HPLC法測定蒙藥材牧馬豆不同部位中綠原酸的含量

杜 鵑

(內蒙古自治區(qū)中醫(yī)醫(yī)院，內蒙古 呼和浩特 010020)

HPLC法測定蒙藥材牧馬豆不同部位中綠原酸的含量

杜 鵑

(內蒙古自治區(qū)中醫(yī)醫(yī)院，內蒙古 呼和浩特 010020)

目的：HPLC法測定藥材牧馬豆不同藥用部位中綠原酸的含量，建立藥材質量評價方法。方法：HPLC法測定，色譜柱Kromasi -C18 (4.6mm×200mm，5μm)，流動相乙腈-水-磷酸(12:88:0.2)，波長 328nm。結果： HPLC法綠原酸標準曲線濃度在7 ～140 μg·mL-1范圍內呈線性關系(r=0.999)，綠原酸平均回收率為105.7%，RSD=2.14%(n=6)，藥材不同部位含有綠原酸。結論藥材綠原酸含量，花葉0.34%,葉0.41%，莖0.21% ，根0.08%，平均含量0.26%。本方法測定簡便快捷，可作為藥材質量檢測指標之一。

HPLC法；牧馬豆；綠原酸

本品系民族醫(yī)習用藥材，蒙古名塔日布根-西給熱，為豆科植物牧馬豆Thermopsis lanceolata R.Br.，別名披針葉黃花、野決明。全區(qū)都有分布，生于草原沙丘、河岸和礫灘。牧馬豆全株能入藥。具有祛痰鎮(zhèn)咳、促進支氣管分泌，用于痰喘咳嗽，有小毒。全草浸劑有殺蟲、驅腸蟲作用。含生物堿0.5%～3%，主要有金雀花堿、鷹爪豆堿、黃酮類化合物，種子含生物堿5%[1]，綠原酸可作為藥材質量控制成分。

1 儀器與試劑

1.1 儀器：1100型高效液相色譜儀 (美國安捷倫公司)，TJ-912型色譜分析平臺(太極計算機公司)。

1.2 試藥：綠原酸對照品由中國藥品生物制品檢定所提供，乙腈為色譜純，其他試劑均為分析純，水為純化水；牧馬豆采自內蒙古和林格爾南天門林場。

2 實驗方法與結果

2.1 色譜條件： 色譜柱Kromasi -C18 (4.6mm×200mm，5μm)，流動相乙腈-3mL·L-1磷酸溶液(12︰88)，波長 328nm，進樣10μL。在此條件下樣品中綠原酸與其它組分有較好的分離，見圖1。

2.2 對照品溶液的制備： 精密稱取干燥至恒質量的綠原酸對照品適量，置棕色量瓶中，甲醇溶解，配制成1mL含0.28 mg 綠原酸溶液，作為對照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備：取本品花、葉、莖、根，粉碎，過100目篩，精密稱定80mg，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇10mL，稱質量，超聲處理50min ，放冷，稱重，用甲醇補足減失的質量，搖勻， 濾過，取續(xù)濾液備用，即得。

2.4 線性關系考察：分別精密量取綠原酸對照品溶液0.25，0.5，1，2，3，4和5mL，置于10mL量瓶內，用甲醇稀釋至刻度，按上述色譜條件進行測定。結果，在 7 ～140 μg·mL-1濃度范圍內以峰面積(A)與對照品質量濃度(C)進行回歸，其線性關系良好?；貧w方程：A=5452.5+7008.4 C， r=0.999。

2.5 穩(wěn)定性實驗： 取同一份供試品溶液(葉)，分別在0，1，2，4h進樣測定，以綠原酸峰面積值計算RSD=0.67%。結果表明，供試品溶液在4h內穩(wěn)定。

2.6 精密度實驗及重復性實驗： 吸取同一批供試品溶液(葉)，在上述色譜條件下重復進樣6次，測得綠原酸峰面積RSD=0.81%。取同批藥材(葉)按2.3項下平行制備6份樣品溶液，并按2.1項下測定，綠原酸的平均含量=0.41%， RSD=0.72%。

2.7 加樣回收率實驗： 取同批藥材地上部位已知含量的樣品6份，每份取約40mg，精密稱定，依次分別加入1mL(每mL含綠原酸0.16 mg)對照品溶液，按供試品溶液的制備操作，測定含量，計算回收率。綠原酸平均回收率為105.7%，RSD=2.14%。

3 樣品測定

取牧馬豆藥材不同部位，按2.3 項下方法制備供試品溶液，按擬定的色譜條件測定綠原酸含量，花0.34%,葉0.41%，莖0.21% ，根0.08%，平均含量0.26%。

4 討論

我區(qū)是牧馬豆主要產(chǎn)地,目前尚無含量測定標準。牧馬豆含有金雀花堿類化合物，藥材其他部位是否含有生物堿未見報道。牧馬豆抗氧化與保肝利膽作用與綠原酸藥理作用有一定的聯(lián)系，故綠原酸可以作為牧馬豆質量評價標準之一。牧馬豆不同藥用部位綠原酸含量，花0.34%,葉0.41%，莖0.21% ，根0.08%，平均含量0.26%。本文采用HPLC法測定牧馬豆綠原酸含量，方法簡便、快速、準確。

[1]內蒙古自治區(qū)衛(wèi)生局.內蒙古中草藥[M].呼和浩特：內蒙古人民出版社，1972，298-299.

2016年8月18日收稿

R291.2

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1006-6810(2017)01-0049-01