取液回收甲醇至干，殘?jiān)铀?5mL，微熱使溶解，用乙醚輕搖洗滌2次，每次20mL，水溶液再用水飽和的正丁醇振搖提取6次，每次20mL，合并正丁醇提取液，用氨試液洗滌3次，每次40mL，正丁醇液回收溶劑至干，殘?jiān)眉状既芙猓D(zhuǎn)移至10mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.1.3 對(duì)照品溶液的制備：取黃芪甲苷對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，加甲醇制成每1mL含0.2mg的溶液，即得。

2.1.4 陰性對(duì)照試驗(yàn)：按2.1.2及2.1.3項(xiàng)下的方法制備供試品溶液、對(duì)照品溶液，另取按處方比例并以相同工藝制備的缺黃芪的陰性對(duì)照，按供試品溶液制備法制得陰性對(duì)照溶液。在上述色譜條件下，分別精密吸取對(duì)照品溶液、陰性對(duì)照溶液、供試品溶液各20μL ，分別注入液相色譜儀，測(cè)得結(jié)果為陰性對(duì)照色譜圖中在與黃芪甲苷對(duì)照品以及供試品色譜相對(duì)應(yīng)的保留時(shí)間處無(wú)色譜峰出現(xiàn)，表明處方中其它組分對(duì)黃芪甲苷的測(cè)定無(wú)干擾。見(jiàn)圖1、2、3。

2.1.5 線性關(guān)系考察：精密稱(chēng)取黃芪甲苷對(duì)照品約2.032mg，置10mL 量瓶中，加甲醇使溶解，并稀釋至刻度，搖勻，即得。(黃芪甲苷0.2033mg/mL)分別取2.5、5、10、15、20、25μL 進(jìn)樣，按上述色譜條件測(cè)定，以峰面積對(duì)進(jìn)樣濃度對(duì)數(shù)方程進(jìn)行回歸分析，結(jié)果黃芪甲苷在0.5082～5.0825μg 范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。回歸方程為y=1.874x+11.20 r=0.9992。

2.1.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) ：取同一份供試品溶液，分別在0h、2h、4h、8h、10h、18h進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果黃芪甲苷在18h內(nèi)的面積積分值未超0.6%。

2.1.7 重復(fù)性試驗(yàn) ：取同一批號(hào)樣品(批號(hào)20130822)6份，各取約3g，按含量測(cè)定方法操作，測(cè)定每份樣品含量，按標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)數(shù)方程計(jì)算含量。結(jié)果平均含量為0.4560mg/g，RSD為0.28%。

2.1.8 加樣回收試驗(yàn)：取供試品(批號(hào)20130822，含量0.45305mg/g)6份，各約1.5g，精密稱(chēng)定，置索氏提取器中，加入甲醇適量，加熱回流提取7h，提取液回收甲醇至干，殘?jiān)铀?5mL，微熱使溶解，再分別依次精密加入黃芪甲苷對(duì)照品溶液(黃芪甲苷0.3120mg/mL)2.0mL，用乙醚輕搖洗滌2次，按2.1.2項(xiàng)下方法操作，測(cè)定每份含量，計(jì)算回收率，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 黃芪甲苷加樣回收試驗(yàn)結(jié)果

2.1.9 樣品含量測(cè)定：3批樣品測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 樣品測(cè)定結(jié)果

3 結(jié)論

表中3批樣品測(cè)定黃芪甲苷平均含量為0.45mg/g，考慮到藥材的產(chǎn)地、加工以及提取，參照黃芪藥材中黃芪甲苷含量轉(zhuǎn)移，再下浮20%，初步定為本品每1g含黃芪甲苷(C41H68O14)計(jì)，不得少于0.35mg/g。

[1]常新全，丁麗霞.中藥活性成分分析手冊(cè)下冊(cè) [M ] .學(xué)苑出版社，2002:1528.

[2]國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典[S].一部.中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010:781.

2016年11月8日收稿

R291.2

A

1006-6810(2017)03-0040-02