3種壯醫(yī)方對CCl4肝損傷大鼠血清相關(guān)指標(biāo)的影響△

鐘 鳴 陳少鋒 趙湘培 蘇 華 余勝民

(1. 廣西中醫(yī)藥研究院，廣西 南寧 530012；2. 廣西壯族自治區(qū)民族醫(yī)藥研究院，廣西 南寧 530001；)

實驗研究

3種壯醫(yī)方對CCl4肝損傷大鼠血清相關(guān)指標(biāo)的影響△

鐘 鳴1陳少鋒2趙湘培2蘇 華1余勝民2

(1. 廣西中醫(yī)藥研究院，廣西 南寧 530012；2. 廣西壯族自治區(qū)民族醫(yī)藥研究院，廣西 南寧 530001；)

目的：研究3種壯醫(yī)方對CCl4肝損傷大鼠血清相關(guān)指標(biāo)的影響。方法：抽取144只SD大鼠，雌雄各半，隨機分成12組，每組12只，即正常對照組，模型對照組，陽性秋水仙堿組，白花丹消蠱湯高、中、低劑量組，雞骨草驅(qū)蠱湯高、中、低劑量組，七葉化蠱散高、中、低劑量組。除正常對照組外，其余各組均按0.6mL/100g動物體重皮下注射給予40%四氯化碳(CCl4) 橄欖油造模，2次/wk，連續(xù)造模8wk。造模2wk灌胃給藥，連續(xù)給藥6wk后，大鼠腹主動脈取血，離心取血清，檢測各組大鼠血清中血脂、肝功能及腎功能水平，對比各方劑療效。結(jié)果：與模型組相比，七葉化蠱散、白花丹消蠱湯和雞骨草驅(qū)蠱湯各方劑能不同程度改善肝損傷大鼠血清肝腎功能各指標(biāo)水平(P<0.01或P<0.05)。結(jié)論:七葉化蠱散、白花丹消蠱湯和雞骨草驅(qū)蠱湯具有改善肝損傷的作用。

壯醫(yī)方；肝損傷；大鼠

肝纖維化是指由于各種致病因子導(dǎo)致的肝結(jié)締組織異常增生，肝內(nèi)發(fā)生病理性細(xì)胞外基質(zhì)過度沉淀，是慢性肝病轉(zhuǎn)為肝硬化的前期階段，具有可逆性的特點[1]。也是進(jìn)一步向肝硬變發(fā)展的主要中間環(huán)節(jié)。壯醫(yī)學(xué)中，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的肝硬化(肝纖維化)可歸于壯瑤醫(yī)蠱病范疇，肝纖維化屬蠱病日久，濕毒熱毒漸消，蠱毒滯留龍路火路，并在腹中結(jié)塊所致。治療以通調(diào)龍路火路為主，清除熱毒濕毒為輔。壯醫(yī)方白花丹消蠱湯、雞骨草驅(qū)蠱湯、七葉化蠱散都是治療盅毒、腹部結(jié)塊的良藥，但其對肝纖維的明確療效目前還尚未可知。本研究采用四氯化碳(CCl4)建立大鼠肝損傷模型，探討3種壯醫(yī)方對肝損傷大鼠的相關(guān)血清指標(biāo)的影響，為其方劑的臨床使用提供實驗依據(jù)。

1 材料

1.1 壯醫(yī)方的制備

1.1.1 白花丹消蠱湯由白花丹、排錢草、車前草、崗梅根等6味壯藥組成。稱取上述白花丹消蠱湯處方藥材共13 kg，加水10～12倍量，室溫浸泡1 h，加熱煮沸1 h，濾過。以上方法共提取二次，合并濾液，濃縮到5 L備用。

1.1.2 雞骨草驅(qū)蠱湯由雞骨草、田基黃、虎杖、 赤小豆等7味壯藥組成。稱取上述雞骨草驅(qū)蠱湯處方藥材共13 kg，加水10～12倍量，室溫浸泡1 h，加熱煮沸1 h，濾過。以上方法共提取2次，合并濾液，濃縮到5 L備用。

1.1.3 七葉化蠱散由七葉一枝花、三棱、莪術(shù)、夏枯草等7味壯藥組成。稱取上述七葉化蠱散處方藥材共13 kg，加水10～12倍量，室溫浸泡1 h，加熱煮沸1 h，濾過。以上方法共提取2次，合并濾液，濃縮到5 L備用。

1.2 藥品與試劑：丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)批號：150113031、門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)批號：150213026、堿性磷酸酶(ALP)批號：150314014、總膽紅素(T-BIL)批號：150613025，均為中國深圳邁瑞試劑盒。

1.3 實驗動物：SD大鼠，清潔級，體重180～220g，雌雄各半，購自廣西醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心 (生產(chǎn)許可證號：SCXK桂2003—0003)。動物購回后，雌雄分籠飼養(yǎng)，自由飲水，喂全價顆粒飼料。動物室溫度(24±2)℃ 。相對濕度50%～60%，動物室按常規(guī)定期消毒。

1.4 主要儀器：全自動生化分析儀(BS-350E，中國深圳邁瑞)，高速冷凍離心機( 上海安亭科學(xué)儀器廠)，酶標(biāo)儀(Multislcan MK3，賽默飛世爾上海儀器有限公司)。

2 方法

2.1 動物分組、造模及給藥方法：隨機抽取144只SD大鼠(180～220g)，雌雄各半，隨機分成12組，每組12只，即正常對照組，模型對照組，秋水仙堿組，白花丹消蠱湯高、中、低劑量組，雞骨草驅(qū)蠱湯高、中、低劑量組，七葉化蠱散高、中、低劑量組。除正常對照組外，其余各組均按0.6mL/100g動物體重皮下注射給予40%四氯化碳(CCl4)橄欖油造模，2次/wk，連續(xù)造模8wk。造模2wk起灌胃給藥，正常對照組和模型對照組給予生理鹽水，秋水仙堿組給予0.01mg/mL秋水仙堿(1×10-4g/Kg)，白花丹消蠱湯高、中、低劑量組分別按12g生藥/Kg，6 g生藥/Kg，3 g生藥/Kg劑量給藥，雞骨草驅(qū)蠱湯高、中、低劑量組分別按18g生藥/Kg， 9 g生藥/Kg，4.5g生藥/Kg劑量給藥，七葉化蠱散分別按18g生藥/Kg，9 g生藥/Kg，4.5g生藥/Kg劑量給藥。所有劑量組均每天給藥1次，連續(xù)給藥6wk，治療期間注意觀察大鼠的毛發(fā)、爪甲、舌質(zhì)、舌象、舌下靜脈、眼球顏色、尾部色澤或瘀斑、糞便變化等情況。

2.2 指標(biāo)檢測：實驗結(jié)束前禁食12h，動物稱重，各組大鼠腹主動脈取血，離心取血清，按試劑盒說明書測定血清肝功能及腎功能水平。肝功能檢測指標(biāo)包括：丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、總膽紅素(T-BIiL)γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶(γ-GT)及白/球蛋白比(A/G)。腎功能檢測指標(biāo)包括：尿酸(UA)、尿素(UREA)及血肌酐(CREA)。

2.3 統(tǒng)計學(xué)方法： 結(jié)果采用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差來表示。所有的統(tǒng)計分析由SPSS16.0軟件做t檢驗分析，P<0.05表明差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 各方劑對動物體重增長的影響： 各方劑對肝損傷大鼠體重的影響詳見圖1。各給藥組動物的食量、腺體分泌、呼吸、糞便等末見明顯異常。空白組大鼠體重增長較明顯，而造模后各組動物少食少動，毛色疏松無光澤，體重增長緩慢。

圖1 各組大鼠體重變化曲線圖

組別ALT(U/L)AST(U/L)TBiL(μmol/l)γ-GT(U/L)A/G(%)陽性組100.90±19.19*275.99±30.09*2.78±2.04*8.48±4.75**0.68±0.07模型組270.56±215.98483.78±294.768.44±8.4016.54±8.880.65±0.06空白組39.63±11.59**156.58±55.57**0.13±0.23**0.61±0.32**0.73±0.04**QYL組74.48±19.09**191.82±34.31**0.88±1.31**5.08±4.44**0.73±0.04**QYM組62.84±19.16**151.99±32.13**1.93±3.66**6.20±4.10**0.74±0.06**QYH組69.31±47.54**144.71±107.88**5.18±8.987.41±4.97**0.66±0.05BHL組77.42±49.79*240.86±36.84**0.78±0.96*4.13±2.44**0.69±0.05**BHM組85.28±47.63**227.21±36.14**2.90±3.13*6.47±4.14**0.67±0.08BHH組87.36±38.04**214.04±104.29**3.35±4.75*7.88±3.24**0.65±0.04JGL組108.20±53.46**258.70±96.53**6.32±7.8610.69±8.850.77±0.16JGM組112.77±30.45*273.92±61.33*8.14±4.2514.91±4.730.69±0.06JGH組97.83±45.29**212.55±101.26**5.47±10.7511.64±9.180.72±0.06*

注：與模型組比較，*P﹤0.05，**P﹤0.01，下同。

3.2 各方劑對血清肝功能指標(biāo)的影響：各方劑對肝損傷大鼠血清肝功能水平由表1可見，與空白組相比，模型組肝損傷大鼠血清ALT、AST、TBiL及γ-GT水平均升高，A/G比降低(P<0.01)，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。七葉化蠱散高、中、低組大鼠ALT、AST、TBiL及γ-GT水平降低，低、中劑量組血清A/G比升高(P<0.01或P<0.05)；白花丹消蠱湯高、中、低組大鼠ALT、AST、TBiL及γ-GT水平降低，低劑量組血清A/G比升高(P<0.01或P<0.05)；雞骨草驅(qū)蠱湯高、中、低組大鼠ALT、AST、TBiL及γ-GT水平降低，高劑量組血清A/G比升高(P<0.01或P<0.05)。

3.3 各方劑對腎功能指標(biāo)的影響:各方劑對肝損傷大鼠血清腎功能水平的影響詳由表2可見，與空白組相比，模型組肝損傷大鼠血清UA水平均降低(P<0.01)，UREA和CREA(P<0.01)水平升高。與模型組相比，陽性藥、七葉化蠱散高中低劑量、白花丹消蠱湯高中低劑量、雞骨草驅(qū)蠱湯高中低劑量可升高肝損傷大鼠血清UA水平(P<0.01)；陽性藥、七葉化蠱散高劑量、白花丹消蠱湯高中低劑量、雞骨草驅(qū)蠱湯高中低劑量可降低肝損傷大鼠血清中UREA和CREA含量(P<0.01或P<0.05)。

表2 各組大鼠血清腎功能水平

4 討論

蠱病是以腹部脹大、脈絡(luò)暴露為特征的一類疾病?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)的肝硬化(肝纖維化)可歸于壯瑤醫(yī)蠱病范疇。壯瑤醫(yī)認(rèn)為蠱毒是一種毒物，由各種動物、植物毒素混合而成。蠱毒一旦侵入機體，即可造成機體天地人三氣同步平衡失調(diào)，三道兩路不通或受到損害而中毒發(fā)病。臨床表現(xiàn)為脅下脹痛，飲食減少，或煩熱口苦，噯氣，大便溏爛，小便短少，面部、下肢浮腫，神疲乏力，怕冷懶動等。治療蠱病，以驅(qū)邪殺蟲，疏通水道為原則[1]。常用藥物有古羊藤、南蛇勒、地桃花、田基黃、小攔路、赤小豆、大腹皮、白花丹、雞骨草、排錢草、車前草等[2]。三草護(hù)肝湯、雞骨草驅(qū)蠱湯、七葉化蠱散、白花丹消蠱湯等都是壯醫(yī)治療蠱病的常用方劑。但這三個方劑的抗肝纖維化的明確療效目前還尚未可知。

CCl4是典型的親肝性毒物，對腎臟也具有親嗜性效應(yīng)[3,4]。CCl4是最早且最廣泛用于建立肝損傷模型的一種造模方法，模型動物多采用大鼠，造模途徑多樣，有單純性皮下注射、灌胃、腹腔注射及在此基礎(chǔ)上加以不同喂飼手段的復(fù)合法，造模時間因給藥途徑、劑量及飼喂方法的不同而異，一般為6～16wk不等[5]。本次研究采用經(jīng)皮下注射給予CCl4法造模8wk，肝損傷大鼠血清肝、腎功能ALT、AST、TBiL及γ-GT水平升高，血清腎UA水平均降低，UREA和CREA水平升高[6～8]，與文獻(xiàn)報道相符，3種壯醫(yī)方劑能不同程度地升高肝損傷大鼠血清UA水平，降低肝損傷大鼠血清ALT、AST、TBiL、γ-GT水平及UREA、CREA含量，結(jié)果提示，七葉化蠱散、白花丹消蠱湯、雞骨草驅(qū)蠱湯能在不同程度上恢復(fù)肝損傷大鼠肝功能和腎功能水平，對慢性肝炎肝纖維化患者有較好的愈后作用。下一步我們可考慮對以上3個壯醫(yī)方分別進(jìn)行抗肝纖維作用量效關(guān)系考察及機制研究。

[1]羅金裕,等.瑤醫(yī)效方選編[M]. 南寧:廣西民族出版社,1987,09:69.

[2] 尹顯洪. 瑤醫(yī)常用植物藥化學(xué)與藥理研究[M]. 廣州:廣東旅游出版社,2008,08.

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2017年1月22日收稿

Study on effect of three Zhuang medicine prescription on serum indicators of hepatic damnification rats

Zhong-Min1Chen-Shaofeng2Zhao-Xiangpei2Su-Hua1Yu-shengming2

1. Guangxi Institute of Chinese Medicine & Pharmaceutical Science, Nanning 530022,China；2. Guangxi Institute of Nationality Medicine，Nanning 530001 China

Objective：To observe the curative effect of Zhuang medicine prescription on serum indicators of hepatic damnification rats. Methods: Rats were randomLy divided into 12 groups: normal group, model group, positive control group, QiYeHuaGu high ,middle and low dose group, BaiHuaDanXiao high ,middle and low dose group, JiGuCaoQuGu high ,middle and low dose group. All rats, except the animal of normal group, were induced by injection of 40% carbon tetrachloride hypodermically twice a week at dose of 0.6mL/100g, and at the same time animal were given rich fat and drug diet. All rats, except the animal of normal group, were treated with medicine. After 8 weeks all rats were sacrificed. The content of bood-fat , liver function and kidney function from blood were determined. Results: Comparing with model group, the content of bood-fat , liver function and kidney function from blood on Three Zhuang medicine prescription groups were better than that of model group. Conclusions: Three Zhuang medicine prescription are capable of anti- hepatic?injury action .

Zhuang medicine prescription; hepatic injury；Rats

廣西科學(xué)研究與技術(shù)開發(fā)計劃課題(No.桂科能14123006-6)

鐘鳴(1962-)，男(壯族)，廣西德保人，廣西中醫(yī)藥研究院研究員(教授)，碩士研究生導(dǎo)師，主要從事民族藥藥理學(xué)研究，E-mail：gxmyszm@163.com。

R291.8

A

1006-6810(2017)03-0042-03